Luận Văn Quy trình chẩn đoán bệnh viêm gan siêu vi B bằng phương pháp Real-time PCR

MỤC LỤC
LỜI MỞ ĐẦU . .1
CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU . 3
1.1. Đại cương về bệnh viêm gan siêu vi B . .3
1.1.1. Định nghĩa bệnh viêm gan siêu vi B . 3
1.1.2. Lịch sử bệnh viêm gan siêu vi B . 3
1.2. Đặc điểm sinh học của Hepatitis B Virus . .4
1.2.1. Kích thước và cấu trúc của virus hoàn chỉnh . .4
1.2.2. Cấu trúc bộ gen của HBV . .5
1.2.3. Sự tái bản DNA . .6
1.2.4. Các thành phần kháng nguyên . 6
1.2.5. Cách thức tồn tại và khả năng gây bệnh . 7
1.3. Tình hình bệnh viêm gan siêu vi B trên thế giới và Việt Nam . .9
1.3.1. Tình hình bệnh viêm gan siêu vi B trên thế giới . 9
1.3.2. Tình hình bệnh viêm gan siêu vi B trong nước . 1 0
1.4. Đường lây của HBV, triệu chứng lâm sàng, biện pháp phòng ngừa và
điều trị HBV . .11
1.4.1. Đường lây của HBV . .11
1.4.2. Triệu chứng lâm sàng . .1 3
1.4.3. Biện pháp phòng ngừa và điều trị HBV . .13
1.5. Các phương pháp chẩn đoán bệnh viêm gan siêu vi B . .1 5
1.5.1. Phương pháp huyết thanh học (phát hiện kháng thể) và hóa miễn
dịch (phát hiện kháng nguyên) . .1 5
1.5.2. Phương pháp sinh học phân tử . .1 6
CHƯƠNG 2 : VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP . .34
2.1. Vật liệu thiết bị . .3 4
2.1.1. Vật liệu sinh học . .34

2.1.2. Thiết bị, dụng cụ . .34
2.1.3. Hóa chất . 3 7
2.2. Phương pháp tiến hành . .3 7
2.2.1. Phương pháp thu nhận và xử lý mẫu . .3 8
2.2.2. Phương pháp tách chiết . 3 9
2.2.3. Phản ứng Real-time PCR . .4 0
CHƯƠNG 3 : KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN . .42
KẾT LUẬN . 4 5
TÀI LIỆU THAM KHẢO . .46

LỜI MỞ ĐẦU
I. Đặt vấn đề
Viêm gan siêu vi B do Hepatitis B virus (HBV) gây bệnh phổ biến trên
toàn cầu, có diễn biến phức tạp, tỷ lệ chuyển sang mãn tính cao, thường dẫn
tới xơ gan và ung thư gan. Theo tổ chức Y tế thế giới (WHO), hiện nay có
khoảng 2 tỉ người nhiễm virus viêm gan siêu vi B trên thế giới, trong đó có
khoảng 6% nhiễm viêm gan siêu vi B cấp và 5 - 10% trong số này chuyển
sang mãn tính ở người lớn, riêng với trẻ em tỉ lệ này lên đến 90%. Tỷ lệ tử
vong trong giai đoạn cấp tính là 1%, biến chứng của viêm gan B cấp là viêm
gan mãn, xơ gan, xơ gan mất bù và ung thư nguyên phát, dẫn tới tử vong 1
triệu người mỗi năm. Tại Việt Nam, hiện nay có khoảng 15 - 20% dân số
nhiễm HBV, trong đó có khoảng 80 - 92% bệnh nhân xơ gan và ung thư gan
nguyên phát có nhiễm HBV.
Một trong những kỹ thuật phổ biến dùng để chẩn đoán bệnh viêm gan
siêu vi B được sử dụng hiện nay là phương pháp Real-time PCR, cho kết quả
nhanh chóng, độ tin cậy cao, góp phần vào việc điều trị viêm gan mãn tính.
II. Mục tiêu đề tài
Do tỷ lệ nhiễm HBV khá cao nên ngoài biện pháp phòng ngừa thì vấn đề
điều trị nhiễm HBV hay tình trạng mạng virus lâu dài trong máu cũng đang
rất quan tâm. Nhưng để có thể có được những hiểu biết về các vấn đề kể trên
thì cần phải xác định được một người đang mang HBsAg trong máu có thật sự
đang nhiễm HBV hay không. Ngoài ra, để có được chỉ định điều trị đặc hiệu
cũng như theo dõi được hiệu quả điều trị thì phải phát hiện cũng như định
lượng được HBV trong máu.

Trước yêu cầu thực tế đó, khóa luận “Quy trình chẩn đoán bệnh viêm
gan siêu vi B bằng phương pháp Real-time PCR” được thực hiện với mục
đích đề xuất phương pháp định lượng HBV-DNA trong huyết thanh của
người bệnh, nhằm giải quyết các vấn đề nói trên.
III. Nhiệm vụ đề tài
Giới thiệu sơ lược về virus gây bệnh viêm gan siêu vi B.
Tìm hiểu các phương pháp chẩn đoán bệnh viêm gan siêu vi B.
Tìm hiểu quy trình chẩn đoán bệnh viêm gan siêu vi B bằng phương
pháp Real-time PCR.
IV. Phương pháp nghiên cứu
Nghiên cứu tài liệu, lý thuyết.