Thạc Sĩ Purification and Antioxidant Activities of Soybean Isoflavones

Table of Contents
List of Tables . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . v
List of Figures . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . vi
Chapter 1 Introduction . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
Chapter 2 Overview of the Mechanisms for Soybean Isoflavones’ Health
Improvement Actions . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
5
2.1 Introduction . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
2.2 Anticancer Actions . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
2.2.1 Cancer Preventive Function . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5
2.2.2 Cancer Inhibitory Function . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11
2.3 Cardiovascular System Protective Actions . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16
2.4 Anti-osteoporosis Actions . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19
2.5 Other Applications of Soybean Isoflavones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 20
2.6 Future Implications of Soybean Isoflavones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
Chapter 3 Materials and Methods . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23
3.1 Extraction and Purification of Soybean Isoflavones . . . . . . . . . . . . . . . 23
3.1.1 Chemicals . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23
3.1.2 Extraction of Soybean Isoflavones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23
3.1.3 Purification and Analysis of Daidzin, Glycitin, and Genistin . . . 23
3.2 Antioxidant Activities of Soybean Isoflavones in Preventing
Cholesterol Oxidation Accelerated by 2,2’-Azobis(2-
methylpropionamidine) Dihydrochloride. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
24
3.2.1 Chemicals . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24
3.2.2 Cholesterol Oxidation System . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24
3.2.3 Cholesterol Oxidation System Treatment with Soybean
Isoflavones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
25
3.2.4 Statistical Analysis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26
3.3 Antioxidant Activities of Soybean Isoflavones on tert-Butyl
Hydroperoxide-Induced Oxidative Stress in SVEC4-10 Cells . . . . . . .
26
3.3.1 Chemicals . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26
3.3.2 Cell Culture and Cell Growth Curve . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26
3.3.3 Cytotoxicity Study of Genistein and Daidzein . . . . . . . . . . . . . . . . 27
3.3.4 Cytotoxicity Study of tBOOH . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 28
3.3.5 Cell Treatment with Soybean Isoflavones. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 28
3.3.6 Statistical Analysis . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29
Acknowledgments . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ii
Abstract . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . vii
iv
Chapter 4 Results and Discussion . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30
4.1 Extraction and Purification of Soybean Isoflavones . . . . . . . . . . . . . . . . 30
4.1.1 Purification and Analysis of Daidzin, Glycitin, and Genistin . . . . 30
4.2 Antioxidant Activities of Soybean Isoflavones in Preventing
Cholesterol Oxidation Accelerated by 2,2’-Azobis(2-
methylpropionamidine) Dihydrochloride . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
30
4.2.1 Cholesterol Oxidation Products with AAPH Acceleration . . . . . . 30
4.2.2 Antioxidant Activities of Genistein, Daidzein, and Glycosides
Mixture from Defatted Soybean Flour . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
34
4.3 Antioxidant Activities of Soybean Isoflavones on tert-Butyl
Hydroperoxide-Induced Oxidative Stress in SVEC4-10 Cells . . . . . . .
42
4.3.1 Growth Curve of SVEC4-10 Cells . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 42
4.3.2 Cytotoxicity of Genistein and Daidzein . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43
4.3.3 Cytotoxicity of tBOOH . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45
4.3.4 Antioxidant Activities of Genistein and Daidzein . . . . . . . . . . . . 46
Chapter 5 Conclusion . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 50
References . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 53
Vita . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 61