Luận Văn Tinh chế kháng nguyên bề mặt virus viêm gan b

TÓM TẮT


Việt Nam là một trong những nước có nguy cơ cao về nhiễm virus viêm gan


Baïn, với tỷ lệ người mang HBsAg trong cộng đồng dân chúng từ 15 – 26%. Do đó,


nguồn kháng nguyên tự nhiên ở những người bệnh mang HBsAg là rất nhiều. Đồng


thời, HBsAg là kháng nguyên được sản xuất ra gấp bội so với các loại kháng nguyên


khác . Mặc khác HBsAg lại rất đặc hiệu để chẩn đoán bệnh viêm gan B .Vì vậy, chúng


tôi tiến hành tinh chế kháng nguyên bề mặt virus viêm gan B để phục vụ cho nhu cầu


sản xuất kháng thể để tạo các bộ sinh phẩm chuẩn đoán cũng như dùng làm vaccine


phòng bệnh.


Sau khi tiến hành đề tài, chúng tôi đã đạt được những kết quả sau:


 HBsAg được tinh chế với hoạt tính kháng nguyên HBsAg so với hàm lượng

protein tổng số là 32,35.103 mUI/ OD.


 Độ tinh khiết của sản phẩm là 44 lần.


 HBsAg được tinh chế khá tốt, kết quả được thể hiện trên gel điện di: dung


dịch HBsAg thu được có chứa các băng có trọng lượng phân tử từ 25 – 28 kDa tương


ứng với các quyết định kháng nguyên của HBsAg.


Đề tài này là một bước quan trọng để tiến hành tạo bộ sinh phẩm chẩn đoán


phát hiện virus viêm gan B trong máu.


MỤC LỤC


CHưƠNG TRANG


Trang tựa


Lời cảm tạ . i


Tóm tắt . ii


Mục lục .iii


Danh sách các chữ viết tắt iv


Danh sách các hình . v


Danh sách các bảng vi


PHẦN 1. MỞ ĐẦU 1


1.1 Đặt vấn đề . 1


1.2 Mục đích – Yêu cầu 2


PHẦN 2. TỔNG QUAN 3


2.1 Lịch sử phát hiện của HBV 3


2.2 Phân loại HBV 3


2.3 Hình dạng - Cấu trúc HBV . 3


2.3.1 Hình dạng HBV . 3


2.3.2 Cấu trúc gen HBV 5


2.4 Quá trình sao chép và nhân lên của HBV 8


2.5 Phương pháp xét nghiệm để phát hiện HBV 10


2.5.1 Phương pháp chẩn đoán huyết thanh học 10


2.5.2 Phương pháp chẩn đoán dựa trên chức năng gan 10


2.5.3 Phương pháp chẩn đoán huyết thanh học và hoá miễn dịch.10


2.6 Các kiểu lây truyền HBV . 12


2.7 Kháng nguyên bề mặt virus viêm gan B (HBsAg) . 12


2.7.1 Bản chất HBsAg 12


2.7.2 Tầm quan trọng HBsAg . 12


2.7.3 Các phân typ HBsAg . 13


2.7.4 Tinh khiết HBsAg 14


2.7.5 Định lượng HBsAg . 14


PHẦN 3. VẬT LIỆU VÀ PHưƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . 15


3.1 Thời gian và địa điểm thực hiện . 15


3.2 Vật liệu nghiên cứu 15


3.2.1 Dụng cụ 15


3.2.2 Thiết bị . 15


3.2.3 Hoá chất và cách chuẩn bị các dung dịch 15


3.2.3.1 Hoá chất 15


3.2.3.2 Cách chuẩn bị các dung dịch 16


3.3 Bố trí thí nghiệm . 20


3.4 Phương pháp nghiên cứu 21


3.4.1 Phương pháp tủa phân đoạn bằng ammonium sulfate . 21


3.4.1.1 Nguyên tắc 21


3.4.1.2 Tiến hành 23


3.4.2 Phương pháp tinh chế protein bằng hệ thống gel lọc


- cột Sephacryl 300 23


3.4.2.1 Nguyên tắc 23


3.4.2.2 Tiến hành 24


3.4.3 Phương pháp tinh chế protein bằng sắc ký ái lực


- cột Sepharose CL – 4B Dextran sulfate 25


3.4.3.1 Nguyên tắc 25


3.4.3.2 Tiến hành 26


3.4.4 Phương pháp định lượng protein bằng đo mật độ quang


– OD 280nm . 26


3.4.4.1 Nguyên tắc 26


3.4.4.2 Tiến hành 26


3.4.5 Phương pháp điện di trên SDS - polyacrylamide gel


kiểm tra mức độ tinh chế . 26


3.4.5.1 Nguyên tắc 26


3.4.5.2 Tiến hành 28


3.4.6 Phương pháp định lượng HBsAg . 28


3.4.6.1 Khái niệm . 28


3.4.6.2 Nguyên tắc hoạt động . 28


3.4.6.3 Mục đích . 29


3.4.6.4 Xác định kết quả . 29


3.4.6.5 Đánh giá kết quả thí nghiệm . 29


PHẦN 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30


4.1 Kết quả định lượng kháng nguyên HBsAg trong huyết thanh 30


4.2 Kết quả ở giai đoạn tủa phân đoạn bằng ammonium sulfate 30


4.3 Kết quả tinh chế HBsAg bằng phương pháp sắc ký lọc gel


- cột Sephacryl S300 . 32


4.4 Kết quả tinh chế HBsAg bằng phương pháp sắc ký ái lực


- cột Sepharose CL – 4B Dextran sulfate 34


PHẦN 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ . 38


5.1 Kết luận 38


5.2 Đề nghị . 38


PHẦN 6. TÀI LIỆU THAM KHẢO 39