Luận Văn Xác định quy trình ly trích dna từ lông heo

MỤC LỤC


TRANG


Lời cảm ơn . iii


Tóm tắt khóa luận v


Mục lục . vii


Danh sách các chữ viết tắt .x


Danh sách các bảng . xi


Danh sách các hình và biểu đồ . xii


PHẦN I. MỞ ĐẦU 1


1.1. Đặt vấn đề .1


1.2. Mục tiêu và yêu cầu 2


1.2.1. Mục tiêu .2


1.2.2. Yêu cầu 2


PHẦN II. TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3


2.1. Cấu trúc của lông 3


2.1.1. Cấu trúc tổng quan .3


2.1.2. Cấu trúc của melanin .4


2.1.3. Cấu trúc của keratin .4


2.1.4. Các liên kết trong lông 5


2.1.4.1. Liên kết cuộn xoắn A .5


2.1.4.2. Liên kết trong protein keratin .6


2.1.4.3. Liên kết hydrogen .6


2.1.4.4. Liên kết muối 6


2.1.4.5. Liên kết cystine .6


2.1.4.6. Liên kết đường 6


2.1.5. Chu kỳ phát triển của lông heo 6


2.2. Những công trình tách chiết DNA từ lông .7


2.2.1. Những công trình tách chiết DNA từ lông ở nước ngoài .7


2.2.2. Những công trình tách chiết DNA từ lông ở trong nước 9


2.3. Phản ứng PCR (polymerase chain reaction) .10


2.3.1. Nguyên tắc cơ bản của PCR 10


2.3.2. Những thành phần tham gia vào phản ứng PCR .10


2.4. Gen halothane .11


2.4.1. Khái quát về gen halothane .11


2.4.2. Ảnh hưởng của gen halothane .12


2.4.2.1. Ảnh hưởng của gen halothane đến năng suất sinh sản .12


2.4.2.2. Ảnh hưởng của gen halothane đến sinh trưởng và phẩm chất thịt .13


2.5. Những công trình nghiên cứu về halothane 13


2.5.1. Nguyên tắc xác định gen halothane .13


2.5.2. Những công trình nghiên cứu halothane ở nước ngoài .14


2.5.3. Những công trình nghiên cứu halothane trong nước .14


PHẦN III. NỘI DUNG VÀ PHưƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16


3.1. Nội dung nghiên cứu 16


3.2. Địa điểm và thời gian tiến hành 16


3.3. Vật liệu .16


3.3.1. Nguồn mẫu chiết xuất DNA 16


3.3.2. Đoạn mồi .16


3.3.3. Hóa chất .16


3.3.4. Dụng cụ và thiết bị dùng trong đề tài 17


3.3.4.1. Dụng cụ .17


3.3.4.2. Thiết bị 17


3.4. Phương pháp tiến hành .18


3.4.1. Lấy và trữ mẫu .18


3.4.2. Tách chiết DNA .19


3.4.2.1. Thiết lập quy trình ly trích DNA từ lông heo 19


3.4.2.2. Áp dụng quy trình ly trích DNA lên các vị trí khác nhau của lông heo20


3.4.3. Định lượng DNA bằng quang phổ kế 21

3.4.4. Thực hiện phản ứng PCR 21


3.4.5. Điện di và quan sát kết quả 22


3.4.5.1. Chuẩn bị gel agarose .22


3.4.5.2. Đọc kết quả 22


3.5. Xử lý số liệu .22


PHẦN IV. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .23


4.1. Thí nghiệm 1: Khảo sát nồng độ proteinase K .23


4.2. Thí nghiệm 2: Khảo sát nồng độ DTT 26


4.3. Thí nghiệm 3: Khảo sát nồng độ CTAB .27


4.4. Thí nghiệm 4: Áp dụng quy trình ly trích DNA lên các vị trí lông heo .29


PHẦN V. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 30


5.1. Kết luận .30


5.2. Đề nghị .30


VI. TÀI LIỆU THAM KHẢO .31


DANH SÁCH CÁC BẢNG


TRANG


Bảng 2.1. Đặc điểm các lớp của lông .3


Bảng 3.4. Thành phần hỗn hợp PCR xác định gen halothane 21


Bảng 3.5. Chu kỳ nhiệt trong PCR xác định gen halothane .22


Bảng 4.1. Tỷ số OD và hàm lượng DNA ứng với các nồng độ proteinase K .23


Bảng 4.2. Tỷ số OD và hàm lượng DNA ứng với các nồng độ DTT 24


Bảng 4.3. Tỷ số OD và hàm lượng DNA ứng với các nồng độ CTAB .25


Bảng 4.4a. Tỷ số OD và hàm lượng DNA ứng với các vị trí của lông heo 26


Bảng 4.4b. Kết quả PCR ứng với các vị trí lông heo 27


DANH SÁCH CÁC HÌNH VÀ BIỂU ĐỒ


TRANG


Hình 3.4. Phân chia các vị trí lấy mẫu trên sợi lông heo .18


Hình 4.1. Kết quả PCR mẫu gốc lông ở 3 nồng độ proteinase K 24


Hình 4.2. Kết quả PCR mẫu gốc lông ở 3 nồng độ DTT 25


Hình 4.3. Kết quả PCR mẫu gốc lông ở 3 nồng độ CTAB 26


Hình 4.4a. Kết quả PCR vị trí gốc lông 28


Hình 4.4b. Kết quả PCR vị trí thân lông .28


Hình 4.4c. Kết quả PCR vị trí cả sợi lông .29


Biểu đồ 4.1. Tỷ số OD và hàm lượng DNA ứng với các nồng độ proteinase K .23


Biểu đồ 4.2. Tỷ số OD và hàm lượng DNA ứng với các nồng độ DTT .24


Biểu đồ 4.3. Tỷ số OD và hàm lượng DNA ứng với các nồng độ CTAB .25


Biểu đồ 4.4. Tỷ số OD và hàm lượng DNA ứng với các vị trí của lông .27