Luận Văn ỨNG DỤNG KỸ THUẬT RT-PCR PHÁT HIỆN VIRUS PMWaV-1 (Pineapple mealybug wilt associated virus-1) GÂY BỆ

TÓM TẮT


Đối tượng nghiên cứu của đề tài là virus PMWaV-1 gây bệnh héo đỏ đầu lá trên


cây dứa Cayenne.


Nội dung nghiên cứu gồm:


* Kiểm tra virus PMWaV-1 ở cây dứa in vitro được tái sinh từ đỉnh sinh trưởng


0

đã qua xử lý nhiệt ở 37 C trong thời gian 40 ngày và 50 ngày bằng kỹ thuật RT-


PCR.


* Khảo sát sự tăng trưởng của cây dứa in vitro sạch virus PMWaV-1 và các chồi


dứa nhân giống vô tính khác trong vườn ươm.


* Kiểm tra virus PMWaV-1 ở cây dứa in vitro và các chồi dứa nhân giống vô tính


khác sau 70 ngày trồng trong vườn ươm.


Các kết quả thu được:


* Tỉ lệ cây dứa in vitro sạch virus PMWaV-1 ở thời gian xử lý nhiệt 40 ngày là


77,78%; ở thời gian xử lý nhiệt 50 ngày là 88,89%.


* Cây dứa in vitro tăng trưởng chiều cao chậm hơn so với các chồi dứa nhân


giống vô tính khác.


* Chồi dứa tạo ra từ thân chẻ 4 có số lá nhiều nhất, kế đến là chồi dứa tạo ra từ


thân cắt khoanh, cây dứa in vitro, cuối cùng là chồi dứa tạo ra bằng cách giâm


lá.


* Sau 70 ngày trồng trong vườn ươm, 100% cây dứa in vitro được kiểm tra đều


sạch virus PMWaV-1, tỉ lệ nhiễm virus PMWaV-1 của các chồi dứa nhân giống


ngoài đồng là 14,81%.


MỤC LỤC


TRANG


Lời cảm ơn i


Tóm tắt .ii


Summary .iii


Mục lục .iv


Danh sách các bảng .vii


Danh sách các hình .viii


Danh sách các chữ viết tắt ix


Phần 1. GIỚI THIỆU 1


1.1. Đặt vấn đề . 1


1.2. Mục đích – yêu cầu của đề tài 1


1.3. Giới hạn của đề tài 2


Phần 2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3


2.1. Đặc điểm thực vật học của cây dứa 3


2.2. Các nhóm dứa chính .4


2.2.1. Nhóm Cayenne .4


2.2.2. Nhóm Queen 4


2.2.3. Nhóm Tây Ban Nha . 5


2.3. Các giống dứa phổ biến ở Việt Nam 5


2.4. Bệnh héo do virus . 7


2.4.1. Tác hại 7


2.4.2. Nguyên nhân gây bệnh . 8


2.4.3. Triệu chứng 8


2.4.4. Tác nhân lây truyền bệnh . 9


2.4.5. Cách phòng trị 10


2.5. Phương pháp tạo cây sạch virus . 11


2.5.1. Cơ sở của các phương pháp tạo cây sạch virus . 11


2.5.2. Các phương pháp tạo cây sạch virus 11


2.6. Các phương pháp nhân giống dứa 14


2.6.1. Nhân giống bằng phương pháp nuôi cấy mô . 14


2.6.2. Nhân giống bằng cách kích thích chồi ngủ phát triển 15


2.7. Gene hsp-70 của PMWaV 16


2.8. Một số phương pháp giám định virus trên thực vật . 17


2.8.1. Phương pháp dùng kính hiển vi điện tử . 17


2.8.2. Các phương pháp sinh học phân tử 17


2.9. Các phương pháp phát hiện PMWaV . 20


2.10. Một số nghiên cứu về bệnh héo đỏ đầu lá trên thế giới và ở Việt Nam . 20


Phần 3. NỘI DUNG, VẬT LIỆU VÀ PHưƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . 23


3.1. Nội dung, thời gian và địa điểm . 23


3.1.1. Nội dung . 23


3.1.2. Thời gian và địa điểm nghiên cứu . 23


3.2. Nội dung 1: Kiểm tra virus PMWaV-1 trên cây dứa in vitro tái sinh từ đỉnh


sinh trưởng đã qua xử lý nhiệt . 23


3.2.1. Vật liệu . 23


3.2.2. Hóa chất . 24


3.2.3. Cách tiến hành 25


3.2.3.1. Ly trích RNA tổng số 25


3.2.3.2. Phản ứng RT-PCR . 27


3.2.3.3. Điện di kiểm tra sản phẩm RT-PCR 28


3.2.3.4. Nhân giống cây dứa in vitro sạch virus PMWaV-1 trong phòng thí


nghiệm 29


3.3. Nội dung 2: Khảo sát sự tăng trưởng của cây dứa in vitro sạch virus PMWaV-1


và cây dứa được tạo ra bằng các phương pháp vô tính khác . 30


3.3.1. Vật liệu . 30


3.3.2. Cách tiến hành 30


3.3.3. Chỉ tiêu theo dõi . 33


3.4. Nội dung 3: Kiểm tra virus PMWaV-


trong vườn ươm . 33


3.4.1. Mẫu kiểm tra 33


3.4.2. Thiết bị, dụng cụ và cách tiến hành . 33


Phần 4. KẾT QUẢ - THẢO LUẬN . 34


4.1. Kết quả kiểm tra virus PMWaV-1 trên cây dứa in vitro tái sinh từ đỉnh sinh trưởng


đã qua xử lý nhiệt 34


4.2. Khảo sát sự tăng trưởng của cây dứa in vitro sạch virus PMWaV-1 so với các


cây dứa được tạo ra bằng các phương pháp nhân giống vô tính khác . 35


4.2.1. Chiều cao 35


4.2.2. Số lá 37


4.3. Kiểm tra virus PMWaV-1 trên cây dứa Cayenne sau 70 ngày trồng trong


vườn ươm . 39


Phần 5. KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ . 41


5.1. Kết luận .41


5.2. Đề nghị .42


TÀI LIỆU THAM KHẢO . 43


PHỤ LỤC