Luận Văn Tạo kháng thể đơn dòng kháng protein e7 human papillomavirus type 16

-i-
MỤC LỤC
Trang phụ bìa
Lời cảm ơn
MỤC LỤC i
DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT . v
DANH MỤC CÁC BẢNG . vii
DANH MỤC CÁC HÌNH VÀ ĐỒ THỊ .viii
MỞ ĐẦU . 1
CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.1. HUMAN PAPILLOMAVIRUS VÀ UNG THƯ CỔ TỬ CUNG . 3
1.1.1. Sơ lược về tình hình ung thư cổ tử cung trên thế giới và Việt Nam 3
1.1.2. UTCTC do Human papillomavirus 4
1.1.3. Chu trình xâm nhiễm của HPV 5
1.2. PROTEIN E7 HUMAN PAPILLOMAVIRUS TYPE NGUY CƠ CAO 6
1.2.1. Cấu trúc protein E7 6
1.2.2. Vai trò của protein E7trong phát sinh ung thư 7
1.3. KHÁNG THỂ ĐƠN DÒNG 10
1.3.1. Cấu trúc của kháng thể . 10
-ii-
1.3.2. Sự tương tác giữa kháng nguyên và kháng thể . 11
1.3.3. Kháng thể đơn dòng và một số ứng dụng . 13
1.4. SẢN XUẤT KHÁNG THỂ ĐƠN DÒNG BẰNG KỸ THUẬT TẠO TẾ BÀO
LAI (HYBRIDOMA) . 14
1.4.1. Các bước chính trong sản xuất KTĐD . 15
1.4.2. Một số công trình trong và ngoài nước liên quan đến việc tạo KT ĐD
kháng protein E7 của Human papillomavirus 24
CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU - PHƯƠNG PHÁP
2.1. VẬT LIỆU 26
2.1.1. Tế bào 26
2.1.2. Kháng nguyên 26
2.1.3. Chuột dùng gây đáp ứng miễn dịch 26
2.1.4. Hóa chất – Môi trường: 27
2.2. PHƯƠNG PHÁP . 31
2.2.1. Gây đáp ứng miễn dịch trên chuột . 31
2.2.2. Dung hợp tạo tế bào lai (hybridoma) 32
2.2.3. Phương pháp nhân dòng tế bào lai sản xuất KTĐD in vitro và thu nhận
KTĐD 35
2.2.4. Phương pháp điện di SDS-PAGE kiểm tra độ tinh sạch của KTĐD . 36
2.2.5. Phương pháp ELISA 36
-iii-
2.2.6. Phương pháp chuyển gene vào tế bào CHO-K1 . 37
2.2.7. Xác định ái lực của các KTĐD bằng phương pháp ELISA . 37
2.2.8. Các phương pháp kiểm tra đặc tính của KTĐD 38
CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ - THẢO LUẬN
3.1. TẠO CÁC DÒNG TẾ BÀO LAI SẢN XUẤT KTĐD KHÁNG PROTEIN E7
HPV-16 41
3.1.1. Kết quả gây đáp ứng miễn dịch chuột BALB/c 41
3.1.2. Kết quả dung hợp tạo tế bào lai sản xuất KTĐD 42
3.1.3. Kết quả sàng lọc các dòng tế bào lai tạo kháng thể kháng protein E7 HPV-
16 42
3.2. THU NHẬN KTĐD TỪ MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY TẾ BÀO . 44
3.2.1. Xác định isotype của KTĐD 44
3.2.2. Kết quả thu nhận KTĐD 45
3.3. CÁC ĐẶC TÍNH CỦA KTĐD 46
3.3.1. Xác định hằng số ái lực của KTĐD 46
3.3.2. Tính đặc hiệu của KTĐD với protein E7 HPV-16 tái tổ hợp 49
3.3.3. Tính đặc hiệu của KTĐD với protein E7 HPV-16 biểu hiện tự nhiên trong
tế bào CaSki . 53
CHƯƠNG 4 KẾT LUẬN . 58
-iv-
TÀI LIỆU THAM KHẢO 59
PHỤ LỤC . 62