Thạc Sĩ Xác định chỉ thị phân tử cho các dòng hoa cúc đột biến do chiếu xạ và đánh giá tính ổn định di truyề

Mục tiêu của đề tài
- Áp dụng kỹ thuật sinh học phân tử để xác định chỉ thị phân tử cho các dòng hoa cúc mới thu nhận được nhờ kỹ thuật bức xạ gây tạo giống.
- Khảo sát và đánh giá tính ổn định di truyền của các giống mới được tạo ra nhờ kỹ thuật chiếu xạ gây đột biến qua các thế hệ in vitro.
3
Mục đích và ý nghĩa của đề tài
Về lý luận khoa học, việc xác định chỉ thị phân tử đặc trưng cho từng dòng cúc đột biến phát sinh từ các giống cúc nguyên liệu giúp khẳng định sự khác biệt về mặt di truyền của chúng so với giống nguyên liệu và các giống khác. Sự ổn định di truyền của chúng qua các thế hệ giúp khẳng định chúng sẽ tồn tại lâu dài như một giống mới hoàn toàn, khác biệt lâu dài về cả hình thái lẫn bộ máy di truyền so với giống gốc. Từ đó khẳng định r ng, phương pháp chiếu xạ gây đột biến là một trong những phương pháp có hiệu quả rõ ràng trong việc chọn tạo giống mới cho cây trồng nói chung và hoa cúc nói riêng. Kết quả này cũng là cơ sở cho các nhà khoa học đăng ký giống mới.
Về thực tiễn, phương pháp chiếu xạ đột biến sẽ giúp các nhà khoa học, các nhà sản xuất của Việt Nam có một công cụ hữu hiệu trong việc tạo ra nguồn nguyên liệu để chọn ra các giống mới đáp. Một khi đảm bảo được tính cạnh tranh với các giống ngoại nhập, các nhà sản xuất sẽ giảm thiểu việc nhập nội giống từ nước ngoài, và thậm chí có thể tiếp cận với thị trường xuất khẩu.
Tóm tắt kết quả đã đạt được
- Đã xác định được chỉ thị phân tử RAPD cho các dòng hoa cúc đột biến tiềm năng và các giống đối chứng của chúng.
- Đã khảo sát sự ổn định di truyền của các dòng cúc đột biến và đối chứng của chúng qua 7 thế hệ in vitro. Kết quả cho thấy bộ máy di truyền của chúng ổn định.
- Ngoài việc xác định tính ổn định di truyền b ng kỹ thuật phân tử, các dòng hoa cúc đột biến tiềm năng cũng đã được theo dõi sự ổn định của kiểu hình qua 3 thế hệ trồng ngoài đồng. Kết quả, kiểu hình của những dòng đột biến tiềm năng biểu hiện ổn định.

MỤC LỤC
Trang phụ bìa i
Lời cảm ơn ii
Mục lục iii
Danh mục từ viết tắt . v
Danh mục bảng biểu vi
Danh mục hình . vii
Lời mở đầu 1
Chương 1: Tổng quan tài liệu . 4
1.1 Hoa cúc và việc chọn tạo giống đột biến . 4
1.2 Chỉ thị phân tử 5
1.3 RAPD . 6
1.4 Bức xạ tạo giống . 7
1.4.1 Sơ lược lịch sử chọn tạo giống cây trồng . 7
1.4.2 Một số thành tựu của thế giới 9
1.4.3 Tình hình thực tiễn ở Việt Nam . 10
Chương 2: Đối tượng, vật liệu và các phương pháp nghiên cứu . 13
2.1 Đối tượng, vật liệu nghiên cứu 13
2.1.1 Đối tượng, vật liệu xác định chỉ thị phân tử . 13
2.1.2 Đối tượng, vật liệu khảo sát và đánh giá tính ổn định di truyền của các dòng cúc đột biến qua các thế hệ in vitro . 17
2.2 Các phương pháp nghiên cứu 19
2.2.1 Tạo vật liệu nghiên cứu . 19
2.2.2 Tách chiết DNA . 20
2.2.3 RAPD-PCR . 22
2.2.4 Điện di trên gel agarose . 23
2.2.5 Thống kê phân tích số liệu . 23
2.2.6 Thiết bị, dụng cụ, hóa chất 23
Chương 3: Kết quả và biện luận 25
3.1 Kết quả xác định chỉ thị phân tử 25
IV
3.1.1 Kết quả tách chiết DNA . 25
3.1.2 Kết quả phản ứng RAPD . 25
3.1.3 Kết quả phân tích đa dạng di truyền 3 giống cúc và các dòng đột biến phát sinh từ chúng 27
3.1.4 Kết quả xác định chỉ thị RAPD cho các dòng cúc 29
3.2 Kết quả khảo sát tính ổn định di truyền của 3 giống cúc và các đột biến phát sinh từ chúng qua các thế hệ in vitro . 33
3.2.1 Kết quả tách chiết DNA . 33
3.2.2 Kết quả phản ứng RAPD . 34
3.2.3 Kết quả khảo sát và đánh giá tính ổn định di truyền của các dòng cúc nghiên cứu qua các thế hệ in vitro 37
Chương 4: Kết luận và đề nghị . 41
4.1 Kết luận 41
4.2 Đề nghị . 42
Tài liệu tham khảo . 43
Phụ lục 46
Phụ lục 1: Tạo vật liệu nghiên cứu 46
Phụ lục 2: Sàng lọc đột biến 48
Phụ lục 3: Phân tích kết quả RAPD cho từng mồi trong thí nghiệm xác định chỉ thị phân tử cho các dòng đột biến 50
Phụ lục 4: Ma trận thống kê các băng điện di trong thí nghiệm xác định chỉ thị phân tử 64
Ảnh điện di 24 mẫu khảo sát tính ổn định di truyền qua các thế hệ in vitro với 14 mồi RAPD . 72