Thạc Sĩ ứng dụng hplc ghép đầu dò điện hóa và diode array (hplc‐ecd‐dad) để xác định hệ số hấp thu phân tử v

MỤC LỤC
Trang
Trang phụ bìa
Mục lục
Danh mục các hình vẽ, đồ thị .i
Danh mục các bảng iii
Danh mục các kí hiệu và chữ viết tắt .iv
Lời mở đầu
PHẦN 1: TỒNG QUAN
Chương 1_TỔNG QUAN. .1
1.1 Vai trò của chất chống oxi hóa 1
1.2 Giới thiệu về nhóm anthocyanin 2
1.2.1 Cấu trúc của nhóm anthocyanin .2
1.2.2 Tính chất của các anthocyanin 3
1.2.3 Các phương pháp xác định anthocyanin .5
Chương 2- NGUỒN GỐC CÁC LOẠI CÂY 7
2.1 Lobelia Cardinalis .7
2.2 Hydrophila Polysperma 9
2.3 Oxalis Natans 11
Chương 3- TỔNG QUAN VỀ SẮC KÝ LỎNG 13
3.1 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC .13
3.2 Các thông số của phương pháp sắc ký lỏng .13
3.2.1 Hệ số phân bố 13
3.2.2 Thời gian lưu tR 14
3.2.3 Hệ số dung lượng 15
3.2.4 Hiệu năng 15
3.2.5 Độ chọn lọc α .16
3.2.6 Độ phân giải 16
3.3 Giới thiệu các bộ phận của thiết bị sắc ký lỏng hiệu năng cao 17
3.3.1 Đầu dò UV-Vis .19
3.3.2 Đầu dò ECD 20
3.3.2.1 Tính chất điện hóa của anthocyanin .20
3.3.2.2 Nguyên lý của HPLC/ECD 21
3.3.2.3 Cơ chế 24
3.3.3 Giới thiệu về LC/MS/MS 29
3.3.4 Giới thiệu thiết bị khối phổ FINNIGAN LC Deca .33
Chương 4- MỤC TIÊU CỦA ĐỀ TÀI 37
4.1 Xác định các hệ số α, β 38
4.2 Xác định số điện tử trao đổi n .40
Chương 5- NỘI DUNG NGHIÊN CỨU .42
Chương 6- HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ .44
6.1 Hóa chất 44
6.2 Thiết bị 44
6.3 Ly trích mẫu .46
6.3.1 Nguyên tắc 46
6.3.2 Vật liệu 47
6.3.3 Quy trình tách chiết mẫu .48
6.4 Kiểm tra khả năng làm sạch mẫu của cột SCX 49
Chương 7- KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 51
7.1 Xác định hệ số α và β của máy .51
7.1.1 Xác định hệ số β và α theo chất chuẩn catechol .51
7.1.2 Xác định hệ số β và α theo chất chuẩn cyanidin-3-glu 54
7.1.3 So sánh các giá trị α, β được xác định từ 2 chất chuẩn catechol và cya-3-glu. 55
7.2 Khảo sát thế áp tối ưu của các polyphenol 56
7.3 Xác định số điện tử trao đổi n .61
7.3.1 Phương pháp HPLC/ECD .61
7.3.1.1 Xác định chính xác nồng độ các polyphenol chuẩn .61
7.3.1.2 Xác định n bằng phương pháp HPLC/ECD (đường cong thủy động lực học_ Hydrodynamic curve) 62
7.3.2 Phương pháp đường dòng thế (Chronoamperometry) 64
7.3.3 Phương pháp kết hợp 2 diện tích peak UV và ECD .66
7.3.4 Tóm tắt các giá trị n xác định theo 3 phương pháp .67
7.4 Xác định hệ số hấp thu phân tử của cya-3-glu 68
7.4.1 Phương pháp dùng máy quang phổ .68
7.4.2 Phương pháp kết hợp diện tích peak UV và ECD trên máy Dionex 68
7.5 Xác định cấu trúc một số chất của các mẫu cao bằng LC/ MS/ MS .69
7.5.1 Xác định cấu trúc các chất từ cao MeOH của cây Hydrophila Polysperma.69
7.5.2 Xác định cấu trúc các chất từ cao MeOH của cây Oxalis Natans 71
7.5.3 Xác định cấu trúc các chất từ cao MeOH của cây Lobelia Cardinalis .74
7.6 Xác định nồng độ của các anthocyanin trong mẫu cao MeOH .77
7.6.1 Mẫu cao MeOH của cây Hydrophila Polysperma 77
7.6.2 Mẫu cao MeOH của cây Oxalis Natans 78
7.6.3 Mẫu cao MeOH của cây Lobelia Cardinalis 79
7.7 Khả năng làm sạch mẫu từ cột SCX 80
7.8 Hiệu suất thu hồi dựa trên nội chuẩn cyanidin-3-glu .80
Chương 8- KẾT LUẬN .84
TÀI LIỆU THAM KHẢO .86
Phụ lục các bảng .89

DANH MỤC CÁC BẢNG:
Bảng 1: Loại cột, pha tĩnh, pha động và hợp chất phân tích thông dụng
Bảng 2: Giá trị hệ số hấp thu phân tử của anthocyanin trong một số dung môi
Bảng 3: Gradient rửa giải anthocyanin cho hệ LC-UV-ECD
Bảng 4: Chương trình gradient cho hệ LC-MS
Bảng 5: Nồng độ catechol theo diện tích ECD
Bảng 6: Nồng độ catechol theo diện tích UV
Bảng 7: Đồ thị nồng độ cyanidin-3-glu theo diện tích UV
Bảng 8: Đồ thị nồng độ cyanidin-3-glu theo diện tích ECD
Bảng 9: Nồng độ thực của các anthocyanin trong mẫu cao
Bảng 10: Giá trị n từ phương pháp đường cong thủy động lực học
Bảng 11: Giá trị n của các polyphenol bằng phương pháp đường dòng thế
Bảng 12: Số điện tử trao đổi của các polyphenol được xác định theo phương pháp đo diện tích peak đầu dò ECD và UV
Bảng 13: Tóm tắt các giá trị n từ các phương pháp