Luận Văn ứng dụng kỹ thuật multiplex - pcr để phát hiện các gen độc lực của vi khuẩn escherichia coli phân lậ

1. ĐẶT VẤN ĐỀ 1
2. TỔNG QUAN 3
2.1. Vi khuẩn E. coli 3
2.1.1. Định nghĩa . 3
2.1.2. Nuôi cấy và đặc điểm sinh hóa 3
2.1.3. Yếu tố kháng nguyên . 4
2.1.4. Cơ chế chung về khả năng gây tiêu chảy của E. coli 4
2.1.5. Phân loại E. coli 4
2.1.5.1. Nhóm STEC/ VTEC/ EHEC . 4
2.1.5.2. Nhóm EPEC . 7
2.1.53. Nhóm ETEC . 8
2.2. Kỹ thuật PCR 11
2.2.1. Nguyên tắc 11
2.2.2. Các giai đoạn của phản ứng PCR . 12
2.2.3. Các thành phần của phản ứng PCR . 14
2.2.4. Phân tích kết quả PCR . 15
2.2.5. Những ứng dụng của PCR . 15
2.2.5.1. PCR được sử dụng để nghiên cứu lượng DNA nhỏ . 15
2.2.5.2.PCR được sử dụng trong chẩn đoán lâm sàng 16
2.2.5.3. PCR được dùng để khuếch đại RNA . 16
2.2.5.4. PCR được sử dụng để so sánh các genome khác nhau . 17

2.2.6. Các hạn chế của PCR . 17
3. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19
3.1. Thời gian và địa điểm thực hiện 19
3.2. Nội dung 19
3.3. Phương pháp nghiên cứu 19
3.3.1. Lấy mẫu . 19
3.3.2. Nuôi cấy, phân lập và ly trích DNA của vi khuẩn E. coli 20
3.3.3. Xác định các gen stx1, stx2, eae, hly, stx2e, sta, stb, lt-I của
E. coli phân lập được 23
3.3.4. Điện di trên gel aragose và đọc kết quả điện di 25
4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27
4.1. Kết quả phân nhóm khuẩn lạc và xác định E. coli từ các khuẩn lạc
phân lập được . 27
4.1.1. Các loại khuẩn lạc trên môi trường
thạch MAC, SMAC, và CT-SMAC 27 4.1.2. Xác định E. coli cho các khuẩn lạc được chọn 27
4.2. Kết quả phát hiện các gen độc lực của E. coli
phân lập được từ phân bò tiêu chảy . 28
4.3. Kết quả phát hiện gen độc lực của E. coli
phân lập được từ phân heo tiêu chảy . 32
4.4. Kết quả phát hiện gen độc lực của E. coli
phân lập được từ phân bê tiêu chảy 36
4.5. Kết quả phát hiện các gen độc lực của E. coli
phân lập từ mẫu bề mặt thịt bò . 38
4.6. Tổng kết kết quả phát hiện các gen độc lực
của E. coli trên các mẫu khảo sát 39
5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 41
5.1. Kết luận . 41
5.2. Đề nghị 41
6. TÀI LIỆU THAM KHẢO . 42
7. PHỤ LỤC . 46