Thạc Sĩ Tách dòng và xác định trình tự nucleotit một số đoạn trong genome của virut vàng lùn lúa (rgsv) tại

Đề tài: TÁCH DÒNG VÀ XÁC ĐỊNH TRÌNH TỰ NUCLEOTIT MỘT SỐ ĐOẠN TRONG GENOME CỦA VIRUT VÀNG LÙN LÚA (RGSV) TẠI VIỆT NAM


Luận văn dài 58 trang
Chương 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 11
1.1. TÌNH HÌNH DỊCH BỆNH VL&LXL TRÊN THẾ GIỚI VÀ VIỆT NAM 11
1.1.1. Thế giới . 11
1.1.2. Việt Nam . 12
1.2. TRIỆU CHỨNG LÖA NHIỄM BỆNH VL&LXL 13
1.3. ĐẶC ĐIỂM CỦA CÁC LOẠI VIRUT GÂY BỆNH VL&LXL Ở LÖA . 14
1.3.1. Virut vàng lùn lúa (RGSV) . 14
1.3.2. Các loại virut khác . 16
1.3.2.1. Virut lùn xoắn lá lúa (RRSV) . 16
1.3.2.2. Virut tungro hình cầu (RTSV) . 17
1.3.2.3. Virut tungro hình nhộng (RTBV) 18
1.4. ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA RẦY NÂU – MÔI GIỚI CHỦ YẾU
TRUYỀN BỆNH VL&LXL 19
1.4.1. Đặc điểm hình thái 19
1.4.2. Đặc điểm sinh học, sinh thái và gây hại 19
1.5. PHÕNG TRỪ BỆNH VL&LXL . 20
1.6. MỘT SỐ ENZYM VÀ KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ TRONG
NGHIÊN CỨU BỆNH VIRUT 21
1.6.1. Một số enzym sử dụng trong sinh học phân tử . 21
1.6.2. Kỹ thuật RT-PCR 22
1.6.3. Kỹ thuật PCR . 23
1.6.4. Kỹ thuật biến nạp plasmit vào E.coli 24
1.6.5. Kỹ thuật tách dòng gen 24
1.6.6. Kỹ thuật PCR trực tiếp từ khuẩn lạc (colony – PCR) 25
Chương 2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26
2.1. VẬT LIỆU 26
2.2. HÓA CHẤT, THIẾT BỊ, ĐỊA ĐIỂM 27
2.2.1. Hóa chất 27
2.2.2. Thiết bị 27
2.2.3. Địa điểm nghiên cứu 27
2.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . 27
2.3.1. Thu mẫu thí nghiệm . 27
2.3.2. Thiết kế mồi đặc hiệu . 28
2.3.3. Tách chiết RNA tổng số của virut ở lúa 28
2.3.4. Phản ứng RT-PCR . 29
2.3.5. Tạo plasmit tái tổ hợp mang gen mong muốn (Ligation) . 29
2.3.6. Biến nạp vectơ tái tổ hợp vào tế bào khả biến E.coli DH5α bằng
phương pháp sốc nhiệt . 30
2.3.7. Colony-PCR 31
2.3.8. Tách chiết plasmit 32
2.3.9. Cắt gen bằng enzym giới hạn . 32
Chương 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN . 34
3.1. THIẾT KẾ MỒI 34
3.2. TÁCH DÕNG CÁC ĐOẠN TRONG GENOME CỦA RGSV . 34
3.2.1. RT-PCR 34
3.2.2. Biến nạp vectơ tái tổ hợp vào tế bào khả biến E.coli DH5α . 37
3.2.3. Chọn lọc plasmit tái tổ hợp bằng colony-PCR 37
3.2.4. Tách plasmit và cắt kiểm tra sự có mặt của gen . 39
3.3. XÁC ĐỊNH TRÌNH TỰ NUCLEOTIT CỦA MỘT SỐ ĐOẠN TRONG
GENOME CỦA RGSV . 40
3.4. SO SÁNH TRÌNH TỰ GEN CP-RGSV CỦA HAI TỈNH NINH THUẬN
VÀ BÌNH THUẬN VỚI CÁC TRÌNH TỰ TƯƠNG ỨNG TRÊN GENBANK. 41
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 46