Luận Văn Xác định gen gây độc và tính đa dạng di truyền của nấm Metarrhizium anisopliae ký sinh trên côn trùn

TÓM TẮT


Đề tài nghiên cứu: “Xác định gen gây độc Pr1 và tính đa dạng di truyền đoạn gen Pr1của nấm Metarrhizium anisopliae trên côn trùng gây hại” được thực hiện từ ngày 14 tháng 2 năm 2005 đến ngày 1 tháng 8 năm 2005 tại trường Đại Học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh.
Đề tài do Huỳnh Ngọc Phương thực hiện dưới sự hướng dẫn của ThS. Võ Thị Thu Oanh và TS. Lê Đình Đôn.
Đối tượng nghiên cứu là nấm Metarrhizium anisopliae ký sinh trên côn trùng
gây hại. Nấm này có tác dụng tiết ra độc tố làm ngừng nhu động ruột, phá vở các hoạt
động bình thường của côn trùng dẫn đến côn trùng bị chết khô. Hiện nay nấm
Metarrhizium anisopliae đã xuất hiện khắp nơi trong nước và đã góp phần không nhỏ
vào việc tạo ra các chế phẩm vi sinh dùng diệt côn trùng gây hại trên cây trồng. Nấm
Metarrhizium anisopliae và nấm Beauveria bassiana được xem như những yếu tố
kiểm soát sinh học góp phần tạo nên nền nông nghiệp sạch và bền vững.
Mục đích đề tài nhằm xác định đoạn gen gây độc Pr1 của những dòng nấm Metarrhizium anisopliae ở cấp độ phân tử giúp chọn lọc đúng những dòng nấm Metarrhizium anisopliae có tính độc đảm bảo hoạt tính diệt côn trùng lâu dài và hiệu quả. Ngoài ra còn cung cấp những thông tin về tính đa dạng của gen Pr1 nhằm giúp cho việc phát hiện gen Pr1 được dễ dàng hơn.
Các nội dung nghiên cứu bao gồm:
1. Phân lập và tách chủng nấm Metarrhizium anisopliae trên một số sâu hại ngoài đồng ruộng.
2. Dùng kỹ thuật PCR phát hiện gen protease (Pr1) liên quan đến tính độc của nấm Metarrhizium anisopliae.
3. Giải trình tự đoạn gen Pr1 và so sánh trình tự này với các mẫu trên ngân hàng gen thế giới (genbank).
Kết quả thu được như sau:
1. Phân lập được 12 nguồn nấm ký sinh trên nhiều côn trùng khác nhau như: bọ
xít đen, bọ dừa, rầy nâu, sâu cuốn lá lúa, rầy bông cúc ở các tỉnh: Tiền Giang, Long
An, Bến Tre, Trà Vinh, Tây Ninh, Quận 9 thành phố Hồ Chí Minh, Quận 2 thành phố
Hồ Chí Minh.
2. Sử dụng kỹ thuật PCR đã cho phép phát hiện gen Pr1có kích thước 1.5 kb với cặp mồi METPR1/METPR4. Với 12 dòng nấm phân lập được, tôi đã phát hiện ra 5 dòng (BXĐTG1, BXĐTV7, BXĐLA3, RBCQ915, RBCQ92) là có gen Pr1.
3. Kết quả đọc trình tự cho thấy có một số sai khác giữa các dòng nấm Metarrhizium anisopliae của Việt Nam và thế giới. Tuy nhiên, hai mẫu nấm được giải trình tự là BXĐTG1 và BXĐTV7 không thấy có sự khác biệt.
4. Độ tương đồng của gen Pr1 của hai mẫu BXĐTG1 và BXĐTV7 so với các mẫu trên genbank khá cao (96 - 99.8%).
Những kết quả trong nghiên cứu thể hiện tính hiện đại qua sự kết hợp của công
nghệ gen và công nghệ vi sinh - là hai công nghệ nền của công nghệ sinh học hiện đại.
Kết quả nghiên cứu này sẽ góp phần nhất định trong việc thúc đẩy triển khai nghiên cứu, ứng dụng công nghệ sinh học hiện đại không những phục vụ trực tiếp cho công tác chọn giống vi sinh, mà còn phục vụ cho công tác bảo vệ thực vật trên thực tế.
MỤC LỤC