Luận Văn Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của thuốc Natsol (kháng sinh thực vật) lên vi khuẩn E. ictal

MỤC LỤC
MỤC LỤC . 1
DANH SÁCH HÌNH . 3
DANH SÁCH BẢNG . 4
LỜI CẢM TẠ 5
TÓM TẮT 6
CHƯƠNG 1: GIỚI THIỆU . 7
CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU . 9
2.1 Bệnh do vi khuẩn E. ictaluri gây ra 9
2.1.1 Một số đặc điểm của vi khuẩn E. ictaluri .9
2.1.2 Phân bố của vi khuẩn E. ictaluri 9
2.2 Bệnh do vi khuẩn Aeromonas hydrophila .10
2.2.1 Một số đặc điểm về vi khuẩn Aeromonas hydrophila .10
2.2.2 Hình dạng khuẩn lạc 10
2.2.3 Hình dạng tế bào .10
2.2.4 Phân bố của Aeromonas hydrophila .11
2.2.5 Bệnh xuất huyết do vi khuẩn A. hydrophila .11
2.3 Cây thảo dược 12
2.3.1 Sơ lược về cây thảo dược .12
2.3.2 Một vài cây thuốc thảo dược và công dụng phòng trị bệnh thủy sản .12
2.3.3 Một số kết quả khoa học sử dụng cây thảo dược phòng và trị bệnh thủy sản 13
2.4 Natsol .14
2.5 Chloramphenicol 14
.14
CHƯƠNG 3: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .16
3.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu .16
3.1.1 Thời gian nghiên cứu .16
3.1.2 Địa điểm nghiên cứu .16
3.2 Vật liệu nghiên cứu 16
3.2.1 Hoá chất và môi ttrường 16
3.2.2 Thuốc kháng sinh 16
3.2.3 Dụng cụ thí nghiệm .16
3.2.4 Vi khuẩn thí nghiệm 17
3.3 Phương pháp nghiên cứu 17
3.3.1 Chuẩn bị nguyên liệu nghiên cứu .17
3.3.1.1 Chuẩn bị vi khuẩn .17
3.3.1.2 Chuẩn bị dung dịch thuốc kháng sinh 18
3.3.2 Thực hiện nghiên cứu 20
3.3.2.1 Nghiên cứu thăm dò .20
3.3.2.1 Phương pháp lập kháng sinh đồ 21
3.3.2.2 Phương pháp xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) trên môi trường thạch
(Lila Ruangpan, 2004): 22
3.3.2.3 Phương pháp xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) bằng phương pháp
pha loãng (Geert Huys, 2002): 23

CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ THẢO LUẬN 25
4.1 Kết quả nghiên cứu thăm dò khoảng nồng độ ức chế của thuốc kháng sinh thực
vật natsol lên vi khuẩn gây bệnh trên cá tra 25
4.2 Xác định nồng độ MIC .26
4.2 Kết quả kiểm tra kháng sinh đồ của thuốc natsol lên vi khuẩn E. ictaluri và A. hydrophila 27
4.3 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của thuốc Natsol lên vi khuẩn E. ictaluri và A. hydrophila bằng phương pháp pha loãng .28
4.3.1 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của thuốc Natsol lên vi khuẩn A. hydrophila 28
4.3.2 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của thuốc Natsol lên vi khuẩn E. ictaluri .30
4.2.3 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của thuốc Natsol lên vi khuẩn E. ictaluri và A. hydrophila bằng phương pháp thạch. 32
CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT . 35
5.1 Kết luận .35
5.2 Đề xuất .35
TÀI LIỆU THAM KHẢO 36
Phụ lục A: Pha dung dịch nhuộm gram vi khuẩn .41
Phụ lục B: Phương pháp nhuộm Gram vi khuẩn .42
Phụ lục C: Pha môi trường 43
Phụ lục D: Pha nước muối sinh lý và pha môi trường NB .44
Phụ lục E: Pha thuốc kháng sinh chloramphenicol và natsol 45

GIỚI THIỆU

Cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) là loài cá da trơn nước ngọt được nuôi phổ biến ở Đồng Bằng Sông Cửu Long (ĐBSCL). Từ những năm 1998-2000 thành công trong nghiên cứu “Quy trình kỹ thuật sinh sản nhân tạo và ương nuôi cá tra thương phẩm” của Khoa Thuỷ sản - Đại học Cần Thơ, đẩy mạnh phong trào nuôi cá tra thương phẩm phát triển ở vùng ĐBSCL, năng suất và sản lượng nuôi không ngừng tăng. Theo Dương Nhật Long (2006) thì sản lượng cá tra năm 1994 đạt 30.000 tấn, năm 2001 đạt 150.000 tấn, năm 2002 đạt 200.000 tấn, năm 2003 đạt 220.000 tấn, năm 2004 đạt trên 300.000 tấn, năm 2005 đã vượt qua 500.000 tấn. Song bên cạnh mặt thuận lợi còn tồn tại những vấn đề khó khăn, đó là tình hình bệnh trên cá tra nuôi. Trong nhiều năm qua người nuôi cá tra bị thiệt hại khá lớn do dịch bệnh xảy ra, như bệnh đốm đỏ, trắng da, phù đầu phù mắt, bệnh do ký sinh trùng ngoại ký sinh (Ferguson & ctv,
2001). Theo Lương Trần Thục Đoan (2006) bệnh trắng gan (còn gọi là bệnh mủ gan) do vi khuẩn Edwardsiella ictaluri (E. ictaluri) gây ra là bệnh phổ biến, xuất hiện hầu như quanh năm ở cá tra, gây thiệt hại nghiêm trọng trong nuôi cá Aeromonas hydrophila (A. hydrophila) gây ra trên nhiều loài cá nước ngọt trong đó có cá tra nuôi (Từ Thanh Dung, 2005).

Từ Thanh Dung (1996) cho rằng bệnh vi khuẩn là một vấn đề quan trọng trong nuôi trồng thuỷ sản, việc điều trị chủ yếu bằng hoá chất hoặc sử dụng thuốc kháng sinh penicillin, streptomycin, chloramphenicol, oxytetracylin, tetracylin Tuy nhiên sử dụng hoá chất phòng và trị bệnh vi khuẩn trong thời gian dài, đặc biệt là kháng sinh lại gặp nhiều khó khăn, như giá thành các loại thuốc kháng sinh cao, lại gây ra hiện tượng kháng thuốc của các tác nhân gây bệnh, làm giảm hiệu quả phòng và trị bệnh về sau. Thêm vào đó là vấn đề ô nhiễm môi trường nước, tích tụ dư lượng kháng sinh trong sản phẩm thuỷ sản ảnh hưởng đến chất lượng sản phẩm xuất khẩu, nhất là không tốt cho sức khoẻ người tiêu dùng. Theo Direkbusarakom (1995), một giải pháp phòng trị khác là sử dụng cây thảo dược điều trị bệnh vi khuẩn trong thuỷ sản, tuy hiệu quả không nhanh chóng nhưng khắc phục được những khó khăn đã gặp khi sử dụng hóa chất và thuốc kháng sinh. Vì vậy, ở Thái Lan, Trung Quốc, Ấn Độ kể cả Việt Nam, một vài cây thảo dược có sẵn trong tự nhiên được dùng làm dược phẩm cho người và gia súc, cũng được thử nghiệm làm thuốc trị bệnh trong ngành thuỷ sản (Sivarajan, 1994). Chất chiết cây đậu (Clinacanthus nutans) ức chế bệnh Yellowhead Baculovirus trên tôm sú (Penaeus monodon)

(Direkbusarakom & ctv, 1995). Theo Kamei (1988) cho rằng chiết suất thảo dược từ cây ổi (Psidium guajava) phòng trị được bệnh vi rút như IHNV, IPNV, OMV trên cá. Từ Thanh Dung (1996) đã nghiên cứu thành công ảnh hưởng của cây thảo dược lên vi khuẩn A. hydrophila gây bệnh xuất huyết trên cá trê lai (Clarias macrocephalus x C.gariepinus). Hiện nay vẫn chưa có nhiều tài liệu khoa học đề cập đến cách phòng trị bệnh cá tra bằng thảo dược. Vì vậy, để làm phong phú thêm cho phương pháp điều trị cũng như làm đa dạng danh mục thuốc phòng trị bệnh cho cá là lý do chính để đề tài “Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của thuốc Natsol (kháng sinh thực vật) lên vi khuẩn E. ictaluri và A. hydrophila” được thực hiện.

Mục tiêu nghiên cứu
Xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của thuốc Natsol lên vi khuẩn A. hydrophila và E. ictaluri.
Nội dung nghiên cứu
Kiểm tra nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) bằng phương pháp pha loãng và môi trường thạch trên vi khuẩn A. hydrophila và E. ictaluri.