Báo cáo bài viết vi phạm bởi My Hoang

My Hoang · 12/2/19

My Hoang has reported a post.

Reason:

khi nhắn tải vào máy thì có một trang xuất hiện nhưng không có hiển thị. không tải được tài liệu
Bấm để mở rộng...

Post: Thạc Sĩ Xây dựng mô hình và thử nghiệm điều trị bệnh xơ hóa gan bằng liệu pháp tế bào gốc trên chuột nhắt trắng (Mus musculus var. Albino)
Forum: Khoa Học Tự Nhiên
Assigned Moderators: N/A

Posted by: Hư Trúc
Original Content:

MỞ ĐẦU

NGUYÊN NHÂN TIẾN HÀNH NGHIÊN CỨU [23] [25] [42] [48]
Theo thống kê của National Center for Health Statistics (2006) xơ gan và suy gan mạn là một trong những nguyên nhân gây tử vong hàng đầu ở các quốc gia trên thế giới, phổ biến đứng hàng thứ 12 ở Hoa Kỳ năm 2002, với 27,555 trường hợp tử vong (9,2/100,000 người). Có rất nhiều nguyên nhân dẫn đến xơ gan chẳng hạn như tiếp xúc với hóa chất công nghiệp, uống rượu hoặc nhiễm siêu vi B, C trong thời gian dài. Khoảng 70,000 công nhân ở 15 nước Châu Âu (CAREX, 1990-1993); 100,000 công nhân ở Mỹ (NOES, 1997) có khả năng phơi nhiễm với CCl4. Theo Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), Việt Nam nằm trong vùng dịch tễ cao, với tỷ lệ 15 - 20% dân số mang mầm bệnh viêm gan siêu vi B, khoảng 20% trường hợp viêm gan B chuyển thành xơ gan. Tổn thương ống mật cũng có thể gây xơ gan, như sự tắc ống mật cơ học, bệnh viêm xơ gan do tắc mật nguyên phát (primary bliary cirrhosis) và viêm xơ chai đường mật nguyên phát (primary sclerosing cholangitis) (Peter Fickert và cộng sự, 2007).
Hiện nay, ở Việt Nam điều trị bệnh xơ gan ở giai đoạn sớm, chủ yếu là dùng các thuốc chống xơ như Colchicine, Corticoids (trong viêm gan tự miễn), và một số thuốc khác đang nghiên cứu (HOE 007). Đối với xơ gan nặng, các tế bào gan bị hoại tử cao dẫn tới suy chức năng gan thì sự điều trị chỉ là giải quyết các biến chứng của xơ gan như cổ trướng, tăng huyết áp cửa gan
Biện pháp tối ưu và là hy vọng duy nhất đối với bệnh nhân xơ gan ở giai đoạn muộn là cấy ghép gan mới. Tuy nhiên, nhược điểm của phương pháp này là hiếm nguồn gan hiến tặng, chi phí cao và phải dùng thuốc ức chế miễn dịch để tránh thải loại. Năm 2005, chỉ có khoảng 1/3 trong danh sách 17,000 người chờ ghép gan được cấy ghép gan (Maggie H. và cộng sự, 2006). Vì vậy các nhà nghiên cứu trên thế giới đang gấp rút tìm ra các phương pháp điều trị mới. Trong đó, liệu pháp tế bào gốc đang được triển khai nghiên cứu ở nhiều nước và cho thấy tiềm năng hứa hẹn phục hồi chức năng gan (Isao Sakaida, 2006; M.T. Abdel Aziz và cộng sự, 2007; P. Burra và cộng sự, 2008; Scott V. Perryman và cộng sự, 2008 ). Xuất phát từ tính cấp thiết của đề tài, chúng tôi tiến hành nghiên cứu: Xây dựng mô hình và thử nghiệm điều trị bệnh xơ hóa gan bằng liệu pháp tế bào gốc trên chuột nhắt trắng (Mus musculus var. Albino).
MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU
- Xây dựng thành công mô hình xơ hóa gan trên chuột nhắt trắng bằng hóa chất.
- Đánh giá hiệu quả và vai trò của tế bào gốc trung mô trong điều trị xơ hóa gan trên chuột.
NỘI DUNG NGHIÊN CỨU
- Nội dung 1: Tạo mô hình xơ hóa gan chuột bằng CCl4 liều 0,8 ml/kg trong 8 tuần.
- Nội dung 2: Đánh giá hiệu quả gây xơ hóa gan của CCl4 liều 0,8 ml/kg, dựa trên các chỉ tiêu:
1. Xét nghiệm sinh hóa (hoạt độ ALT, AST).
2. Đánh giá mô học (nhuộm hematoxylin và eosin).
3. Đánh giá sự biểu hiện gen ở mức phiên mã (procollagen 1(I), integrin 1, ecto-5’-nucleotidase).
- Nội dung 3: Thu nhận và nuôi cấy tế bào gốc trung mô từ tủy xương chuột.
- Nội dung 4: Thu nhận quần thể tế bào đơn nhân tủy xương chuột.
- Nội dung 5: Đánh giá hiệu quả điều trị xơ hóa gan sau 3 tuần ghép tế bào gốc trung mô và quần thể tế bào đơn nhân tủy xương chuột, dựa trên các chỉ tiêu:
1. Xét nghiệm sinh hóa (hoạt độ ALT, AST).
2. Đánh giá mô học (nhuộm hematoxylin và eosin).
3. Đánh giá sự biểu hiện gen ở mức phiên mã (procollagen 1(I), integrin , ecto-5’-nucleotidase).
MỤC LỤC

DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT .i
DANH MỤC BẢNG .iv
DANH MỤC HÌNH .v
MỞ ĐẦU 1
CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3
1.1. SƠ LƯỢC VỀ GAN 3
1.1.1. Giới thiệu .3
1.1.2. Phôi học của gan 3
1.1.3. Cấu trúc gan .6
1.1.4. Khả năng tái sinh của gan 7
1.2. Xơ gan .9
1.2.1. Bệnh nguyên 9
1.2.2. Bệnh học 10
1.2.3. Bệnh sinh . 10
1.2.3.1. Cơ chế phát sinh xơ hóa ở gan 10
1.2.3.2. Các tế bào tiềm năng phát sinh xơ hóa khác 14
1.2.3.3. Tương tác giữa các loại tế bào trong phát sinh xơ hóa . 15
1.2.4. Chẩn đoán – xét nghiệm 16
1.2.4.1. Xét nghiệm sinh hóa . 16
1.2.4.2. Sinh thiết – xét nghiệm mô học . 18
1.2.5. Chữa trị . 19
1.2.5.1. Bằng thuốc 19
1.2.5.2. Ghép gan 20
1.3. Liệu pháp tế bào . 21
1.3.1. Cấy ghép tế bào gan . 22
1.3.2. Cấy ghép tế bào gốc gan ứng viên 22
1.3.2.1. Tế bào gốc gan thai . 23
1.3.2.2. Tế bào gốc gan trưởng thành . 23
1.3.2.3. Cấy ghép tế bào gốc không thuộc gan . 24
1.3.3. Tế bào gốc tủy xương 26
1.3.4. Tế bào gốc từ máu cuống rốn người . 31
1.3.5. Tế bào gốc từ mô mỡ . 32
1.4. Cơ sở lý thuyết gây độc gan của carbon tetrachloride 33
1.5. Cơ sở lý thuyết nghiên cứu sự biểu hiện collagen trong gan xơ hóa 36
1.6. Cơ sở lý thuyết nghiên cứu sự biểu hiện tế bào tổng hợp chất nền (integrin 1) trong gan xơ hóa 38
1.7. Cơ sở lý thuyết nghiên cứu sự biểu hiện enzym ecto-5’-nucleotidase trong gan xơ hóa . 39
CHƯƠNG 2. VẬT LIỆU – PHƯƠNG PHÁP . 42
2.1. Vật liệu 42
2.1.1. Đối tượng thí nghiệm . 42
2.1.2. Dụng cụ . 43
2.1.3. Thiết bị . 44
2.1.4. Hóa chất 45
2.2. Phương pháp nghiên cứu . 47
2.2.1. Mô hình gây tổn thương gan bằng CCl4 47
2.2.2. Phương pháp đánh giá hiệu quả gây xơ hóa gan của CCl4 . 48
2.2.2.1. Xác định hoạt độ enzym alanine transaminase, enzym aspartate transaminase trong huyết tương chuột . 48
2.2.2.2. Đánh giá cấu trúc mô học gan qua mẫu gan nhuộm hematoxylin và eosin 52
2.2.2.3. Đánh giá sự biểu hiện gen mã hóa cho procollagen α1(I), integrin 1, ecto- 5’-nucleotidase ở mức phiên mã 57
2.2.3. Phương pháp thu nhận và nuôi cấy sơ cấp tế bào gốc ứng viên từ tủy xương chuột . 62
2.2.4. Phương pháp khẳng định tế bào gốc ứng viên là tế bào gốc trung mô 64
2.2.4.1. Phương pháp xác định marker bằng Flow cytometer . 65
2.2.4.2. Phương pháp biệt hóa . 66
2.2.5. Phương pháp nhuộm tế bào bằng Trypan blue . 69
2.2.6. Phương pháp ghép tế bào gốc trung mô tủy xương, tế bào đơn nhân tủy xương điều trị xơ hóa gan trên chuột . 69
2.2.7. Phương pháp đánh giá hiệu quả điều trị xơ hóa gan của tế bào cấy ghép 72
2.2.8. Phương pháp xử lý số liệu 72
CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ – BIỆN LUẬN . 73
Phần I: KẾT QUẢ XÂY DỰNG MÔ HÌNH XƠ HÓA GAN CHUỘT BẰNG HÓA CHẤT CCL4 0,8 ML/KG
3.1. Kết quả xét nghiệm sinh hóa: hoạt độ enzym alanine transaminase (ALT),
enzym aspartate transaminase (AST) trong huyết tương 73
3.1.1. Hoạt độ ALT-AST sau 5 tuần xử lý với CCl4 liều 0,8 ml/kg 73
3.1.2. Hoạt độ ALT-AST sau 8 tuần xử lý với CCl4 liều 0,8 ml/kg 74
3.1.3. So sánh hoạt độ ALT-AST giữa tuần 5 và tuần 8 . 75
3.2. Kết quả nhuộm mô học hematoxylin và eosin . 77
3.2.1. Kết quả mô học sau 5 tuần xử lý với CCl4 liều 0,8 ml/kg 78
3.2.2. Kết quả mô học sau 8 tuần xử lý với CCl4 liều 0,8 ml/kg 80
3.3. Kết quả đánh giá sự biểu hiện gen mã hóa cho procollagen α1(I), integrin
1, ecto-5’-nucleotidase ở mức phiên mã . 83
3.3.1. Sự biểu hiện gen mã hóa cho procollagen α1(I) ở mức phiên mã . 83
3.3.2. Sự biểu hiện gen mã hóa cho intergrin ở mức phiên mã 85
3.3.3. Sự biểu hiện gen mã hóa cho ecto-5’-nucleoxidase ở mức phiên mã 87
Phần II: KẾT QUẢ THU NHẬN VÀ NUÔI CẤY TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ TỦY XƯƠNG CHUỘT
3.4. Kết quả thu nhận tế bào gốc trung mô ứng viên . 92
3.5. Kết quả đánh giá marker tế bào gốc trung mô ứng viên 95
3.6. Kết quả biệt hóa của tế bào gốc trung mô ứng viên thành tế bào xương và mỡ . 97
3.6.1. Kết quả biệt hóa của MSC ứng viên thành tế bào xương 97
3.6.2. Kết quả biệt hóa của MSC ứng viên thành tế bào mỡ . 98
Phần III: KẾT QUẢ ĐIỀU TRỊ BẰNG TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔ VÀ TẾ BÀO ĐƠN NHÂN TUỶ XƯƠNG
3.7. Kết quả xét nghiệm sinh hóa: hoạt độ enzym alanine transaminase (ALT), enzym aspartate transaminase (AST) trong huyết tương 100
3.8. Kết quả nhuộm mô học hematoxylin và eosin . 103
3.9. Kết quả đánh giá sự biểu hiện gen mã hóa cho procollagen α1(I), integrin  ecto-5’-nucleotidase ở mức phiên mã. 107
3.9.1. Sự biểu hiện gen mã hóa cho procollagen α1(I) ở mức phiên mã . 108
3.9.2. Sự biểu hiện gen mã hóa cho intergrin ở mức phiên mã 111
3.9.3. Sự biểu hiện gen mã hóa cho ecto-5’-nucleoxidase ở mức phiên mã 115
CHƯƠNG 4. KẾT LUẬN 121
DANH MỤC CÔNG TRÌNH CỦA TÁC GIẢ ix
TÀI LIỆU THAM KHẢO .x
PHỤ LỤC xviii
Bấm để mở rộng...

Diễn đàn

Báo cáo bài viết vi phạm bởi My Hoang

My Hoang New Member

Tải tài liệu

Diễn đàn

Chứng nhận bảo mật

Theo dõi chúng tôi

Tìm kiếm hữu ích

Báo cáo bài viết vi phạm bởi My Hoang

My Hoang New Member