Luận Văn Thử nghiệm dùng chất kích thích hệ miễn dịch Beta - 1,3/1,6 glucan nhằm nâng cao sức khỏe của cá Kho

Khóa luận tốt nghiệp
Đề tài: Thử nghiệm dùng chất kích thích hệ miễn dịch Beta - 1,3/1,6 glucan nhằm nâng cao sức khỏe của cá Khoang Cổ Đỏ (Amphiprion frenatusBrevoort, 1856) giống


MỤC LỤC
TRANG
LỜI MỞ ĐẦU . 1
CHƯƠNG 1: TỔNG LUẬN . 3
1. Hệmiễn dịch của cá . 3
2. Tình hình nghiên cứu vềsửdụng chất kích thích hệmiễn dịch trong nuôi
trồng Thủy sản trên thếgiới và Việt Nam 4
2.1. Tình hình nghiên cứu vềsửdụng chất kích thích hệmiễn dịch trong
nuôi trồng thủy sản trên thếgiới . 4
2.1.1. Chất kích thích hệmiễn dịch - Imumunostimulant . 4
2.1.2. Cơchếtác dụng của Beta - 1,3/1,6 glucan ởcá . 7
2.1.3. Thời điểm dùng chất kích thích hệmiễn dịch 9
2.1.4. Kỹthuật gây miễn dịch . 10
2.1.5. Nồng độvà thời gian sửdụng chất kích thích hệmiễn dịch 11
2.2. Tình hình nghiên cứu vềsửdụng chất kích thích hệmiễn dịch trong
nuôi trồng Thủy sản ởViệt Nam 11
3. Một số đặc điểm sinh học sinh sản và giá trịkinh tếcủa cá Khoang Cổ Đỏ 12
3.1. Một số đặc điểm sinh học sinh sản của cá Khoang Cổ Đỏ . 12
3.2. Giá trịkinh tế 14
CHƯƠNG 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15
1. Thời gian, địa điểm và đối tượng nghiên cứu . 15
2. Bốtrí thí nghiệm 15
3. Phương pháp thu thập và xửlý sốliệu 20
CHƯƠNG 3: KẾT QUẢNGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 22
1. Ảnh hưởng của chất kích thích hệmiễn dịch Beta –1,3/1,6 glucan lên tỷlệ
sống, hàm lượng đạm và sức đềkháng của cá Khoang Cổ Đỏtừkhi cá đạt 3
ngày tuổi . 22
1.1. Biến động yếu tốmôi trường trong thời gian thí nghiệm . 22
1.2. Tỷlệsống của cá Khoang Cổ Đỏtừ3 ngày tuổi 23
1.3. Hàm lượng đạm tổng sốcủa toàn bộcơthểcá . 25
1.4. Sức đềkháng của cá đối v ới vi khuẩn Vibrio alginolyticus . 26
2. Ảnh hưởng của chất kích thích hệmiễn dịch Beta –1,3/1,6 glucan lên tốc độ
tăng trưởng, tỷlệsống, hàm lượng đạm và sức đềkháng của cá Khoang Cổ Đỏ
từkhi cá đạt 1 tháng tuổi . 30
2.1. Biến động yếu tốmôi trường trong thời gian thí nghiệm . 30
2.2. Tốc độtăng trưởng của cá Khoang Cổ Đỏ1 tháng tuổi . 31
2.3. Tỷlệsống của cá Khoang Cổ Đỏ1 tháng tuổi . 34
2.4. Hàm lượng đạm tổng số(mg/g khô) trong toàn bộcơthểcá 36
2.5. Sức đềkháng của cá đối với vi khuẩn Vibrio alginolyticus 36
KẾT LUẬN VÀ ĐỀXUẤT Ý KIẾN 38
1. Kết luận . 38
1.1. Tỷlệsống của cá . 38
1.2. Tốc độtăng trưởng . 38
1.3. Hàm lượng đạm tổng số . 38
1.4. Sức đềkháng của cá đối với vi khuẩn Vibrio alginolyticus 38
2. Đềxuất ý kiến . 39
TÀI LIỆU THAM KHẢO 40
DANH MỤC BẢNG
TRANG
Bảng 1: Yếu tốmôi trường nước trong quá trình thí nghiệm cá 3 ngày tuổi . 22
Bảng 2. Tỷlệsống của cá Khoang Cổ Đỏ3 ngày tuổi trong 25 ngày thí nghiệm . 23
Bảng 3: Hàm lượng đạm tổng sốcá Khoang Cổ Đỏsau 25 ngày nuôi . 26
Bả ng 4: Tỷ l ệ t ửvong l ũy tích và h ệ s ố b ả o v ệ t ươ ng đố i (% RPS) c ủa cá Khoang C ổ Đỏ3
ngày tu ổ i sau khi gây c ảm nhiễm vi khuẩ n Vibrio alginolyticus 27
Bảng 6: Biến động nhiệt độvà độmặn trong thời gian thí nghiệm cá 1 tháng tuổi
30
Bả ng 7: T ố c độ t ă ng tr ưở ng c ủ a cá Khoang C ổ Đỏ1 tháng tu ổ i trong th ờ i gian thí nghi ệ m 32
Bảng 8: Tỷlệsống của cá Khoang Cổ Đỏ1 tháng tuổi trong 21 ngày nuôi . 34
Bảng 9: Hàm lượng đạm tổng số(mg/g khô) của cá Khoang Cổ Đỏ 36
Bảng 10: Phân lập vi khuẩn ởcá Cá Khoang Cổsau 3 tuần gây cảm nhiễm . 37
DANH MỤC HÌNH
TRANG
Hình 1: Sơ đồbốtrí thí nghiệm ảnh hưởng của Beta-1,3/1,6 glucan lên tỷlệsống,
hàm lượng đạm tổng sốvà sức đềkháng cá Khoang Cổ Đỏtừ3 ngày tuổi 17
Hình 2: Sơ đồbốtrí thí nghiệm ảnh hưởng của Beta-1,3/1,6 glucan lên sinh trưởng,
tỷlệsống, hàm lượng đạm tổng sốvà sức đềkháng của cá Khoang Cổ Đỏtừ1 tháng
tuổi. . 19
Hình 3: Hệthống bểthí nghiệm . 20
Hình 4: Cân khối lượng cá . 20
Hình 5: Đồth ị biến động nhiệt độvà độmặn trong thời gian thí nghi ệm cá từ3 ngày tuổi
22
Hình 6: Tỷlệsống của cá Khoang Cổ Đỏ3 ngày tuổi trong 25 ngày đầu 24
Hình 7: Đồthịtỷlệsống của cá Khoang Cổ Đỏsau khi cảm nhiễm vi khuẩn
Vibrio alginolyticus 28
Hình 8: Đồthịbiến động nhiệt độvà độmặn trong thời gian thí nghiệm . 31
Hình 9: Tốc độtăng trưởng vềchiều dài của cá Khoang Cổ Đỏ . 33
Hình 10: Tốc độtăng trưởng vềtrọng lượng của cá Khoang Cổ Đỏ . 33
Hình 11: Tỷlệsống của cá Khoang Cổ Đỏ1 tháng tuổi trong 21 ngày nuôi 35
THUẬT NGỮVIẾT TẮT
1. CNNT : Công NghệNuôi Trồng
2. CFU : Colony Form Unit
3. NTTS : Nuôi trồng thuỷsản
4. h : Giờ
5. mL : mililít
6. N : Sốcon
7. ppm : part per million
8. Ts. : Tiến sĩ
9. TNHH SX & TM: Trách nhiệm hữu hạn sản xuất và thương mại
10. RPS : Relative Percent Survival (%)
LỜI MỞ ĐẦU
Bệnh nhiễm khuẩn là nguyên nhân chính dẫn đến sựtổn thất lớn trong
nuôi trồng thủy sản. Nhìn chung, các phương pháp phòng trịbệnh bằng hóa chất
hay vaccine đã mang lại hiệu quảnhất định trong phòng trịbệnh nhiễm khuẩn
cho tôm cá nuôi. Tuy nhiên, các phương pháp này thường ảnh hưởng xấu đến
môi trường bởi sựtích tụcủa chúng trong nước và trên nền đáy. Thêm nữa, việc
dùng kháng sinh và hóa chất có thểgây nên những dòng vi khuẩn kháng thuốc
dẫn đến chi phí tốn kém mà hiệu quảlại không cao.
Chất kích thích hệmiễn dịch có tác dụng tăng cường hoạt động hệmiễn
dịch tựnhiên khi được áp dụng một mình hoặc có thếkích thích đồng thời hệ
miễn dịch tựnhiên và hệmiễn dịch đặc hiệu khi nó được đi kèm với vaccine
hoặc khi cá bịviêm nhiễm (Philip et al, 2001). Gần đây việc dùng chất kích thích
hệmiễn dịch có nguồn gốc tựnhiên ngày càng được xem là một giải pháp an
toàn và bền vững trong việc nâng cao sức khỏe và phòng bệnh cho đối tượng
nuôi thuỷsản bởi nó không gây ô nhiễm môi trường, chi phí thấp lại dễáp dụng.
Cho đến nay, Beta glucan được coi là chất kích thích hệmiễn dịch có hiệu quả
nhất đối với tôm, cá nuôi và nó được sửdụng nhưmột thành phần quan trọng
trong thức ăn nuôi tôm công nghiệp (Lall và Olivier, 1995). Tuy nhiên, việc xác
định liều dùng, thời gian và phương pháp sửdụng hợp lý của Beta glucan đối với
từng đối tượng nuôi vẫn chưa được nghiên cứu nhiều ởnước ta.
Cá Khoang Cổ Đỏ Amphiprion frenatus là loài cá cảnh phổbiến ởViệt
Nam, tuy ít có giá trịvềmặt thực phẩm nhưng nhờmàu sặc sỡ, khảnăng thích
nghi cao trong điều kiện nuôi nhốt và đặc điểm đặc trưng là luôn sống cộng sinh
cùng Hải quỳnên loài cá này đã được thịtrường cá cảnh ởtrong nước cũng như
trên thếgiới rất ưa chuộng. Cá đã được Phòng Công NghệNuôi Trồng (CNNT)
nghiên cứu đặc điểm sinh học sinh sản và bước đầu thửnghiệm sinh sản nhân tạo
thành công. Hiện nay Phòng đang tiếp tục thực hiện đềtài “Hoàn thiện quy trình
sản xuất giống và nuôi thương mại cá Khoang Cổ Đỏ”. Tuy nhiên, tỷlệsống của
đàn cá giống vẫn chưa ổn định. Mặt khác, trong điều kiện nuôi giữ, ngay cảcá
trưởng thành cũng có thểbịsốc trước sựthay đổi điều kiện môi trường và thường
chết nhiều nhất vào thời gian cá được chuyển từngoài tựnhiên vào môi trường
nuôi giữ. Do vậy việc thửnghiệm dùng chất kích thích hệmiễn dịch đểnâng cao
sức khỏe cho loài cá này là nội dung cần thiết nhằm đưa ra được phương pháp
phòng bệnh hiệu quảvà bền vững trong sản xuất giống nhân tạo và nuôi thương
mại các đối tượng này.
Xuất phát từthực tiễn trên, được sự đồng ý chấp thuận của Phòng CNNT , Viện
Nghiên cứu Biển và theo sựphân công của Bộmôn Bệnh Học – Khoa Nuôi trồng
Thủy sản – Trường Đại học Nha Trang tôi đã thực hiện đềtài: “Thửnghiệm
dùng chất kích thích hệmiễn dịch Beta - 1,3/1,6 glucan nhằm nâng cao sức
khỏe của cá Khoang Cổ Đỏ(Amphiprion frenatusBrevoort, 1856) giống.
Mục tiêu của đềtài:
- Bước đầu đánh giá hiệu quảcủa chất kích thích hệmiễn dịch Beta glucan
lên sức khỏe của cá Khoang Cổ Đỏtrong điều kiện nuôi giữ.
- Tạo tiền đềcho việc nghiên cứu sửdụng chất kích thích hệmiễn dịch
Beta glucan nhằm nâng cao tỷlệsống của đàn cá giống trong sinh sản nhân tạo
và nuôi thương mại cá Khoang Cổ Đỏ.
Nội dung nghiên cứu đềtài:
1. Ảnh hưởng của chất kích thích hệmiễn dịch Beta – 1,3/1,6 glucan lên
tỷlệsống, hàm lượng đạm và sức đềkháng của cá Khoang Cổ Đỏtừkhi cá đạt 3
ngày tuổi
2. Ảnh hưởng của chất kích thích hệmiễn dịch Beta – 1,3/1,6 glucan lên
tốc độtăng trưởng, tỷlệsống, hàm lượng đạm và sức đềkháng của cá Khoang
Cổ Đỏtừkhi cá đạt 1 tháng tuổi
Ý nghĩa khoa học, thực tiễn của đềtài:góp phần đưa ra được phương
pháp phòng bệnh hiệu quảvà bền vững trong sản xuất giống nhân tạo và nuôi
thương mại các đối tượng này.


CHƯƠNG 1: TỔNG LUẬN
1. Hệmiễn dịch của cá
Hệmiễn dịch được định nghĩa là một hệthống tựhoàn thiện trong cơthể
sống nhằm giúp cơthểtựbảo vệvà sinh tồn. Cá là một trong những động vật có
xương sống nguyên thủy nhất và được coi là trung gian giữa động vật có xương
sống và động vật không có xương sống. Đểcó thểtồn tại trong môi trường nước
nơi chứa nhiều loại tác nhân gây bệnh, đặc biệt là các loại vi sinh vật đa dạng về
đặc tính, kích thước và hình dạng, cá phải thích nghi tốt để đương đầu với những
thách thức của môi trường. Thông thường cơchếbảo vệcủa cá có thể được phân
làm 2 loại: Cơchếbảo vệtựnhiên (bẩm sinh) hay còn gọi là cơchếbảo vệ
không đặc hiệu (non-specific) và cơchếbảo vệ đạt được do sựthích nghi với
môi trường sống hay còn gọi là cơchếbảo vệ đặc hiệu (specific). Hai cơchếnày
luôn hoạt động trong mối quan hệqua lại và hỗtrợlẫn nhau.
Cơchếbảo vệcơbản và quan trọng nhất ởcá chính là cơchếbảo vệtự
nhiên. Sựmiễn dịch tựnhiên của cá được xem nhưmột khảnăng bẩm sinh, giúp
cá tựtạo ra kháng thểtựnhiên chống lại các tác nhân gây bệnh mà không cần có
sựkích thích của chúng. Đó là kết quảthích nghi của nhiều thếhệcá sống chung
với những tác nhân gây bệnh vốn có trong môi trường (Post, 1987).
Cơchếhoạt động của hệmiễn dịch tựnhiên bao gồm bảo vệcơhọc như
da, vảy và chất nhày; bảo vệbởi thểdịch trong tếbào và trong máu nhưcác hệ
men (lysozyme, complement system), các loại đạm (C-reactive protein,
transferrin, interferons) và bảo vệbởi các tếbào bạch cầu, thực bào
(macrophages và neutrophils) (Fletcher, 1986). Dịch tếbào và huyết thanh cá
cũng chứa rất nhiều các chất ức chếmen có tác dụng bảo vệcơthểchống lại sự
tựtiêu hóa đồng thời chúng cũng đóng vai trò quan trọng trong việc trung hòa
các men do tác nhân gây bệnh sinh ra (Roberts, 2001).
2. Tình hình nghiên cứu vềsửdụng chất kích thích hệmiễn dịch trong nuôi
trồng Thủy sản trên thếgiới và Việt Nam
Cùng với sựphát triển mạnh mẽcủa nghềnuôi trồng thủy sản cảvềquy
mô lẫn mức độthâm canh, tình hình dịch bệnh trên các đối tượng nuôi thủy sản
ngày càng nghiêm trọng, đòi hỏi phải có các biện pháp phòng bệnh hữu hiệu
nhằm giảm bớt thiệt hại cho các nhà sản xuất. Imumunostimulants- chất kích ứng
hệmiễn dịch tựnhiên hiện nay đang là chất được sửdụng rộng rãi trên thếgiới
đểtăng cường khảnăng đềkháng bệnh cho các đối tượng nuôi trồng thủy sản.
2.1. Tình hình nghiên cứu vềsửdụng chất kích thích hệmiễn dịch trong
nuôi trồng thủy sản trên thếgiới.
2.1.1. Chất kích thích hệmiễn dịch - Imumunostimulant
Imumunostimulants: là những hợp chất sinh học hoặc tổng hợp nhân tạo
có khảnăng làm tăng cường hệthống miễn dịch không đặc hiệu của động vật
(Trích từFenichel và Chirigos, 1984).
Một sốImumunostimulant là chếphẩm chiết từvách tếbào vi khuẩn
Steptococcus pyogenes, Mycobacterium spp, Norcadia rubrata,
Propionibacterium sp, tếbào đã được giết chết và làm khô của Mycobacterium
tuberculosishòa trong dầu (Freund adjuvant). Các chất hoạt tính của chếphẩm
vách tếbào vi khuẩn là lipopolysaccharide (LPS), lipopeptides, muramylpeptide,
acyloligopeptide và một sốpeptide khác.
Imumunostimulants là nhóm các chất (bao gồm cảmột sốchất bổtrợ) có
khảnăng làm gia tăng sức đềkháng bệnh truyền nhiễm, không phải bằng việc gia
tăng đáp ứng miễn dịch đặc hiệu, mà là bằng việc tăng cường cơchếmiễn dịch
tựnhiên, đặc biệt là hệthực bào. Khảnăng đềkháng này không đặc hiệu, không
có ký ức miễn dịch và thời gian bảo vệtương đối ngắn. Tuy nhiên,
imumunostimulant hiện có ý nghĩa rất lớn và được sửdụng khá rộng rãi trong
nghềnuôi trồng thủy sản trên thếgiới nhằm gia tăng khảnăng đềkháng bệnh cho
các đối tượng nuôi trồng khi chưa có vaccine thích hợp [ĐỗThịHoà et al, 2004].
Imumunostimulants tăng cường sức đềkháng của cá bằng cách điều chỉ nh cơ
chếbảo vệcủa cơthểchống lại tác nhân gây bệnh. Các chất này có thể được phân
chia theo các nhóm khác nhau dựa vào chức năng hoặc nguồn gốc của chúng như
nguồn gốc tựnhiên ( vi khuẩn, nấm, dị ch chiết động , thực vật ) ho ặc nhân tạo.
FK_156 là một peptid có khảnăng tăng cường sức đềkháng cho chuột thí
nghiệm chống lại các bệnh do vi khuẩn khi tiêm hoặc cho ăn. Kitao và Yoshida
(1986) thông báo rằng khi tiêm FK-156 cho cá hồi Ráng Oncorhynchus mykiss1
ngày trước khi gây nhiễm cá với vi khuẩn Aeromonas salnonicidathì sức đề
kháng vi khuẩn của cá thí nghiệm tăng lên đáng kể. Hi ệu quảbảo vệnày vẫn
được duy trì vào ngày thứ7 sau khi tiêm, tuy có thấp hơn so với lần gây
nhiễm trước đó. Cơchếcủa hiệu quảbảo vệnày thểhiện ởsựgia tăng hoạt
tính thực bào và cũng có hiệu quảcả ởnhóm cá thí nghiệm bịgây ức chếmiễn
dịch [ĐỗThịHoà et al, 2004].
Ete (dịch chiết từ động vật xoang tràng ởbiển Ecteinascidia turbinata) có
khảnăng tăng đềkháng không đặc hiệu đối với nhiều loại vi khuẩn gây bệnh, kể
cả Aeromonas hydrophila, ởcá Chình thí nghiệm bằng phương pháp tiêm (Sigel et
al, 1983). Yano et al (1989) đã công bốchất schizophylan, scleroglucan và
lentinan gia tăng sức đềkháng của cá chép đối với Edwardsiella tardabằng
sựhoạt hóa hệmiễn dịch tựnhiên.
Các tác nhân cơhội thường chỉgây bệnh cho vật chủkhi vật chủbịyếu hoặc
bịsốc trong điều kiện môi trường xấu. Những tác nhân cơhội này có thể ảnh hưởng
xấu đến quá trình sinh trưởng nói chung của của vật chủngay cảkhi điều kiện môi
trường tốt và vật chủkhông có dấu hiệu gì của bệnh tật. Chất kích thích hệmiễn
dịch có thểtăng cường cơchếbảo vệcủa cơthểlàm mất tác dụng của tác nhân gây
bệnh cơhội vì vậy tăng cường quá trình phát triển và giảm tỷlệtửvong của vật chủ.
Theo Baba et al (1993), sức đềkháng đối với vi khuẩn Aeromonas hydrophilavà
khảnăng thực bào của cá chép thường Cyprinus carpiotăng đáng kểsau khi được
tắm dung dịch levamisole (10µL/mL, 24 giờ). Jeney và Anderson (1993) cũng cho
thấy rằng cá Hồi Ráng Oncorhynchus mykiss được tắm 30 phút trong dung dịch
levamisole (5µL/mL) trước khi tắm 2 phút trong dung dịch A. samonicidathì hoạt
động hệmiễn dịch đặc hiệu và không đặc hiệu tăng đáng kể.
Khác với cá và động vật máu nóng, tôm và các động vật không xương sống
phụthuộc hoàn toàn vào hệmiễn dịch không đặc hiệu và không có khảnăng sinh


TÀI LIỆU THAM KHẢO
TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT
1. Catalogue (2006) Sản phẩm phục vụngành nuôi trồng thuỷsản. Công ty
TNHH SX& TM Văn Minh AB. 13 Đường Bàu Cát 8- P.14- Q. Tân Bình,
tp. HCM.
2. ĐỗThịHoà, Bùi Quang Tề, Nguyễn Hữu Dũng và Nguyễn ThịMuội (2004).
Bệnh học thuỷsản. NXB Nông nghiệp, trang 153-157.
3. Hà Lê ThịLộc (2004) Nghiên cứu cơsởsinh học phục vụcho sinh sản nhân
tạo cá Khoang Cổ Đỏ(Amphiprion sp.) vùng biển Khánh Hòa, 174
trang.). Bản thảo luận án tiến sĩNgưloại học.
TÀI LIỆU NƯỚC NGOÀI
4. Allen and Foutin (1972) Field guide to anemonefish and their host sea
anemone western Australia Museum 1992, 160 pp.
5. Anderson, D., 1992. Immunostimulants, adjiuvants and vaccine carriers in
fish: applications to aquaculture. Ann. Rev. FishDis., 2: 281 – 307.
6. Anderson, D.P. , Siwicki, A.K., Rumsey, G.L., 1995. Injection or immersion
delivery of selected immunostimulants to trout demonstrate enhancement of
nonspecific defense mechanisms and protective immunity. In. Shariff, M.,
Subasighe, R.P., Arthur, J.R., Diseases in Asian Aquaculture Vol. 11. Fish
Health Section, Asian Fisheries Society, Manila, Philippines, pp.413 – 426.
7. Baba, T ., Yoshinaga, Y ., 1993. Activation of mononuclear phagocyte
function by levamisole immersion in carp. Nippon Suisan Gakkaishi 59,
pp. 301 – 307.
8. Baldwin, T.J. , Newton, J.C., 1996. Pathogenesis of enteric septicemia of
channel catfish, caused by Edwardsiella ictaluri: bacteriological and light
and electron microscope findings. J. Aquat. Anim. Health 5, 189 – 198.
9. Boonyaratpalin, S ., Boonyaratpalin, M., Supamattaya, K., Toride, Y ., 1995.
Effects of peptidoglucan PG on growth, survival, immune responses, and
tolerance to stress in black tiger shrimp, Penaeus monodon. In: Shaif, M.,
Subasighe, R.P., Arthur, J.R. Eds. , Diseases in Asian Aquaculture Vol. 11.
Fish Health Section, Asian Fisheries Society, Manila, Philippines, pp. 469 – 477.
10. Davina, J. H. M., Rijekers, G. T., Rombout, J.H.W.M., Timmermans. L. P.
M., Van Muiswinkel, W.B., 1980. Lymphoid and non-lymphoid cells in
the intestine of cyprinid fish, p. 129 – 140. In: Development and
differentiation of vertebrate lymphocytes, (J. D. Horton, ed.)
Elsevier/North-Holland Biomedical Press, Amterdam.
11. Doggett, T. A., Harris, J. E., 1987. The ontogeny of gut-associated lymphoid
tissue in Orechromis mossambicus. J. Fish Biol. 31, suppl. A, 23 – 27.
12. Ducan, L.; Klesius, H., 1996. Effects of feeding Spirulina on specific and
nonspecific immune responses of channel catfish. J. Aquatic Animal
Health, 8 (4): 308 – 313.
13. Engstad R. E. and Robertsen, B., 1994. Recognitionof yeast cell wall glucan
by Atlantic salmon ( Salmon salarL.) macrophages. Dev. Comp.
Immunol., 17: 319 – 330.
14. Gutenberger, S. K., Duimstra, J.R., Rohovec, J.S.,Fryer, J.L., 1997.
Intracellular survival of Renibacterium salmoninarumin trout
mononuclear phagocytes. Dis. Aquat. Org. 28, 93 – 106.
15. Jeney, G. and Anderson, D., 1993. Enhanced immune response and
protection in rainbow trout to Aeromonas salmonicidabacterin
fo;;wing prior immersion in immunostimulants.Fish Shellfish
Immunol., 3(1): 51 – 58.
16. Jorgensen, J. B., Sharp, G. J. E., Secombes, C. J., and Robertsen, B., 1993.
Effect of a yeast cell wal glucan on the bactericidal activity of rainbow
trout macrophages. Fish Shellfish Immunol. 3: 267 – 277.
17. Kitao, T., Yoshida, T., 1986. Effect of an immunopotentiator on Aeromonas
salmonicidainfection in rainbow trout Salmo gairdneri. Vet. Immunol.
Immunopathol. 12, 287 – 291.
18. Lall, S and Oliver, G., 1991. Role of micronutrients in immune response and
disease resistance in fish. InFish Nutrition and Practice(INRA, ed.).
19. Matsuo, K., Miyazono, I., 1993. The influence of long – term administration
of peptidoglycan on disease resistance and growth of juvenile rainbow
trout. Nippon Suisan Gakkaishi 59, 1377 – 1379.
20. Nelson, J. S., Kawahara, E., Kawai, K., Kusuda, R., 1989. Macrophage
infiltration in pseudotuberculosis of yellowtail Seriola quinqueradiata.
Bull. Marine Sci. Fish. Kochi Univ. 11, 17 – 22.
21. Nicolletti, A., Nicoletti, G., Ferraro, G., Palmieri, G., Mattaboni, P.,
Germogli, R., 1992. Preliminary Evaluation of Immunoadijuvant Activity
of an Orally Administered Glucan Extracted from Candida albicans.
Arzneim – Forsch./Drug Res. 42 (II). Nr. 10.
22. Nikil, L., Evelyn, T.P.T., Albright, L.J., 1993. Trials with an orally and
immersion – administered h-1,3 glucan as an N Couso et al. / Aquaculture
219 (2003) 99-109 108 immunoprophyactic against Aeromonas
salmonicida in juvenile Chinook salmon Oncorhynchus tshawytscha. Dis.
Aquat. Org. 17, 191 – 196.
23. Philip, R., Sreekumar. K., Anas, A. and Bright Singh l. S., 2001.
Immunostimulants – Source, diversity, commercial preparations and mode
of application. Natl. workshop on Aquaculture Medicine. p.74.
24. Post, G., 1987. Textbook of fish health. Manufactured in the United States of
America by T. F. H. Publication, Inc. pp. 215 – 216.
25. Quinghui Ai, Kanggsen Mai, Lu Zhang, Beiping tan, Wenbing Zhang, Wei
Xu, Huitao Li ,2006. Effects of dietary β- 1,3 glucan on innate immune
response of large yellow croaker, Pseudosciaena crocea. 1, 4-7.
26. Raa, J., 1996. The use of immunostimulatory substances in fish and shellfish
farming. Reviews Fish. Sci. 4, 288 – 299.
27. Raa, J., Rorstad, G., Engstad, R., Robertsen, B., 1992. The use of
immunostimulants to increase resistance of aquaticorganisms to microbial
infections. In: Shariff, I.M., Subasinghe, R.P., Arthur, J.R. (Eds), Diseases
in Asian Aquaculture. Fish Health Section, Asian Fisheries Society,
Manila, Philippines, pp:39-50.
28. Robertsen, B., Rorstad, R. amd Raa. J., 1990. Enhancement of non-specific
disease resistance in Atlantic Salmon,Salmo salarL., by a glucan from
Saccharomyces cerevisiae cell walls. J. Fish Dis., 13: 391 – 400.
29. Rombout, J. H. W.M., Bot. H. E., Taverne-Thiele, J.J., Villena, M.l., 1993.
The gutassociates lymphoid tissue (GALT) of carp (Cyprinus carpioL):
An immunocytochemical analysis. Dev. Comp. Immunol. 17, 55-66.
30. Rostad, G., Aasjord, P.M., Robertsen, B., 1993. Adjuvant effects of yeast
glucan in vaccines against furunculosis in Atlantic salmon (Salmo salar
L). Fish Shellfish Immunol., 3, 179-190.
31. Sahoo, P. K and Mukherjee, S. C., 1999. influence of the immunostimulant,
chitosan on inmmune responses of healthy and cortisol- treated Rohu
(Labeo rohita). J.Aqua. Trop., 14 (3): 209- 215.
32. Sahoo, P. K and Mukherjee, S. C.,2001a. Dietary intake of levamisole
improves non – specific immunity and disease resistance of health and
aflatoxin – induced immunocompromised Rohu, Labeo rohita. J. Applied
Aquacult., 11:4.
33. Sahoo, P. K and Mukherjee, S. C.,2001b. Immunosuppressive effect of
aflatoxin B
1
in Indian major carp (Labeo rohita).Comp. Immunol.
Microbiol. Infectious Dis., 24: 143 – 149.
34. Selvaraj, K. Sampath, v. Sekar, 2005. Administration of yeast glucan
enhances survival and some non-specific and specific immune parameters
in carp (Ciprinus carpio) infected with Aeromonas hydrophila, 1, 294- 304.
35. Shoenherr, W. D., Pollman, D. S., Coalson, J. A., 1994. Titration of MacroGard
on growth performance of nurserypigs. J. Anim. Sci. 72: Suppl.1.
36. Skjermo, Trond R, Storseth, Karina Hansen, Aleksander Handa, Gunvor Oie
(2006) Evalution of β- 1,3/1,6 glucan and High – M alginate used as
immunostimulatory supplement during first feeding and weaning of
Atlantic cod (Gadus morhuaL.) 1, 5-11
37. Siwicki, A. K., 1989. Immunostimulating influence of levamisole on non–
specific immunity in carp (Cyprinus c arpio). Dev. Comp. Immunol., 13: 87-91.
38. Sung, H.H., G.h., Song, Y.L., 1994. Vibriosis resistace induced by glucan
treatment in tiger shrimp, Penaeus monodon. Fish Pathol. 29, 11-17.
39. Supamattaya., Pongmaneerat., 1998. The effect of MacroGard on growth
performance and health condition of black tiger shrimp. Scientific report,
Princ of Songkhla University.
40. Thompson, l., White, A., Fletcher, T.C., Houlihan,D.F., Secombers, C.J.,
1993. The effect of stress on the immune responsesof Atlantic salmon
Salmo salarL. fed diets containing different amounts of vitamin C.
Aquaculture 114, 1-18.
41. Verlhac V, Obach A, Gabaudan J, shuep W, hole R. Immunomodulation by
dietary vitamin C and glucan in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss).
Fish Shellfish immunology 1998; 8: 409e24.
42. Wedemeyer and mcLealy, 1981. Methods for determining the tolerance of
fishes to environmental stressor. Pp. 248 – 275. In A. D. Pickering, editor.
Stress and fish. Academic Press. New York.
43. Wiegertjes, G. F., R. J. M. Stet, H. k. Parmentier, and Muiswinkel, W. B.,
1996. Immunogenetics of Disease Resistance in Fish: A Comparative
Approach. Dev. Comp. Immunol., 20: 365 – 381.
44. Williams, D. L., 1997. Overview of (1 – 3) β– D- glucan immunology.
Mediator of Inflammation, 6: 247 – 250.
45. Williams, D. L., Mueller, A. and browder, w., 1996. Glucan-based
macrophage stimulators. A review of thei anti-infective potential. Clinical
Immunotherapy, 5: 392 – 399.
46. Yoshida, T., kruger, R., Inglis, V., 1995. Augmentation of non-specific
protection in African catfish, Clarias gaiepinus(Burchell), by the long-
term oral administration of immunostimulants. J. Fish Dis. 18, 198 – 198.