Luận Văn Phát triển qui trình mPCR - 2 - (multiplex Polymerase Chain Reaction) phát hiện đồng thời WSSV (Whit

Đề tài: Phát triển qui trình mPCR - 2 - (multiplex Polymerase Chain Reaction) phát hiện đồng thời WSSV (White Spot Syndrome Virus )HPV (Hepatopancreatic Parvovirus) và gen β-actin của tôm sú (Penaeus monodon)


TÀI LIỆU THAM KHẢO DÀI 65 TRANG GỒM MỤC LỤC :


Trang
LỜI CẢM TẠ i
TÓM TẮT . ii
MỤC LỤC iii
DANH SÁCH BẢNG v
DANH SÁCH HÌNH vii
CHƯƠNG I: GIỚI THIỆU 1
CHƯƠNG II: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU .3
2.1 Tổng quan về tình hình nuôi tôm .3
2.1.1 Trên thế giới 3
2.1.2 Ở Việt Nam . 4
2.2 Tổng quan về tình hình dịch bệnh trên tôm 6
2.3 Bệnh White Spot Syndrome Virus (WSSV) 8
2.4 Bệnh Parvovirus trên gan tụy (Hepatopancreatic Parvovirus – HPV) 10
2.5 β-actin . 11
2.6 Một số phương pháp chẩn đoán bệnh phát hiện virus trên động vật thủy
sản Phương pháp PCR (Polymerase Chain Reaction) 11
2.6.1 Kỹ thuật lai Southern .12
2.6.2 Kỹ thuật lai In situ .12
2.6.3 Kỹ thuật PCR (Polymerase Chain Reaction) thời gian thật 12
2.6.4 Phương pháp PCR (Polymerase Chain Reaction) .13
2.7 PCR chịu ảnh hưởng bởi các nhân tố . 15
2.8 Ứng dụng của kỹ thuật PCR trong thủy sản . 16
2.9 Phương pháp mPCR (mutiplex Polymerase Chain Reaction) 17
CHƯƠNG III: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .18
3.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu 18
3.2 Vật liệu nghiên cứu 18
3.2.1 Dụng cụ 18
3.2.2 Hóa chất 18
3.3 Phương pháp nghiên cứu 19
3.3.1 Vật liệu nghiên cứu 19
3.3.2 Ly trích ADN 19
3.3.3 Phương pháp đo hàm lượng ADN bằng máy so màu quang phổ 19
3.3.4 Qui trình PCR phát hiện WSSV 20
3.3.5 Qui trình PCR phát hiện HPV 23
3.3.6 Qui trình mPCR phát hiện HPV và β-actin 25
3.3.7Qui trình mPCR phát hiện WSSV và β-actin 26 iv
3.3.8 Qui trình mPCR phát hiện WSSV, HPV và gen β-actin ở tôm 27
CHƯƠNG IV: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29
4.1 Thực hiện qui trình PCR phát hiện WSSV (theo OIE, 2006) 29
4.2 Thực hiện qui trình PCR phát hiện HPV . 31
4.3 Thực hiện qui trình PCR phát hiện gen β-actin 32
4.4 Thực hiện qui trình mPCR phát hiện HPV và β-actin . 34
4.5 Thực hiện qui trình mPCR phát hiện WSSV và β-actin 35
4.6 Thực hiện qui trình mPCR phát hiện WSSV và HPV (theo Phromjai, 2002
có bổ sung) 39
4.7 Thực hiện qui trình mPCR phát hiện WSSV và HPV (theo OIE, 2006) 41
4.8 Thực hiện qui trình mPCR phát hiện WSSV, HPV và β-actin .44
4.9 Ứng dụng qui trình mPCR phát hiện WSSV và β-actin 46
CHƯƠNG V: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 49
TÀI LIỆU THAM KHẢO . . 51
PHỤ LỤC .55