Chuyên Đề Thu nhận enzyme protease từ nấm mốc Aspergillus awamori và ứng dụng trong quá trình thủy phân nội tạ

Tên đề tài

Thu nhận enzyme protease từ nấm mốc Aspergillus awamori và ứng dụng trong quá trình thủy phân nội tạng cá basa dùng chế biến thức ăn gia súc

​

MỤC LỤC



CHƯƠNG I: MỞ ĐẦU



CHƯƠNG II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU

2.1 Sơ lược về enzyme . 3

2.1.1 Khái quát chung về enzyme 3

2.1.2 Lịch sử phát triển 4

2.1.3 Tính chất của enzyme . 5

2.1.3.1 Bản chất sinh học . 5

2.1.3.2 Bản chất hóa học 5

2.1.4 Nguồn thu nhận enzyme 5

2.1.4.1 Nguồn enzyme động vật . 6

2.1.4.2 Nguồn enzyme thực vật 6

2.1.4.3 Nguồn enzyme vi sinh vật 6

2.2 Khái quát chung về enzyme protease 7

2.2.1 Định nghĩa 7

2.2.2 Phân loại protease . 8

2.2.3 Ứng dụng của protease . 9

2.2.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến tốc độ thủy phân của enzyme 11

2.2.4.1 Ảnh hưởng của nồng độ enzyme 11

2.2.4.2 Ảnh hưởng của nồng độ cơ chất 12

2.2.4.3 Ảnh hưởng của chât kiềm hãm và chất hoạt hóa 12

2.2.4.4 Ảnh hưởng của nhiệt độ 12

2.2.4.5 Ảnh hưởng của pH môi trường 13

2.2.4.6 Ảnh hưởng của thời gian thủy phân 13

2.2.4.7 Ảnh hưởng của lượng nước 14

2.3 Cá Basa và phế liệu trong quá trình chế biến 14

2.3.1 Đặc điểm sinh học của cá Basa . 14

2.3.1.1 Phân loại khoa học 14

2.3.1.2 Hình thái . 15

2.3.1.3 Phân bố 15

2.3.1.4 Đặc điểm dinh dưỡng 15

2.3.1.5 Đặc điểm sinh trưởng 15

2.3.1.6 Đặc điểm sinh sản 16

2.3.1.7 Mỡ cá Basa . 16

2.4 Tình hình sản xuất cá Basa ở Việt Nam 16

2.5 Phế liệu cá . 17

CHƯƠNG III: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.1 Đối tượng nghiên cứu 18

3.1.1 Khái quát chung về nấm mốc Asp awamori 18

3.1.2 Phương pháp nuối cấy nấm mốc Asp awamori . 18

3.1.2.1 Phương pháp giữ giống cấp 1 . 18

3.1.2.2 Làm môi trường thạch nghiêng 18

3.1.2.3 Cấy truyền giống 19

3.1.2.4 Phương pháp nuôi cấy trên môi trường bán rắn 19

3.1.2.5 Nuôi nấm mốc trong bình tam giác . 20

3.2 Phương pháp thu nhận enzyme protease 20

3.2.1 Xác định hàm lượng protein bằng phương pháp Braford 20

3.2.1.1 Nguyên tắc 20

3.3.1.2 Tiến hành thí nghiệm 21

3.3.1.3 Tính kết quả 22

3.2.2 Phương pháp xác định enzyme protease . 22

3.2.2.1 Nguyên tắc 22

3.2.2.2 Tiến hành thí nghiệm 22

3.2.3 Khảo sát ảnh hưởng của pH đến hoạt tính của enzyme 25

3.2.4 Khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ đến hoạt tính của enzyme 26

3.2.5 Ảnh hưởng của độ bền nhiệt đến hoạt tính của enzyme 27

3.2.6 Tinh sạch enzyme protease bằng sắc ký lọc gel . 27

3.2.6.1 Bản chất phương pháp 28

3.2.6.2 Hóa chất và dụng cụ 29

3.2.6.3 Tiến hành chạy sắc ký 29

3.2.7 Phương pháp điện di . 31

3.2.7.1 Thiết bị và dụng cụ 31

3.2.7.2 Hóa chất 32

3.2.7.3 Chuẩn bị mẫu và chạy điện di . 34

3.2.7.4 Xác định trọng lượng phân tử rotein . 35

3.3 Thủy phân nội tạng cá . 35

3.3.1 Xác định độ ẩm . 35

3.3.1.1 Nguyên tắc 35

3.3.1.2 Dụng cụ và vật liệu 35

3.3.1.3 Cách tiến hành 36

3.3.1.4 Tính kết quả 36

3.3.2 Xác định hàm lượng tro 36

3.3.2.1 Nguyên tắc 36

3.3.2.2 Dụng cụ và vật liệu 36

3.3.2.3 Tiến hành . 37

3.3.2.4 Tính kết quả 37

3.3.3 Xác định hàm lượng Canxi 37

3.3.4 Xác định hàm lượng Photpho 39

3.3.5 Xác định đạm tổng số theo phương pháp Kjeldahl 42

3.3.5.1 Nguyên tắc 42

3.3.5.2 Hóa chất và dụng cụ 43

3.3.5.3 Tiến hành 43

3.3.6 Xác định hàm lượng acid amin theo phương pháp chuẩn độ formol để đánh giá mức độ thủy phân protein . 44

3.3.6.1 Nguyên tắc 44

3.3.6.2 Hóa chất 45

3.3.6.3 Dụng cụ . 45

3.3.6.4 Tiến hành 46

3.3.6.5 Tính kết quả 46

3.3.7 Xác định protein bằng phương pháp Biure . 46

3.3.7.1 Nguyên tắc 46

3.3.7.2 Thực hành . 46

3.3.7.3 Tính kết quả 47

3.3.8 Xác định lượng NH[SUB]3[/SUB] bằng chưng cất hơi nước 47

3.3.8.1 Nguyên tắc 47

3.3.8.2 Dụng cụ và hóa chất 48

3.3.8.3 Tiến hành 48

3.3.8.4 Cách tính kết quả . 48

CHƯƠNG IV: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN

4.1 Kết quả các chỉ tiêu sinh hóa nội tạng cá basa chưa thủy phân (nguyên liệu ban đầu . 50

4.2 Thu nhận enzyme trước tinh sạch 50

4.3 Khảo sát các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt tính enzyme . 50

4.3.1 Ảnh hưởng của pH 50

4.3.2 Ảnh hưởng của nhiệt độ . 52

4.3.3 Ảnh hưởng của độ bền nhiệt . 53

4.4 Kết quả tinh sạch enzyme bằng phương pháp lọc gel . 55

4.4.1 Kết quả tinh sạch enzyme của hãng Amano . 55

4.4.2 Kết quả tinh sạch enzyme của mẫu 56

4.5 Kết quả tinh sạch enzyme bằng phương pháp điện di 59

4.6 Kết quả thủy phân nội tạng cá 63

4.6.1 Thủy phân ở 40[SUP]0[/SUP]C . 63

4.6.1.1 Hàm lượng protein theo phương pháp Biure . 63

4.6.1.2 Hàm lượng đạm amin 65

4.6.1.3 Hàm lượng NH[SUB]3[/SUB] . 66

4.6.2 Thủy phân ở 50[SUP]0[/SUP]C . 68

4.6.2.1 Hàm lượng protein theo phương pháp Biure . 68

4.6.2.2 Hàm lượng đạm amin 70

4.6.2.3 Hàm lượng NH[SUB]3[/SUB] 72

4.6.3 Thủy phân ở 60[SUP]0[/SUP]C . 73

4.6.3.1 Hàm lượng protein theo phương pháp Biure . 73

4.6.3.2 Hàm lượng đạm amin . 75

4.6.3.3 Hàm lượng NH[SUB]3 . [/SUB]76

CHƯƠNG V : KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ

TÀI LIỆU THAM KHẢO

PHỤ LỤC