Luận Văn Tăng biểu hiện gene ALKB1, ALKB2, mã hoá enzyme N-Alkane monooxygenase ở Rhodococcus opacus B4

MỞ ĐẦU​

1.1. Đặt vấn đề
Ngày nay, các công nghệ sản xuất các hóa chất có giá trị thương mại từ các chất không tan trong nước như các hydrocarbon từ nguồn dầu mỏ bằng xúc tác sinh học đang rất được quan tâm. Các tế bào thường được sử dụng làm xúc tác sinh học vì có sẵn các cofactor (NADH, ) và có khả năng tái tạo các cofactor này. Khả năng tái tạo các cofactor của tế bào rất cần thiết cho các phản ứng oxy hóa và khử. Trong ngành công nghệ hóa chất, nguyên liệu để tổng hợp hóa chất thường không phân cực như các hydrocarbon trong dầu mỏ và các dẫn xuất của chúng. Các nguyên liệu này và các sản phẩm tạo thành có độc tính cao đối với các xúc tác sinh học và làm giới hạn việc ứng dụng xúc tác sinh học trong ngành công nghiệp hóa chất. Giải pháp cho vấn đề này là phải sử dụng các vi sinh vật chủ (host strain) có khả năng chịu được các dung môi hữu cơ làm xúc tác sinh học. Rhodococcus opacus B4 thậm chí có thể sống, sinh trưởng tốt và có thể xúc tác nhiều phản ứng sinh tổng hợp trong môi trường thậm chí chỉ có dung môi hữu cơ nên là đối tượng đang rất được quan tâm. Và trong các phản ứng mà nó xúc tác, phản ứng chuyển đổi n- alkane đóng một phần quan trọng.

1.2. Mục đích và yêu cầu
1.2.1. Mục đích
Tạo chủng R. opacus có biểu hiện gene alkB cao hơn chủng bình thường, nhằm phục vụ cho sản xuất hóa chất bằng xúc tác sinh học sau này.

1.2.2. Yêu cầu
Tạo chủng R. opacus có năng suất chuyển hóa n- alkane cao hơn chủng bình thường.

MỤC LỤC ​

TRANG
Trang tựa
Lời cảm ơn . iii
Tóm tắt khóa luận . iv
Mục lục v
Danh sách các hình vii
Danh sách sơ đồ và bảng . viii
1. MỞ ĐẦU . 1
1.1. Đặt vấn đề 1
1.2. Mục đích và yêu cầu 1
1.2.1. Mục đích 1
1.2.2. Yêu cầu 1
2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2
2.1. Tầm quan trọng của sản xuất hóa chất bằng sinh vật 2
2.2. Giới thiệu chung về loài vi khuẩn Rhodococcus . 3
2.3. Giới thiệu về Rhodococcus opacus B4 5
2.4. N- alkane monooxygenase 8
3. VẬT LIỆU VÀ PHưƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . 11
3.1. Thời gian và địa điểm 11
3.2. Vật liệu 11
3.2.1. Chủng vi khuẩn và phương pháp nuôi cấy 11
3.2.2. Plasmid 11
3.2.3. PCR primers 11
3.2.4. Môi trường . 12
3.3. Chiến lược thí nghiệm tổng quát . 14
3.4. Phương pháp 15
3.4.1. Kỹ thuật . 15
3.4.1.1. PCR 15
3.4.1.2. Thiết kế mồi . 15
vi
3.4.1.3. Sắc ký khí 16
3.4.2. Phương pháp 18
3.4.2.1. Phân lập Rhodococcus opacus B4 . 18
3.4.2.2. Phương pháp khuếch đại đoạn gene bằng PCR . 18
3.4.2.3. Phương pháp tách plasmid từ vi khuẩn . 18
3.4.2.4. Ligation vào T- vector . 19
3.4.2.5. Kỹ thuật blunt-end . 19
3.4.2.6. Chuyển nạp bằng phương pháp shock nhiệt 19
3.4.2.7. Điện chuyển . 20
3.4.2.8. Xác định hoạt tính enzyme 20
4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN . 22
4.1. Kết quả . 22
4.2. Thảo luận . 24
5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ . 27
5.1. Kết luận 27
5.2. Đề nghị 27
6. TÀI LIỆU THAM KHẢO . 28