Đồ Án Tìm hiểu các phương pháp tinh sạch protein và ứng dụng của nó

Trình bày các phương pháp tinh sạch protein và ứng dụng vào tinh sạch enzyme urease từ đậu nành

MỤC LỤC

Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2
1.1 Kỹ thuật tinh sạch protein 2
1.2.1 Khái niệm 2
1.2.2 Nguyên tắc 2
1.2 Giới thiệu một số kỹ thuật phân tách protein 2
1.2.1 Phương pháp ly tâm 2
1.2.2 Phương pháp thẩm tích 2
2.3 Phương pháp sắc ký 3
2.3.1 Phương pháp sắc ký lọc gel 3
2.3.2 Phương pháp sắc ký trao đổi ion 5
2.3.3 Phương pháp dùng chất hấp phụ đặc hiệu sinh học hay là phương pháp sắc ký ái lực (affinity Chromatography) 7
2.3.4 Sắc ký lỏng cao áp (sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC) 8
2.4 Phương pháp kết tủa 10
2.5 Phương pháp kết tinh protein 11
2.6 Làm khô và bảo quản chế phẩm protein 11
Chương 2: PHƯƠNG PHÁP TINH SẠCH PROTEIN BẰNG (NH4)2SO4 13
2.1 Cơ sở lý thuyết kết tủa protein 13
2.1.1 Khái niệm 13
2.1.3 Cơ chế của quá trình kết tủa protein bằng dung dịch muối có nồng độ cao 14
2.1.3 Đặc điểm của muối trung tính (NH4)2SO4 15
2.2 Thí nghiệm kết tủa enzyme Bromelain từ thân Dứa 16
2.2.1 Dụng cụ và hóa chất 16
2.2.2 Tiến hành 16
2.3 Kết quả 18
Chương 3: ỨNG DỤNG KHẢO SÁT CÁC PHƯƠNG PHÁP TINH SẠCH UREASE TỪ ĐẬU NÀNH 19
3.1 Urease 19
3.2 Urease 19
3.2.1 Khái niệm 19
3.2.2 Tính chất 19
3.3 Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu 21
3.3.1 Nguyên liệu 21
3.3.2 Phương pháp nghiên cứu 21
3.3.3 Chuẩn bị mẫu nghiên cứu 22
3.4 Kết quả 22


LỜI MỞ ĐẦU
Đất nước ngày càng phát triển, mức sống của người dân cũng được nâng cao nên nhu cầu về ăn, mặc, đáp ứng các dịch vụ cũng tăng lên. Để đáp ứng đầy đủ nhu cầu dinh dưỡng thì cơ thể cần cung cấp đầy đủ các acid amin nên protein là nguồn dinh dưỡng rất quan trọng cho con người nói riêng và vi sinh vật nói chung. Ngoài ra protein còn là chất xúc tác quan trọng cho các phản ứng sinh học trong sản xuất và được gọi là enzyme.
Từ trước tới nay chúng ta thường bảo quản thực phẩm bằng các loại hóa chất điều này có thể gây nguy hiểm đối với người tiêu dùng, do đó việc bảo quản thực phẩm bằng enzyme đã đem lại ý nghĩa hết sức to lớn vì nó có độ an toàn cao, tuy nhiên quy trình thực hiện để thu nhận và bảo quản enzyme cho việc sử dụng vẫn còn khó khăn, nó đòi hỏi công nghệ tiên tiến và kỹ thuật cao. Bên cạnh đó, enzyme được dùng trong lĩnh vực y dược để chuẩn đoán bệnh như: tiểu đường, bệnh thận qua các phép định lượng sinh hóa
Enzyme urease là một loại enzyme thuỷ phân ure hình thành NH3 và CO2, được ứng dụng rất nhiều trong Y học và Công nghiệp thực phẩm để định lượng ure trong các mẫu bệnh phẩm và nước chấm. Hiện nay vẫn phải nhập chế phẩm urease và kit urease từ nước ngoài với giá thành rất cao. Do đó chúng tôi tìm hiểu đề tài này nhằm tìm ra một quy trình tinh sạch urease hiệu quả nhất từ đậu nành, một nguồn nguyên liệu rẻ tiền và dễ kiếm.