Luận Văn Tìm hiểu quy trình phát hiện Enterobacter Sakazakii trong sữa bột

MỤC LỤC
Danh mục các từ viết tắt . .v
Danh mục các bảng . .vi
Danh mục các hình . .vii
CHƯƠNG 1: GIỚI THIỆU
1.1. Đặt vấn đề . .1
1.2. Mục đích . 1
1.3. Nội dung nghiên cứu . 1
CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN
2.1. Giá trị dinh dưỡng của sữa bột . .2
2.1.1. Đường lactose . .2
2.1.2. Protein . .2
2.1.3. Chất béo . .3
2.1.4. Chất khoáng . .5
2.1.5. Vitamin . 5
2.1.6. Các hợp chất khác . .6
2.2. Các vi sinh vật gây hại trong sữa bột . .6
2.2.1. Listeria monocytogenes . .6
2.2.1.1. Giới thiệu . 6
2.2.1.2. Phân loại . .6
2.2.1.3. Đặc điểm . .7
2.2.1.4. Yếu tố độc lực . .7
2.2.1.5. Khả năng gây bệnh . 8
2.2.1.6. Các thực phẩm liên quan . .9
2.2.2. Escherichia Coli . .9
2.2.2.1. Giới thiệu . 9
2.2.2.2. Phân loại . .9
2.2.2.3. Hình thái, cấu trúc . 10
2.2.2.4. Đặc điểm . .10
i




2.2.2.5. Khả năng gây bệnh . .11
2.2.2.6. Các thực phẩm liên quan . .12
2.3. Tổng quan về Enterobacter sakazakii . 13
2.3.1. Lịch sử phát hiện . .13
2.3.2. Phân loại . .13
2.3.3 Đặc điểm . .14
2.2.3.1. Đặc điểm chung . .14
2.2.3.2. Đặc điểm sinh hóa . .16
2.3.4. Cấu trúc . .16
2.3.4.1. Thành tế bào . .17
2.3.4.2. Màng sinh học . .18
2.3.4.3. Tiên mao . .19
2.3.5. Yếu tố độc lực . .20
2.3.6. Cơ chế gây bệnh . .21
2.2.6.1. Các nguồn nhiễm bệnh . .21
2.2.6.2. Triệu chứng . 21
2.2.7. Các biện pháp phòng và xử lí bệnh . .22
2.2.7.1. Các biện pháp phòng bệnh . .22
2.2.7.2. Xử lí bệnh . 22
2.2.8 Tình hình nhiễm E. sakazakii trong sữa bột . .22
2.2.8.1. Việt Nam . .22
2.2.8.2. Thế giới . 23
CHƯƠNG 3: CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN ENTEROBACTER SAKAZAKII
3.1. Phương pháp truyền thống . .25
3.1.1. Nguyên tắc . .25
3.1.2. Môi trường nuôi cấy . .25
3.1.3. Thiết bị, dụng cụ . .25
3.1.4. Lấy mẫu . 25
3.1.5. Chuẩn bị mẫu thử . .27
ii




3.1.6. Quy trình phân tích . .28
3.1.7. Cách tiến hành . .29
3.1.7.1. Phần mẫu thử . .29
3.1.7.2. Tiền tăng sinh . 29
3.1.7.3. Tăng sinh chọn lọc . .29
3.1.7.4. Phân lập Enterobacter sakazakii giả định . .29
3.1.7.5. Khẳng định . .30
3.1.8. Phân lập Enterobacter sakazakii trên môi trường vi sinh Brilliance
Enterobacter sakazakii Agar . .31
3.1.9. Phân lập Enterobacter sakazakii trên môi trường MacConkey . .32
3.1.10. Khẳng định sinh hóa . 33
3.1.10.1. Môi trường và thuốc thử trong thử nghiệm sinh hóa . .33
3.1.10.2. Phép thử Oxydase . .34
3.1.10.3. Phép thử L-Lysin decarboxylase, L-Ornithin decarboxylase . 34
3.1.10.4 Phép thử L- arginin dihydrolase . .34
3.1.10.5. Phép thử lên men các loại đường khác nhau . .34
3.1.10.6. Phép thử chỉ sử dụng Citrate . 34
3.1.10.7. Thử nghiệm Nitrate . .35
3.1.10.8. Thử nghiệm ONPG . .36
3.1.10.9. Thử nghiệm tính di động trên thạch mềm . .37
3.1.9.10. Thử nghiệm VP (voges-proskauer) . .38
3.2. Các phương pháp hiện đại . 39
3.2.1. Phương pháp PCR . .39
3.2.1.1. lịch sử phát triển . .40
3.2.1.2. Nguyên tắc . .40
3.2.1.3. Các thành phần tham gia vào quá trình PCR . .41
3.2.1.4. Phương pháp xác định Enterobacter sakazakii bằng phản ứng PCR . 43
3.2.2. Phương pháp real time PCR . 46
3.2.2.1. Lịch sử phát triển . .46
iii




3.2.2.2. Khái niệm và nguyên lí hoạt động . 47
3.2.2.3. Phương pháp tiến hành . .49
CHƯƠNG 4 : KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
4.1. Kết luận . 52
4.2. Kiến nghị . .53
Tài liệu tham khảo . 55
PHỤ LỤC . .56

CHƯƠNG I: GIỚI THIỆU
1.1 Đặt vấn đề
Trong xã hội hiện nay tình trạng ngộ độc thực phẩm ở trên thế giới và Việt
Nam là rất cao. Tình trạng này chưa có dấu hiệu dừng lại và càng ngày càng tăng.
Qua kiểm tra cho thấy hầu hết các vụ ngộ độc thực phẩm này là do vi sinh vật gây
ra. Đây là điều đã được cảnh báo và đã có cách thức phòng ngừa nhưng vẫn xảy ra
các vụ ngộ độc tập thể gây nguy hiểm và có thể dẫn đến tử vong.
Trong đó Vi khuẩn Enterobacter sakazakii là nguyên nhân gây ra các bệnh
như viêm màng não, viêm ruột hoại tử để lại nhiều di chứng nghiêm trọng về thần
kinh và có thể gây chết người. Tỷ lệ Enterobacter sakazakii gây tử vong ở bệnh
viêm màng não là 40-80% và viêm ruột hoại tử là 10-55%. Nguyên nhân lây nhiễm
chủ yếu của loại vi khuẩn này là do sử dụng sữa bột bị nhiễm Enterobacter
Sakazakii
Xuất phát từ những lý do trên tôi đã tiến hành thực hiện bài khóa luận: “Qui
trình phát hiện Enterobacter sakazakii trong sữa bột”. Để có cái nhìn tổng quan về
vi sinh vật này
1.2 Mục đích
Tìm hiểu về vi khuẩn Enterobacter sakazakii và qui trình phân lập và phát
hiện E. sakazakii trong sữa bột.
1.3 Nội dung nghiên cứu
- Tìm hiểu về giá trị dinh dưỡng của sữa bột và các mối nguy trong sữa
bột
- Tìm hiểu tổng quan về E. sakazakii
- Các qui trình phân lập E. sakazakii





䎓넹䂁긔䏄뮯䅂Η