Thạc Sĩ Tuyển chọn, nuôi cấy chủng aspergillus awamori sinh tổng hợp endo-β-1,4-glucanase và đánh giá tính c

MỤC LỤC
MỞ ĐẦU 1
CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU . 3
1.1 KHÁI NIỆM VỀ CELLULASE VÀ ENDO-β-1,4-GLUCANASE 3
1.2 NGUỒN GỐC VÀ PHÂN LOẠI ENDO-β-1,4-GLUCANASE 4
1.2.1 Nguồn gốc . 4
1.2.2 Phân loại 6
1.3 CẤU TRÚC CỦA ENDO-β-1,4-GLUCANASE 7
1.3.1 Cấu trúc bậc một 7
1.3.2 Cấu trúc không gian . 9
1.3.3 Cấu trúc của trung tâm xúc tác và vùng liên kết cơ chất . 9
1.4 CƠ CHẾ XÚC TÁC CỦA ENDO-β-1,4-GLUCANASE . 11
1.5 ỨNG DỤNG CỦA ENDO-β-1,4-GLUCANASE . 12
1.5.1 Trong công nghiệp thực phẩm . 12
1.5.2 Trong công nghiệp sản xuất thức ăn gia súc . 13
1.5.3 Trong công nghiệp sản xuất dung môi hữu cơ 15
1.5.4 Trong công nghiệp sản xuất giấy và bột giấy . 15
1.5.5 Trong công nghiệp sản xuất chất tẩy rửa 16
1.5.6 Trong công nghệ xử lý rác thải sản xuất phân bón vi sinh 16
1.6 ẢNH HƯỞNG CỦA ĐIỀU KIỆN MÔI TRƯỜNG ĐẾN KHẢ NĂNG
SINH TỔNG HỢP ENDO-β-1,4-GLUCANASE . 17
1.7 TÍNH CHẤT LÝ HÓA CỦA ENDO-β-1,4-GLUCANASE 20
1.8 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU CÓ LIÊN QUAN Ở VIỆT NAM 22
CHƯƠNG 2. NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 25
2.1 NGUYÊN LIỆU VÀ HÓA CHẤT . 25
2.1.1 Chủng nấm 25
2.1.2 Thiết bị thí nghiệm 25
2.1.3 Hóa chất 26
2.1.4 Môi trường 26
2.1.5 Dung dịch và đệm 27
2.2 PHƯƠNG PHÁP . 28
2.2.1 Nuôi cấy vi sinh vật . 28
2.2.2 Xác định hoạt tính endoglucanase 28
2.2.3 Khảo sát ảnh hưởng của một số yếu tố lên khả năng sinh tổng hợp
endoglucanase 30
2.2.4 Tinh sạch enzyme 32
2.2.5 Điện di SDS-PAGE . 33
2.2.6 Xác định tính chất lý hóa của endoglucanase . 34
2.2.7 Xác định hàm lượng protein tổng số . 35
2.2.8 Các phương pháp sinh học phân tử 36
2.2.9 Xử lý số liệu 41
CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN . 42
3.1 TUYỂN CHỌN VÀ PHÂN LOẠI CHỦNG ASPERGILLUS AWAMORI
SINH TỔNG HỢP ENDOGLUCANASE CAO 42
3.1.1 Tuyển chọn 42
3.1.2 Phân loại chủng nấm sợi dựa vào phân đoạn gene 28S rRNA 43
3.2 TỐI ƯU CÁC ĐIỀU KIỆN SINH TỔNG HỢP ENDOGLUCANASE 45
3.2.1 Khả năng sinh tổng hợp endoglucanase theo thời gian . 45
3.2.2 Nhiệt độ nuôi cấy 47
3.2.3 Ảnh hưởng của nồng độ cơ chất cảm ứng 48
3.2.4 Ảnh hưởng của nguồn carbon và nồng độ nguồn carbon 50
3.2.5 Ảnh hưởng của nguồn nitrogen và nồng độ nguồn nitrogen . 52
3.2.6 pH môi trường nuôi cấy ban đầu 54
3.3 TINH SẠCH ENDOGLUCANASE 55
3.3.1 Tinh sạch qua cột sắc ký lọc gel sephadex G-100 55
3.3.2 Tinh sạch qua cột sắc ký trao đổi ion DEAE 56
3.4 NHỮNG TÍNH CHẤT LÝ HÓA CỦA ENDOGLUCANASE . 57
3.4.1 Ảnh hưởng của nồng độ cơ chất 57
3.4.2 Nhiệt độ phản ứng tối ưu . 58
3.4.3 pH phản ứng tối ưu 60
3.4.4 Độ bền nhiệt độ . 61
3.4.5 Độ bền pH . 63
3.4.6 Ảnh hưởng của dung môi hữu cơ . 64
3.4.7 Ảnh hưởng của ion kim loại . 65
3.4.8 Ảnh hưởng của một số chất tẩy rửa 67
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ . 69
TÀI LIỆU THAM KHẢO . 71
PHỤ LỤC . 79