Thạc Sĩ So sánh đặc điểm vi học, thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của Cây Thiên niên kiện ở Côn Đảo

So sánh đặc điểm vi học, thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của Cây Thiên niên kiện ở Côn Đảo với thiên niên kiện dược dụng (Homalomena occulta (Lour.) Schott)

MỤC LỤC
LỜI CẢM ƠN
MỤC LỤC
DANH MỤC CÁC BẢNG, HÌNH, ĐỒ THỊ VÀ CÁC THUẬT NGỮ VIẾT TẮT
MỞ ĐẦU
PHẦN 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.1. Tổng quan về cây Thiên niên kiện 1
1.1.1. Vị trí phân loại . 1
1.1.2. Phân loại khoa học . 1
1.1.3. Hình thái học 2
1.1.4. Sinh thái học và phân bố 2
1.1.5. Thành phần hóa học 4
1.1.6. Công dụng và bộ phận dùng . 4
1.1.7. Bài thuốc có Thiên niên kiện 5
1.1.7.1. Chữa thấp khớp, đau nhức xương 5
1.1.7.2. Chữa đau bụng kinh 5
1.1.7.3. Chữa dị ứng, mẩn ngứa, lở sơn 6
1.1.8. Các nghiên cứu về Thiên niên kiện 6
1.1.8.1. Nghiên cứu trong nước 6
1.1.8.2. Nghiên cứu ngoài nước 6


1.2. Gốc tự do và chất chống oxy hóa . 8
1.2.1. Gốc tự do . 8
1.2.2. Chất chống oxy hóa . 9
1.3. Đại cương một số chủng khuẩn, nấm mốc, nấm men . 12
1.3.1. Vi khuẩn Gram âm 12
1.3.1.1. Escherichia Coli . 12
1.3.1.2. Pseudomonas aeruginosa . 13
1.3.2. Vi khuẩn Gram dương . 14
1.3.2.1. Staphylococcus aureus . 14
1.3.2.2. Streptococcus pyogenes . 15
1.3.3. Nấm mốc Trychophyton mentagrophytes . 16
1.3.4. Nấm men Candida albicans . 16
1.4. Giới thiệu sắc ký lớp mỏng . 17
1.5. Giới thiệu sắc ký khí ghép khối phổ (GC-MS) . 18
1.6. Giới thiệu phương pháp khuếch tán đĩa . 19
1.6.1. Phương pháp đặt khoanh giấy lọc . 19
1.6.2. Phương pháp đục lỗ thạch . 19
1.7. Phương pháp MIC . 19
PHẦN 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. Nguyên liệu, hóa chất và trang thiết bị 20


2.1.1. Nguyên liệu . 20
2.1.2. Dung môi, hóa chất . 20
2.1.3. Dụng cụ, thiết bị nghiên cứu . 21
2.2. Phương pháp nghiên cứu . 21
2.2.1. Khảo sát vi phẫu dược liệu . 21
2.2.1.1. Mô tả dược liệu . 21
2.2.1.2. Soi bột . 21
2.2.1.3. Vi phẫu . 22
2.2.2. Khảo sát độ tinh khiết . 22
2.2.2.1. Độ ẩm . 22
2.2.2.2. Xác định độ tro . 24
2.2.3. Khảo sát thành phần hóa học . 26
2.2.3.1. Phân tích sơ bộ thành phần hóa thực vật . 26
2.2.3.2. Định tính xác định các nhóm hợp chất . 28
2.2.4. Khảo sát tính chất và hàm lượng tinh dầu . 34
2.2.4.1. Chiết xuất tinh dầu . 34
2.2.4.2. Định tính bằng phản ứng hóa học . 35
2.2.4.3. Định tính bằng SKLM . 35
2.2.4.4. Định tính và định lượng bằng GC-MS . 36
2.2.5. Phương pháp chiết xuất dược liệu . 37


2.2.5.1. Chiết cao tổng cồn 96% 37
2.2.5.2. Chiết cao tổng cồn 45% 37
2.2.6. Các phương pháp xác định hoạt tính chống oxy hóa 37
2.2.6.1. Xác định năng lực khử 37
2.2.6.2. Hoạt tính kháng gốc hydroxyl tự do 39
2.2.6.3. Thử nghiệm DPPH . 41
2.2.7. Phương pháp thử hoạt tính kháng khuẩn 42
2.2.7.1. Môi trường thử nghiệm 42
2.2.7.2. Phương pháp khuếch tán đĩa . 43
2.2.8. Phương pháp MIC . 47
PHẦN 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. Vi học . 49
3.1.1. Vi phẫu thân rễ 50
3.1.2. Soi bột 54
3.2. Khảo sát độ tinh khiết . 58
3.2.1. Độ ẩm 58
3.2.2. Độ tro 59
3.3. Khảo sát sơ bộ thành phần hóa học . 59
3.3.1. Phân tích sơ bộ thành phần hóa thực vật 59
3.3.2. Định tính xác định các nhóm hợp chất 63


3.3.2.1. Định tính bằng phản ứng hóa học . 63
3.3.2.2. Định tính bằng SKLM . 64
3.4. Khảo sát tính chất và hàm lượng tinh dầu . 67
3.4.1. Định tính bằng phản ứng hóa học . 67
3.4.2. Định tính bằng SKLM . 68
3.4.2.1. Tinh dầu . 68
3.4.2.2. Cắn n-hexan . 71
3.4.3. Xác định hàm lượng tinh dầu . 72
3.4.4. Định tính và định lượng bằng GC-MS . 73
3.5. Kết quả các mẫu cao chiết . 77
3.5.1. Kết quả độ ẩm . 77
3.5.2. Hiệu suất . 78
3.6. Khảo sát khả năng chống oxy hóa của các mẫu cao chiết . 78
3.6.1. Năng lực khử . 78
3.6.2. Hiệu quả kháng gốc hydroxyl tự do . 80
3.6.3. Hoạt tính kháng gốc tự do DPPH . 83
3.6.3.1. Mẫu cao TNK-DD 96% . 83
3.6.3.2. Mẫu cao TNK-DD 45% . 84
3.6.3.3. Mẫu cao TNK-Xanh 96% . 84
3.6.3.4. Mẫu cao TNK-Xanh 45% . 85


3.6.3.5. Mẫu cao TNK-Đỏ 96% 86
3.6.3.6. Mẫu cao TNK-Đỏ 45% 87
3.6.3.7. Chứng dương . 88
3.7. Kết quả thử hoạt tính kháng khuẩn của tinh dầu và mẫu cao chiết . 91
3.7.1. Kết quả khuếch tán đĩa 91
3.7.1.1. Trên các mẫu cao . 91
3.7.1.2. Trên tinh dầu 93
3.7.2. Kết quả khảo sát MIC 96
PHẦN 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ
4.1. Kết luận 100
4.2. Đề nghị 101
TÀI LIỆU THAM KHẢO
PHỤ LỤC
1. Định tính coumarin 1
2. Định tính flavonoid 2
3. Định tính tannin . 3
4. Định tính triterpenoid . 4
5. Mật độ quang xác định năng lực khử của các mẫu . 6
6. Mật độ quang xác định hiệu quả kháng gốc hydroxyl tự do của các mẫu 8
7. Mật độ quang xác định hiệu quả kháng DPPH của các mẫu 11


8. Mật độ quang xác định hiệu quả kháng DPPH của các chứng dương 13
KẾT QUẢ SẮC KÝ KHÍ GHÉP KHỐI PHỔ (GC - MS) CỦA CÁC MẪU TINH DẦU