Luận Văn Ứng dụng phương pháp vi nhân giống trong bảo tồn giống cây Thủy Tùng (Glyptostrobus pensilis (Staunt

ỨNG DỤNG PHƯƠNG PHÁP VI NHÂN GIỐNG TRONG BẢO TỒN GIỐNG
CÂY THUỶ TÙNG [Glyptostrobus pensilis (Staunton ex) K.Koch]
USING IN VITRO PROPAGATION TO PRESERVE Glyptostrobus pensilis (Staunton ex.) VARIETY
Nguyễn Thanh Sum, Phạm Ngọc Tuân, Nguyễn Văn Kết
Khoa Nông Lâm – Trường Đại học Đà Lạt – Email: [email protected]
ABSTRACT
Shoots tip of Glyptostrobus pensilis (Staunton
ex.) were cultured on woody plant medium (WPM)
supplemented with benzyladenine (BA-0.5mg/l),
8g/l agar and 30g/l succrose being most effective
multiplied in vitro. Rooting was induced in WPM
supplemented with 0.5 mg/l indole-3-butyric acid
(IBA). By contrast, increasing BA up to 1.5mg/l,
calluss become more large and microcuttings also
showed reduced rooting capacity.
Key words: Glyptostrobus pensilis, in vitro, BA, IBA
ĐẶT VẤN ĐỀ
Thuỷ tùng (Glyptostrobus pensilis (Staunton
ex) K. Koch) là loài cây có giá trị cao về mặt khoa
học và kinh tế. Ngày nay, theo điều tra nhận
thấy Thuỷ tùng chỉ còn phân bố ở một số tỉnh của
Trung Quo ác như Phu ùc Kie án, Va ân Nam và Kha êm
Muộn (Lào). Tại Việt Nam, Thuỷ tùng được phát
hiện lần đầu tiên vào năm 1955 ở buôn Mil, xã
Eahồ, cách Buôn Mê Thuộc 45km về phía Đông
Ba éc. Hie än chỉ co øn la ïi 32 ca ây ơ û vu øng Tra áp Ksor,
Huyện Krôngnăng và đập Eađra, xã Eawy, huyện
EaH’leo. (Nguye ãn Hoa øng Nghĩa, 1997).
Loài cây này bị đe doạ tuyệt chủng, không phải
vì phân bố hẹp và số cá thể còn lại quá ít mà vì quá
trình tái sinh tự nhiên rất kém, cùng với sự gia tăng
về dân số nên môi trường sống đang bị xâm phạm
và thu hẹp.Việc nhân giống thành công cây thuỷ
tùng bằng phương pháp nuôi cấy mô sẽ mở ra một
triển vọng mới trong trong công tác bảo tồn nguồn
gen cây rừng, bên cạnh đó việc áp dụng kỹ thuật
công nghệ sinh học trong nghiên cứu sẽ đem lại cho
ngành lâm nghiệp những hướng phát triển có nhiều
triển vọng mới. Nghiên cứu hướng tới là xác định
được môi trường phù hợp cũng như hàm lượng các
Auxin, Cytokynin thích hợp cho sinh trưởng và phát
triển của cây Thuỷ tùng trong môi trường in vitro
thông qua việc ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô.
VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
Vật liệu
Mẫu cấy là chồi ngọn và đốt thân của cây Thuỷ
tùng.
Nội dung
- Khảo sát thời gian và nồng độ chất khử trùng
mẫu Thuỷ tùng
- Khảo sát môi trường khoáng thích hợp cho
sự tăng trưởng chồi Thuỷ tùng nuôi cấy in vitro
- Khảo sát ảnh hưởng của BA đến khả năng
hình thành cụm chồi Thuỷ tùng nuôi cấy in vitro
- Ảnh hưởng của hàm lượng đường và agar
lên sự sinh trưởng, phát triển của chồi Thuỷ tùng
nuôi cấy in vitro
- Khảo sát ảnh hưởng của bình nuôi cấy có và
không có trao đổi khí trong giai đoạn nhân nhanh
chồi Thuỷ tùng nuôi cấy in vitro
- Nghiên cứu ảnh hưởng của IBA và NAA đến
sự sinh trưởng của cây Thuỷ tùng in vitro
Phương pháp nghiên cứu
Các chồi ngọn và đốt thân được rửa sạch rồi cắt
thành các đoạn non dài 2-3 cm sau đó tiến hành
khử trùng với các nồng độ khác nhau.
Sau khi khử trùng, mẫu được cắt thành từng
mẫu nhỏ có chứa đỉnh sinh trưởng, hoặc các chồi
non, kích thước từ 3 đến 5 mm, sau đó được đưa
vào bình cấy có chứa các môi trường thích hợp như
MS, WPM . Sau 2 tuần nuôi cấy các mẫu
Tất cả các thí nghiệm được tiến hành trong tủ
cấy vô trùng. Môi trường và các dụng cụ nuôi cấy
đều được vô trùng ở 120o
C trong vòng 30 phút,
bình nuôi cấy là các bình thuỷ tinh được đậy kín
bằng nắp nhựa và được bịt kín bằng băng keo nhằm
ngăn cản sự trao đổi khí với môi trường ngoài, và
các hộp nhựa 500ml được đậy kín, mỗi bình nuôi
cấy được cấy 5 mẫu
Các thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên
(CRD) với 3 lần lặp lại, mỗi nghiệm thức cấy trong
5 bình thuỷ tinh (hay hộp nhựa 500ml), mỗi bìn