Thạc Sĩ Tạo dòng và biểu hiện gene mã hóa interferon alpha 2b của người trên hệ thống pichia pastoris

MC LC
TRANG
MC LC . i
DANH MC CÁC KÝ HIEU VÀ CH VIÊT TAT iii
DANH MC CÁC BNG iv
DANH MC CÁC HÌNH VE . v
M ðÂU 1
Chương I TONG QUAN TÀI LIEU . 2
I.1. INTERFERON 2
I.1.1. Các dng Interferon . 2
I.1.2. Cơ chê hot ñong ca Interferon 4
I.1.3. Các ng dng ca Interferon . 6
I.1.4. Tình hình nghiên cu Interferon hien nay 8
I.2. HE THÔNG BIEU HIEN PICHIA PASTORIS 8
I.2.1. Các he thông bieu hien Interferon alpha 2b . 8
I.2.2. Ưu nhưc ñiem ca he thông bieu hien Pichia pastoris . 10
Chương II VAT LIEU VÀ PHƯƠNG PHÁP . 12
II.1. VAT LIEU 12
II.1.1. Dng c và thiêt b 12
II.1.2. Hóa chât và môi trưng . 13
II.1.3. Nguyên vat lieu . 15
II.2. PHƯƠNG PHÁP . 20
II.2.1. Tách chiêt DNA ngưi tong sô bang Chelex 20
II.2.2. Phương pháp PCR (dùng ñe khuêch ñi ñon gene mc tiêu và kiem tra
khuan lc mang gene mc tiêu) 20
II.2.3. Phương pháp tinh sch DNA t gel agarose . 21
II.2.4. Phương pháp ñien biên np cho E. coli 21
II.2.5. Phương pháp cat DNA bang enzyme cat gii hn 22
II.2.6. Phương pháp nôi DNA bang enzyme T4 ligase 22
II.2.7. Phương pháp tách chiêt plasmid t tê bào E. coli . 23
II.2.8. Phương pháp ñien biên np cho Pichia pastoris . 23
II.2.9. Phương pháp lai khuan lc . 24
II.2.10. Phương pháp lên men Pichia pastoris 24
II.2.11. Phương pháp Bradford dùng ñe ño hàm lưng protein . 25
II.2.12. Phương pháp ñien di SDS-PAGE 25
II.2.13. Phương pháp Western blot . 27
Trang ii
Chương III KÊT QU VÀ BIEN LUAN . 28
III.1. TO DÒNG ESCHERICHIA COLI MANG GENE MÃ HÓA CHO
INTERFERON ALPHA 2B CA NGƯ I 28
III.1.1. Tong hp gene mã hóa cho Interferon alpha 2b ca ngưi . 28
III.1.2. To dòng Escherichia coli DH5α mang vector nhân dòng gene mã hóa
Interferon alpha 2b ca ngưi 30
III.2. TO DÒNG PICHIA PASTORIS BIEU HIEN INTERFERON ALPHA
2B CA NGƯ I . 34
III.2.1. To dòng Escherichia coli DH5α mang vector bieu hien Interferon alpha
2b ca ngưi 34
III.2.2. To dòng Pichia pastoris có kh" năng bieu hien Interferon alpha 2b ca
ngưi 37
III.3. BIEU HIEN INTERFERON ALPHA 2B CA NGƯ I . 38
Chương IV KÊT LUAN VÀ KIÊN NGH . 43
IV.1. Kêt luan 43
IV.2. Kiên ngh 43
TÀI LIEU THAM KHO . 44