Luận Văn Ứng dụng kỹ thuật PCR để chẩn đoán bệnh Leptospirosis ở lợn tại Đắk Lắk và Bình Định

Đồ án tốt nghiệp năm 2012
Đề tài: Ứng dụng kỹ thuật PCR để chẩn đoán bệnh Leptospirosis ở lợn tại Đắk Lắk và Bình Định


MỤC LỤC
LỜI CẢM ƠN . iii
MỤC LỤC . iv
DANH MỤC HÌNH, SƠ ĐỒ . viii
DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT . ix
LỜI NÓI ĐẦU .1
1.1. TỔNG QUAN VỀ LEPTOSPIRA 3
1.1.1. Phân loại Leptospira . 3
1.1.1.1. Phân loại khoa học . 3
1.1.1.2. Phân loại theo cấu trúc kháng nguyên 3
1.1.2. Các đặc điểm sinh học của Leptospira . 5
1.1.2.1. Đặc điểm cấu tạo 5
1.1.2.2. Đặc điểm hình thái của Leptospira . 6
1.1.2.3. Đặc điểm nuôi cấy 6
1.1.2.4. Sức đề kháng của Leptospira . 7
1.1.2.5. Một số yếu tố độc lực của Leptospira . 7
1.2. MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ HỌC CỦA LEPTOSPIRA 9
1.2.1. Vật mang mầm bệnh . 9
1.2.2. Con đường lây nhiễm của bệnh Leptospirosis . 10
v
1.2.3. Cơ chế sinh bệnh 12
1.2.4. Một số đặc điểm bệnh học và lâm sàn của bệnh Leptospirosis ở lợn
và người 13
1.2.4.1. Bệnh Leptospirosis ở lợn . 13
1.2.4.2. Bệnh Leptospirosis ở người 14
1.3. MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP CHẨN ĐOÁN BỆNH
LEPTOSPIROSIS . 15
1.3.1. Chẩn đoán vi khuẩn học . 15
1.3.2. Chẩn đoán huyết thanh học 17
1.3.3. Sử dụng phương pháp sinh học phân tử . 17
1.4. MỘT SỐ NGHIÊN CỨU VỀ BỆNH LEPTOSPIROSIS TRÊN
LỢN TẠI VIỆT NAM 18
Chương 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19
2.1. ĐỐI TƯỢNG, THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU . 19
2.1.1. Thời gian cứu 19
2.1.2. Địa điểm nghiên cứu 19
2.1.3. Đối tượng nghiên cứu 19
2.2. NGUYÊN LIỆU NGHIÊN CỨU 19
2.2.1. Vật liệu 19
2.2.2. Môi trường, hóa chất . 19
2.2.3. Kháng nguyên chuẩn . 20
vi
2.2.4. Thiết bị, dụng cụ thí nghiệm . 21
2.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22
2.3.1. Phương pháp lấy mẫu . 22
2.3.2. Phương pháp phát hiện Leptospira trong mẫu bệnh phẩm 23
2.3.2.1. Chiết tách DNA 24
2.3.2.2. Chuẩn hóa phản ứng PCR 27
2.3.2.3. Phát hiện Leptospira trong mẫu bệnh phẩm . 31
2.3.2.4. Phương pháp điện di . 32
2.4. PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ SỐ LIỆU 33
Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34
3.1. CHUẨN HÓA PHẢN ỨNG PCR . 34
3.1.1. Xác nhận giá trị của phương pháp PCR . 34
3.1.2. Kết quả kiểm tra độ nhạy của phản ứng . 34
3.1.3. Kết quả xác định tính đặc hiệu của phản ứng PCR . 36
3.2. KẾT QUẢ PCR TRÊN MẪU DNA . 38
Chương 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 43
4.1. KẾT LUẬN . 43
4.2. KIẾN NGHỊ 43
DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO 44
PHỤ LỤC 51
vii
DANH MỤC BẢNG
Bảng 1.1. Một số serogroup thường gặp của các loài Leptospira 3
Bảng 2.1. Danh sách các serovar Leptospira dùng trong chuẩn hóa PCR .20
Bảng 2.2. Kết quả thu mẫu bệnh phẩm thận lợn 23
Bảng 2.3. Trình tự nucleotide các cặp mồi dùng trong phản ứng PCR .30
Bảng 2.4. Thành phần phản ứng PCR .30
Bảng 2.5. Bảng kết quả số liệu sau khi chạy PCR 33
Bảng 3.1. Kết quả xác định độ nhạy của phản ứng PCR .35
Bảng 3.2. Kết quả xác định tính đặc hiệu của phản ứng PCR 36
Bảng 1. Kết quả sử dụng hàm CHITEST xác định sự có nghĩa của kết quả
thống kê 51
viii
DANH MỤC HÌNH, SƠ ĐỒ
Hình 1.1. Hình Leptospira Icterohaemorrhagiae chụp dưới kính hiển vi điện tử
.6
Hình 2.1. Sơ đồ các bước thực hiện để phát hiện bệnh Leptospirosis ở lợn 23
Hình 2.2. Nguyên lý phản ứng PCR .28
Hình 2.3. Chu trình nhiệt của phản ứng PCR 31
Hình 3.1. Sản phẩm phản ứng PCR trên thạch agarose 34
Hình 3.2. Sản phẩm phản ứng PCR xác định giới hạn nồng độ DNA 35
Hình 3.3. Sản phẩm phản ứng PCR xác định tính đặc hiệu 37
Hình 3.4. Kết quả PCR mẫu DNA tách chiết từ thận ở lấy mẫu ở các lò mổ tại
Buôn Hồ - Đắk Lắk 39
Hình 3.5. Kết quả PCR mẫu DNA tách chiết từ thận ở lấy mẫu ở các lò mổ tại
Phù Cát – Bình Định 40
ix
DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT
LPS : Lipopolysaccharide
MAT : Microscopic Agglutination Test
RFLP : Restriction Fragment Length Polymorphism
VNRT : Variable Number of Tandem Repeats
EMJH : Ellinghausen, Mc Cullough, Johnson, Harris
ELISA : Enzyme Linked Immunosorbent Assay
IF : Immuno Fluorescence
PCR: Polymerase Chain Reaction
1
LỜI NÓI ĐẦU
Tình hình chăn nuôi gia súc năm 2011 và đầu năm 2012 tương đối ổn định,
nhưng cũng đã đối mặt với nhiều dịnh bệnh cũ và mới như heo tai xanh, lở mồm
long móng, tiêu chảy ở đàn gia súc. Đặc biệt bệnh Leptospirosis một bệnh cũ nhưng
mà mới (cơ chế gây bệnh và sự phá hủy các tổ chức bên trong cơ thể vật chủ của
Leptospira đến nay vẫn chưa được làm rõ). Với nhiều chủng huyết thanh khác nhau,
thì xoắn khuẩn Leptospira đã gây bệnh ở nhiều đối tượng gia súc, vật nuôi và kể cả
con người. Ở mỗi loài gia súc khác nhau đều có thể mắc một hay nhiều serotype
khác nhau. Leptospira gây bệnh trên động vật mà không biểu hiện triệu chứng lâm
sàng được gọi là động vật mang trùng. Những động vật mang trùng, chúng không
thể hiện triệu chứng lâm sàng nhưng mang một lượng lớn Leptospira trong thận và
thải ra ngoài qua nước tiểu – đây là nguồn lây nhiễm mầm bệnh rất nguy hiểm cho
người và động vật nuôi.
Với tổng đàn lợn đạt 27,8 triệu con, tổng lượng thịt hơi xuất chuồng ước tính
đạt 3,2 triệu tấn (tính đến cuối năm 2011) [1], như vậy đàn lợn là nguồn cung cấp
thịt chủ yếu nhất cho thị trường cả nước. Nhưng trên lợn bệnh Leptospirosis đã tồn
tại trên mấy chục năm cho tới nay vẫn không kiểm soát được các nguồn lây nhiễm.
Hơn nữa, cấu trúc phân tử cũng như cơ sở di truyền phân tử của Leptospira vẫn còn
trong quá trình nghiên cứu, thì bệnh Leptospirosis vẫn đang là một vấn đề nan giải.
Lợn là đông vật mang trùng serovar Ponoma, Tarassovi, nên rất dễ lây truyền. Xoắn
khuẩn xâm nhập vào cơ thể qua da ẩm ướt, vết thương trên da, niêm mạc đường hô
hấp, đường tiêu hóa. Chỉ với một lượng rất nhỏ, Leptospira sau khi xâm nhập vào
cơ thể sẽ gây ra mẫm cảm.
Động vật và người mắc bệnh Leptospirosis thường rất ít thể hiện triệu chứng
và triệu chứng có thể biểu hiện khác nhau ở từng cá thể. Vì thế, việc chẩn đoán
bệnh trong phòng thí nghiệm là rất cần thiết. Một trong những phương pháp sử
dụng phổ biến là phát hiện kháng thể kháng Leptospira đặc hiệu trong huyết thanh
bằng phản ứng vi ngưng kết tan trên phiến kính (MAT – microscopic agglutination
2
test). Ngoài ra có thể phát hiện kháng thể bằng phản ứng ngăn trở gián tiếp hồng
cầu, ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay). Leptospira có thể phân lập
trực tiếp từ mẫu bệnh phẩm hoặc phát hiện bằng kính hiển vi nền đen, nhuộm miễn
dịch. Một số kỹ thuật sinh học phân tử hiện đại khác cũng đã được ứng dụng để
chẩn đoán Leptospira như RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism),
VNRT (Variable Number of Tandem Repeats), giải trình tự gen 16S. Hiện nay, kỹ
thuật PCR (Polymerasa Chain Reaction) và RT – PCR cũng được sử dụng rộng rãi
để chẩn đoán bệnh do Leptospira gây ra. Một số ưu điểm của kỹ thuật PCR trong
chẩn đoán bệnh là PCR có thể phát hiện vi sinh vật gây bệnh với độ nhạy cao, PCR
chẳng những có thể phát hiện được tác nhân gây bệnh trực tiếp trong bệnh phẩm mà
còn có thể phân loại type di truyền của các vi sinh vật này, không cần phải nuôi cấy
vi khuẩn, dễ thực hiện, nhanh cho kết quả. Ðây là một đóng góp rất lớn trong
nghiên cứu dịch tễ học tìm hiểu mối liên quan của các tác nhân gây bệnh trong cộng
đồng
Như vậy nhằm chuẩn hóa kỹ thuật PCR để phát hiện và thống kê tỷ lệ nhiễm
bệnh Leptospirosis ở lợn nên chúng tôi tiến hành đề tài “Ứng dụng kỹ thuật PCR
để chẩn đoán bệnh Leptospirosis ở lợn tại Đắk Lắk và Bình Định” với một số nội
dung sau:
- Chuẩn hóa phản ứng PCR để phát hiện Leptospira trong mẫu bệnh phẩm
thận lợn.
- Ứng dụng kỹ thuật PCR để chẩn đoán bệnh Leptospirosis.
- Thống kê tỷ lệ nhiễm bệnh Leptospirosis ở lợn thịt trên địa bàn Đắk Lắk và
Bình Định.
3
Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.1. TỔNG QUAN VỀ LEPTOSPIRA
1.1.1. Phân loại Leptospira
1.1.1.1. Phân loại khoa học
Về phân loại khoa học Leptospira được xếp vào:
Giới: Monera
Ngành: Spirochaetes
Họ: Leptospiraceae
Giống: Leptospira [43]
Các loài gồm có L. alexanderi, L. biflexa, L. broomii, L. borgpetersenii,
L. fainei, L. inadai, L. interrogans, L. kirschneri, L. licerasiae, L. meyeri,
L. weilii, L. noguchii, L. santarosai, L. wolbachii, L. kmetyi, L. wolffii,
L. genomospecies 1, L. genomospecies 3, L. genomospecies 4, L. genomospecies 5
Trong đó, loài L. interrogans và L. fiainei được xem là có động lực cao nhất
trên người và động vật [51], [45], [9].
1.1.1.2. Phân loại theo cấu trúc kháng nguyên
Dựa vào cấu trúc đặc hiệu của kháng nguyên LPS (Lipopolysaccharide) trên
bề mặt tế bào và cấu trúc di truyền của Leptospira, có hơn 260 serovar khác nhau đã
được xác định. Các serovar này lại thuộc các serogroup khác nhau, trong đó có
nhiều serovar gây bệnh cho vật nuôi [34].
Bảng 1.1. Một số serogroup thường gặp của các loài Leptospira [34]
STT Loài Serogroup
1 L. interrogans
Icterohaemorrhagiae, Canicola, Ponoma, Australis,
Autumnalis, Pyrogenes, Grippotyphosa, Djasiman,
Hebdomadis, Sejroe, Bataviae, Ranarum, Luoisiana,
Mini, Sarmin, Panama, Cynopteri, Tarassovi, Ballum,
Celledoni, Manhao, Shermani, Hurstbrige.
2 L. noguchii Panama, Autumnalis, Pyrogenes, Tarassovi, Bataviae,
4
STT Loài Serogroup
Lousiana, Australis, Shermani, Djasiman, Ponoma.
3 L. santarosai
Shermani, Hebdomadis, Tarassovi, Pyrogenes,
Autumnalis, Bataviae, Mina, Grippotyphosa, Sejroe,
Ponoma, Javanica, Sarmin, Cynopteri.
4 L. meyeri Ranarum, Semaranga, Sejroe, Mini, Javanica.
5 L. wolbachii Codice
6 L. biflexa Semaranga, Andamana.
7 L. fainei Hurstbrige.
8
L.
borgpetersenii
Javanica, Ballum, Hebdomadis, Sejroe, Tarassovi,
Mini, Celledoni, Pyrogenes, Bataviae, Australis,
Autumnalis.
9 L. Kirschneri
Grippotyphosa, Autumnalis, Cynopteri, Hebdomadis,
Australis, Ponoma, Djasiman, Canicola,
Icterohaemorrhagiae, Bataviae.
10 L. weilii
Celledoni, Icterohaemorrhagiae, Sarmin, Javanica,
Mini, Tarassovi, Hebdomadis, Pyrogenes, Manhao,
Sejroe.
11 L. inadai
Lyme, Shermani, Icterohaemorrhagiae, Tarassovi,
Tarassovi, Manhao, Canicola, Panama, Javanica.
12 L. parva Turneria
13 L. alexanderi Manhao, Hebdomadis, Javanica, Mini
Các serovar gây bệnh thường mang tính đặc trưng loài như Canicola chủ yếu
gây bệnh ở chó, Bratislava ở ngựa và lợn, Hardjo ở bò, Australis và Pomona ở lợn
[11], [15], [22], [26]. Bên cạnh đấy, có rất nhiều serovar khác có thể gây bệnh ở vật
nuôi như ở lợn là Grippotyphosa, Canicola, Tarassovi, Icterohaemorrhagiae; ở bò là
Pomona, Australis, Bratislava, Sejroe, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae,
Canicola; ở chó là Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae, Pomona, Copenhageni; ở
ngựa là Pomona, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae, Hardjo; ở cừu là Pomona và
Hardjo (bảng 1.2) [47], [23], [34], [9].
5
Bảng 1.2. Một số serovar thường gặp gây bệnh ở vật nuôi [47], [23], [34], [9]
TT Vật nuôi Serovar
1 Bò Hardjo, Pomona, Australis, Bratislava, Sejroe,
Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae, Canicola
2 Lợn Bratislava, Australis, Pomona, Grippotyphosa,
Canicola, Tarassovi, Icterohaemorrhagiae
3 Chó Canicola, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae,
Pomona, Copenhageni
4 Ngựa Bratislava, Pomona, Grippotyphosa,
Icterohaemorrhagiae, Hardjo
5 Cừu Pomona, Hardjo
1.1.2. Các đặc điểm sinh học của Leptospira
1.1.2.1. Đặc điểm cấu tạo
Xoắn khuẩn Leptospira có cấu trúc màng tế bào 2 lớp. Trong đó, lớp màng
cytoplasmic và peptidoglycan liên kết chặt chẽ với nhau và được che phủ bởi lớp
màng bao gồm protein, lipid và LPS (lipoplysaccharide) [27]. Lớp
lipopolysaccharide của Leptospira có thành phần tương đối giống ở vi khuẩn gram
âm tuy nhiên có độc tính thấp hơn [34]. Genome của Leptospira có kích thước
khoảng 5000kb và chia thành 2 phần là 4400kb choromosome và 350kb
chromosome; xoắn khuẩn có 2 hệ gene 16s và 23rRNA [25], [12]. Một số gene của
Leptospira đã được dòng hóa và phân tích chức năng như gene quy định quá trình
tổng hợp acid amin, rRNA, protein ở ribosome, RNA-polymerase, DNA repair, heat
shock protein, shingomyelinase, hemolysins, protein màng ngoài, quá trình sinh
tổng hợp LPS [34], [9].


DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO
TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT
1. Bộ Nông Nghiệp và Phát Triển Nông Thôn 12/2011, Báo cáo kết quả thực hiện
12 tháng năm 2011 Ngành nông nghiệp và phát triển nông thôn, 1.tr.
2. Ts. Đỗ Tuấn Anh, 2008. “Leptospirosis”, bài giảng môn học truyền nhiễm, Học
viện Quân y, 3.tr.
3. Vũ Đình Hưng, Nguyễn Thị Diện, 1968, Bệnh Leptospirosis ở gia súc và
người. Kết quả nghiên cứu khoa học kỹ thuật thú y (1968-1978), tr. 226-232
4. Vũ Đình Hưng, 1994. “Nghiên cứu một số đặc điểm dịch tễ học của
Leptospirosis ở gia súc Việt Nam và đặc tính sinh học của mầm bệnh”. Luận án
Phó tiến sỹ khoa học nông nghiệp. Viện Thú y Quốc gia - Hà Nội, tr. 73-85.
5. Hoàng Mạnh Lâm, Đào Xuân Vinh, Đậu Ngọc Hào, 2001. Nghiên cứu xác
định một số serovar Leptospira trên bò và lợn tại Đăk Lăk. Khoa học kỹ thuật
Thú y, tập VIII, số 4, tr. 66 -70.
6. Hoàng Mạnh Lâm, 2002. “Tình hình nhiễm Leptospirosis ở gia súc và người
tỉnh ĐăkLắk và biện pháp phòng trị”, Luận án Tiến sỹ khoa học nông nghiệp,
Viện Thú y Quốc gia – Hà Nội. tr. 4-5.
7. Trương Quang, Đặng Văn Minh và cs, 2004. Tình hình nhiễm và mối tương
quan về tỷ lệ nhiễm các Leptospira serovar ở đàn lợn giống và các động vật có
liên quan tại một số tỉnh Bắc Trung Bộ. Tạp chí KHKT Nông nghiệp, tập 2, số
2, tr. 121-125.
8. Lê Trung, 1997. Bệnh do Leptospira nghề nghiệp, 21 bệnh nghề nghiệp được
bảo hiểm, NXB giao thông vận tải, Hà nội, tr. 356-365.
TÀI LIỆU TIẾNG ANH
45
9. Adler, B., and Moctezuma, A., 2010. Leptospira and Leptospirosis. Veterinary
Microbiology, 140: 287-296
10. Ahmed, N., Devi, S.M., Valverde, M.L., Vijayachari, P., Machang’u, R.S.,
Elliis, W.A., Hartskeerl, R.A., 2006. Multilocus sequence typing method for
identifition and genotypic classification of pathogenic Leptospira species.
Annals of Clinical Microbiology and Antimicrobials, 5: 28.
11. Andre – Fontaine, G., 2006. Canine leptospirosis – do we have a problem?
Veterinary Microbiology, 117: 19-24.
12. Baril, C., Herrmann, JL., Richaud, C., Margarita, D., and Girons, IS., 1992.
Scattering of the rRNA genes on the physical map of the circular chromosome
of Leptospira interrorgans serovar icterohaemorhagiae. J.Bacteriol., 174:
7566-7571.
13. Bernard, W., 1993. Leptospirosis, The Veterinary Clinics of Noth America.
Equine Pratice, 9: 435-444.
14. Bharti, A., Nally, J., Ricaldi, Matthias, M., Diaz, M., Lovett, M., Levett, P.,
Gilman, R., Willig, M., Gotuzzo, E., Vinetz, J., 2003. Leptospirosis; a zoonotic
disease of global importance. Lancet infcti Levett ous disease, 3: 757-771.
15. Blood, D. C. & Henderson, J. A., 1975. Veterinarymedicine, 4th edition,
chapter 31: 811-812.
16. Boqvist, S., Thu HT, Vagsholm, I., Magnusson, U., 2002. The impact of
Leptospira seropositivity on reproductive performance in sows in southern
Vietnam. Theriogenology, 58: 1327-1335.
17. Boqvist, S., Montgomery, JM., Hurst, M., Thu, HT., Engvall, EO., Gunarsson,
A., Magnusson, U., 2003. Leptospira in slaughtered fattening pigs in southern
Vietnam: presence of the bacteria in the kidneys and association with
morphological findings. Veterinary Microbiology, 93: 361-368.
46
18. Bryan, H. W., Rhoades, H. E., and Willigan, D. A., 1953. Isolation of
Leptospira pomona from aborted swine fetuses. Vet. Med., 428-438.
19. Bulach, D.M., Zuerner, R.L., Wilson, P., Seemann, T., Mcgrath, A., Cullen,
P.A., Davis, J., Johnson, M., Kuczek, E., Alt, D.P., Peterson-Burch, B., Coppel,
R.L., Rood, J.I., Davies, J.K., Adler, B., 2006. Genome reduction in Leptospira
borgpetersenii reflects limited transmission potential. Proceedings the National
Academy of Sciences, 103: 14560-14565.
20. Cullen, P.A., Haake, D.A., Adler, B., 2004. Outer membrane proteins of
pathgenic spirochetes. FEMS Microbiology Reviews, 28: 291-318.
21. De Brito, T., Prado, M.J Negreiros, V.A., Nicastri, A.L., Sakata, E.E., Yasuda,
P.H., Santos, R.T., Alves, V.A., 1992. Detecion of Leptospiral antigen
(L.interrogans serovar copenhageni serogroup Icterohaemorrhagiae) by
immunoelectron microscopy in the liver and kidney of experimentally infected
guinea pigs. Internationd Journal of Experimental Pathology, 73: 633-642.
22. Ellis, W.A., Mc Parland, P.J., Bryson, D.G., Theirmann, A.B., Montgomery, J.,
1986. Isolation of leptospires from the gential tract and kidneys of aborted
sows. Veterinary Record, 118: 294 – 295.
23. Faine, S., Adler, B., Bolin, C., and Perolat, P., 1999. Morphology and chemical
compostion. In: Leptospira and Leptospirosis, 2
nd
edition. MediSci, Melbourne,
Australia, 17 – 28.
24. Frankel S., S.Reitman and A.C Sonnerwizth, 1970. Leptospira. Gradwohl’s
clinical laboratory methods and diagnosis, 1377
25. Fukunaga, M., and Mifuchi, I., 1989. Unique organization of Leptospira
interrogans rRNA genes, J.Bacteriol., 171: 5763-5767
26. Grooms, D., 2006. Reproduction losses caused by bovine viral diarrhea virus
and leptospirosis. Therigenology, 66: 624 – 628.
47
27. Haake, D.A., 2000. Mazel, M.K., McCoy, A.M., Milward, F., Chao, G.,
Matsunaga, J., Wagar, E.A., 1999. Leptosporal outer membrane proteins
OmpL1 and LipL41 exhibit synergistic Immunoprotection. Infevtion and
Immunity, 67: 6572 – 6582.
28. Hanson L.E and Tripathy D.N., 1986. Diseases of swine. Ames Iowa state
Unive, 591-559
29. Hauk, P., Macedo, F., Romero, E.C., Vasconcellos, S.A., de Morais, Z.M.,
Barbosa, A.S., Ho, P.L., 2008. In Lip32, the major Leptospiral lipoprotein, the
C terminus is the primary immunogenic domain and mediates interaction with
collagen IV and plasma fibronectin, Infection and Immunity, 76: 2642 – 2650.
30. Henry, R. A. & Johnson, R. C., 1978. Distribution of the genusLeptospira in
soil and water. Appl Environ Microbiol 35: 492–499.
31. Herrmann, J.L., Bellenger, E., Perolat, P., Baranton, G., Saint Girons, I., 1992.
Pulsed-field gel electrophoresis of NotI digests of Leptospiral DNA: a new
rapid method of serovar identification. Journal of Clinical Microbiology, 30:
1696-1702
32. Hoke, D.E., Egan, S., Cullen, P.A., Adler, B., 2008. LipL32 is an extracellular
matrix-interacting pro-tein of Leptospira spp. and Pseudoalteromonas tu-nicata. Infect. Immun. 76: 2063-2069.
33. Ho Thi Viet Thu, Tran Chi Hieu, 2002. Prevelance of Leptospira in pigs in Tan
Phu Thanh village. Research topics of livestock production, Can Tho
University.
34. Levett, P.N., 2001. Leptospirosis. Clinical Microbiology Review, 14(2): 296-326.
35. Levett, P.N., Morey, R.E., Galloway, R.L., Turner, D.E., Steigerwalt, A.G., and
Mayer, L.W., 2005. Detection of pathgenic leptospires by real-time quantitative
PCR. Journal of Medical Microbiology, 54: 45-49.
48
36. Majed, Z., Bellenger, E., Postic, D., Pourcel, C., Baranton, G., Picardeau, M.,
2005. Identification of variable-number tandem-repeat loci in Leptospira
interrogans sensu stricto. Journal of Clinical Microbiology, 43: 539-545.
37. Matsunaga, J., Brocchi, M.A., Croda, J., Yuong, T.A., Sanchez, Y., Siqueira, I.,
Bolin, C.A., Reis, M.G., Riley, L.W., Haake, D.A., Ko, A.I., 2003. Pathogenic
Leptospira species exprees surface-exposed proteins belonging to the bacterial
immunoglobulin superfamily. Molecular Microbiology, 49: 929-946.
38. Merien, F., Baranton, G., Perolat, P., 1997. Invasion of Vero cells and induction
of appotosis in macrophages by pathogenic Leptospira interrogans are
correlated with virulance. Infection and Immunity, 65: 729-738.
39. Merien, F., Truccolo, J., Baranton, G., Perolat, P., 2000. Identification of a 36-kDa fibronectin-binding protein expressed by a virulent variant, 185: 17-22
40. Morey, R.E., Galloway, R.L., Bragg, S.L., Steigerwalt, A.G., Mayer, L.W.,
Levett, P.N., 2006. Species-specific identification of Leptospiraceae by 16S
rRNA gene Sequencing. Journal of Clinical Microbiology, 44: 3510-3516.
41. Murray, G.L., Srikram, A., Henry, R., Lo, M., Puapairoj, A., Sermswan, R.,
Adler, B., 2009a. Leptospira interrogans requires heme oxygenase for disease
pathogenesis. Microbes and Infection, 11: 311-314.
42. Murray, G.L., Srikram, A., Hoke, D.E., Wunder Jr., E.A., Henry, R., Lo, M.,
Zhang, K., Sermswan, R., Ko., A., Adler, B., 2009b. The major surface protein
LipL32 is not required for either acute or chronic infection with Leptospira
interrogans. Infection and Immunity, 77: 925 -958.
43. Noguchi, H., 1917. Spirochaeta icterohaemorrhagiae in American wild rats
and its relation to the Japanese and European strains. The Journal of
Experimental Medicine 25: 755-763.
44. Palmer M.F 1988. Laboratory diagnosis of Leptospirosis. Medical laboratory
science, 45: 174-178.
49
45. Plank, R., Dean, D., 2000. Overview of the epidemiology, microbiology and
pathogenesis of Leptospira spp. in humans. Microbes Infection, 2: 1265-1276.
46. Que-Gewirth, N.L.S., Ribeiro, A.A., Kalb, S.R., Cotter, R.J., Bulach, D.M.,
Adler, B., Girons, I.S., Werts, C., Raetz, C.R.H., 2004. A methylated phosphate
group and four amide-linked acyl chains in Leptospira interrogans Lipid A: The
membrane anchor of an unusual lipopolysaccharide that activates TLR2.
Journal of Biological Chemistry, 279: 25420-25429.
47. Quinn, M., Carter, E., Markey, B., and Carter, GR., 1994. Wolfe. Clinical
veterinary Microbiology, 292-299.
48. Ristow, P., Bourhy, P., Mcbride, F.W., Figueira, C.P., Huerre, M., Ave, P.,
Girons, I.S., Ko, A.I., Picardeau, M., 2007. The OmpA-Like protein Loa22 is
essential for Leptospiral virulence. PloS pathogogens 3, e97.
49. Siddique I.H, Monhamed A.A.,1988. Cell mediated immunresponse of goats to
leptospirosis. Acta – microbiologica Hungarica, 35: 283 – 287.
50. Smythe, LD., Smith, GA., Dohnt, MF., Symonds, ML., Barnett, I.J., and
McKay, DB., 2002. A quantitative PCR (TaqMan) assay for pathogenic
Leptospira spp. BMC Infectious Diseases, 2:13.
51. Srivastava S.K and Harbola P.C., 1989, Manual on Procedures for isolation and
identification of Leptospira and diagnosing of Leptospirosis of epidemiology of
Leptospirosis in a herd of pigs. NZ Vet, 25 – 26; 56 – 66.
52. Yersin, C., Bovet, P., Merien, F., Wong, T., Panowsky, J., Perolat, P., 1998.
Human leptospirosis in the Seychelles (Indian Ocean): a population-based
study. Am J Trop Med Hyg, 59: 933-940.
53. Werts, C., Tapping, R.I., Mathison, J.C., Chuang, T.H., Kravchenko, V., Saint
Girons, I., Haake, D.A., Godowski, P.J Hayshi, F., Ozinsky, A., Underhill,
D.M., Kirschning, C.J., Wagner, H., Aderem, A., Tobias, P.S., Ulevitch, R.J.,
50
2001. Leptospiral lipopolysaccharide activates cells through a TLR2-deprendent mechanism. Nature Immunology, 2: 346-352.
TÀI LIỆU TRÊN WEB
54. http://hongphuc76.violet.vn/present/showprint/entry_id/3928885/cat_id/206596
6.
55. http://www.impe-qn.org.vn/impe-qn/vn/portal/InfoDetail.jsp?area=58&cat=1066&ID=2240,
56. http://www.vemedim.vn/benhvadieutri.php?id=2&b=25.