Thạc Sĩ Tối ưu hoá phản ứng dansyl-amino acid dùng để phân tích amino acid của trùn quế (Perionyx excavatus)

TỐI ƯU HOÁ PHẢN ỨNG DANSYL-AMINO ACID DÙNG ĐỂ PHÂN TÍCH AMINO ACID CỦA
TRÙN QUẾ (Perionyx excavatus)
BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC
MỞ ĐẦU
Trùn Quế (Perionyx excavatus) là loại thực phẩm có hàm lượng Protein cao, giàu nguyên tố khóang vi lượng, ít chất béo. Trong trùn Quế có nhiều loại amino acid cần thiết cho con người và có hàm lượng vitamin B1, B2, A, C, E cao. Vì vậy ở nhiều nước trên thế giới đã sử dụng trùn Quế để chế biến thành thực phẩm cho con người. Ở Nhật có tới 200 loại thực phẩm chế biến từ trùn Quế như ở Ý trùn Quế còn được chế biến thành patê, ở Úc người ta ăn trùn Quế với món ốp-lết. Hiện nay trên thị trường đã có bán bánh bích qui có hàm lượng trùn Quế. Nhiều nhà dinh dưỡng học trên thế giới dự đoán trùn Quế là loại động vật dinh dưỡng cao và rất dễ nuôi. Vì thế trong tương lai có thể trùn Quế sẽ là nguồn thực phẩm quan trọng, phổ biến và quý giá của loài người.
Y học cổ truyền của nhiều nước trong đó có Việt Nam đã dùng trùn Quế để chữa các bệnh về tim mạch, huyết áp, thần kinh, kháng ung thư, hen suyễn và thấp khớp, thương hàn Loại amino acid Tyrosin có trong trùn Quế có khả năng tăng tuần hoàn máu ngoại vi của bề mặt cơ thể, có tác dụng giải nhiệt, hạ sốt. Dịch ngâm nước của trùn quế có tác dụng giảm đau. Một số amino acid của trùn Quế có tác dụng làm thuốc trị bệnh xơ vữa động mạch và hàm lượng mỡ trong máu cao.
Các amino acid quan trọng được chiết xuất từ trùn Quế được sử dụng trong thực phẩm cho trẻ em giúp tăng sức đề kháng, chống suy dinh dưỡng, phát triển hệ cơ, giảm hội chứng thiểu năng trí tuệ. Việc bổ sung các amino acid quan trọng này vào trong thực phẩm cho các vận động viên thể thao giúp tăng cường sức khoẻ, bồi bổ sinh lực, tăng khả năng chịu đựng của cơ bắp. Giúp người bệnh mau phục hồi sức khoẻ.
Trong đề tài nghiên cứu này chúng tôi nghiên cứu về thành phần amino acid có trong trùn Quế bằng phương pháp HPLC.
MỤC LỤC
DANH MỤC CÁC BẢNG .4
DANH MỤC CÁC HÌNH .5
DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT .6
MỞ ĐẦU .7
Chương 1 .TỔNG QUAN 8
1.1.GIỚI THIỆU TRÙN QUẾ 8
1.1.1 ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI, CẤU TẠO VÀ SINH LÝ
CỦA TRÙN QUẾ 9
1.1.1.1.Hình thái bên ngoài 9
1.1.1.2.Cấu tạo cơ thể trùn .9
1.1.1.3.Đặc tính sinh lý trùn Quế 11
1.1.2.SỰ SINH TRƯỞNG, PHÁT TRIỂN VÀ SINH SẢN .12
1.1.2.1.Sự sinh trưởng, phát triển của trùn Quế 12
1.1.2.2.Sự sinh sản 13
1.1.2.3.Tập tính ăn 14
1.1.3 KỸ THUẬT NUÔI TRÙN QUẾ .14
1.1.3.1 Chuẩn bị môi trường nuôi .14
a/Chất nền và cách ủ chất nền 15
b/ Phương pháp cho trùn Quế ăn .17
c/ Các yếu tố môi trường sống .18
1.1.3.2 Bệnh của trùn 19
1.1.4.ỨNG DỤNG CỦA TRÙN QUẾ TRONG THỰC PHẨM
VÀ TRỊ LIỆU 19
1.2.VAI TRÒ CỦA CÁC AMINO ACID CÓ TRONG TRÙN QUẾ .20
1.3.PHÂN TÍCH THÀNH PHẦN AMINO ACID CÓ TRONG TRÙN QUẾ24
1.3.1.PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ BẢN MỎNG 24
1.3.2.PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ KHÍ .26
1.3.3.PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO .26
1.4 PHẢN ỨNG DANSYL HÓA AMINO ACID 28
Chương 2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP .29
2.1.THIẾT BỊ, HÓA CHẤT VÀ VẬT LIỆU .29
2.1.1.THIẾT BỊ .29
2.1.2.HÓA CHẤT 29
2.1.3.VẬT LIỆU .30
2.2 PHƯƠNG PHÁP THỰC HIỆN 30
2.2.1.Cách tiến hành phản ứng Dansyl hóa tạo dẫn xuất Dansyl
của amino acid 30
2.2.2.Khảo sát điều kiện tối ưu để tiến hành phản ứng tạo
dẫn xuất Dansyl 30
2.2.3.Khảo sát pH của phản ứng Dansyl hóa .30
2.2.4.Khảo sát nồng độ thuốc thử Dansyl clorur .30
2.2.5.Khảo sát theo thời gian của phản ứng Dansyl hóa .31
2.2.6.Khảo sát sự thay đổi tỉ lệ đệm Na2B4O7 và dung môi Aceton .31
2.2.7.Qui trình thủy phân trùn Quế bằng acid và phản ứng Dansyl hóa .31
2.2.8.Qui trình thủy phân trùn Quế bằng baz và phản ứng Dansyl hóa 31
Chương 3.KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32
3.1.NGHIÊN CỨU PHẢN ỨNG TẠO DẪN XUẤT DANSYL CỦA AMINO ACID CHUẨN 32
3.1.1.Cách tiến hành phản ứng Dansyl hóa .32
3.1.2.Khảo sát điều kiện tối ưu để tiến hành phản ứng tạo dẫn xuất
Dansyl hóa .32
Khảo sát pH của phản ứng Dansyl hóa 33 3.1.3.
3.1.4.Khảo sát nồng độ thuốc thử Dansyl clorur .36
3.1.5.Khảo sát thời gian tiến hành phản ứng .38
3.1.6.Khảo sát sự thay đổi tỉ lệ dung môi Aceton và đệm Borat . 39
3.2.KHẢO SÁT KHOẢNG TUYẾN TÍNH VÀ ĐƯỜNG CHUẨN CỦA 20 DẪN XUẤT DANSYL-AMINO ACID CHUẨN 44
-3-
3.3.QUI TRÌNH PHÂN TÍCH AMINO ACID CỦA TRÙN QUẾ .47
3.3.1.Qui trình thủy phân trùn Quế bằng acid và phản ứng Dansyl hóa .47
3.3.2.Qui trình thủy phân trùn Quế bằng baz và phản ứng Dansyl hóa 47
3.3.3 Qui trình phân tích amino acid trên thiết bị HPLC-UV .47
3.4 KẾT QUẢ VÀ NHẬN XÉT 51
Chương 4 KẾT LUẬN 52
TÀI LIỆU THAM KHẢO 55
PHỤ LỤC 57