Tiểu Luận Phân tích acid amin bằng phương pháp sắc ký

File powpoint

A.ĐẶT VẤN ĐỀ
Amino acid là đơn vị cấu trúc cơ bản của protein là chất hữu cơ mà phân tử chứa ít nhất một nhóm carboxyl và ít nhất một nhóm amino trừ prolin chỉ có nhóm NH(thực chất là một acid imin).
Có khoảng hơn 20 loại amino acid khác nhau, do đó việc phân tích chúng để xác định thành phần axit amin hoặc hàm lượng của các protein, peptide, và các chế phẩm dược phẩm khác rất cần thiết.

B.NỘI DUNG
I.Xử lý mẫu- Tạo dẫn xuất
1. Thủy phân protien,peptide
Có nhiều cách thủy phân : bằng axit, kiềm, enzim tùy vào loại thực phẩm và thành phần của protien.
Thứ tự thủy phân :
+Đốt nóng lò ở 105 ư 112oC khoảng 20 -30 phút trước khi thủy phân
+Cân mẫu và làm giàu protein (tùy vào loại thực phẩm)
+Dùng tác nhân để thủy phân (như HCl phải có phenol để ngăn cản halogel hóa của tyrosin )

Tạo dẫn xuất:
Tăng độ nhạy trong quá trình phân tích người ta thường tạo dẫn xuất acid amin, trong đó có các axit amin phản ứng với một tiền chất để mang lại khả năng hấp thụ mạnh tia UV/Vis hoặc một tạo một hợp chất huỳnh quang.
Có nhiều chất để tạo dẫn xuất với protien như:
o-phthalaldehyde (OPA), Phenylisothiocyanate (PITC), carbamate 6-aminoquinolyl-N-hydroxysuccinimidyl (AQC) .Ứng với mỗi dẫn xuất thì chọn detector có bước sóng khác nhau.
Việc tạo dẫn xuất phải thực hiện qua nhiều bước.
Quy trình sấy khô
Chuẩn bị hóa chất,dung dịch dùng sấy khô lại
Cho vào bình định mức
Tiến hành sấy khô hút chân không cho đến khô

Chuẩn bị dung dich dẫn xuất
Chuẩn bị hỗn hợp theo tỉ lệ các chất tùy vào phương pháp dẫn xuất
Tạo dẫn xuất
- Rút 20µl hỗn hợp dung dịch tạo dẫn xuất mới pha ở trên, cho vào mỗi ống mẫu đã sấy khô
- Lắc vài giây
- Để yên 20 phút ở nhiệt độ 20-25oC
- Sấy khô
.
C. Kết luận
Việc phân tích acid amin rất phổ biển trong mọi lĩnh vực, trong y học, thực phẩm, nghiên cứu với việc tạo ra các dẫn xuất đã góp phần phân tích acid amin trở nên thuận lợi và có độ chính xác rất cao. Cùng với sụ ra đời của các thiết bị sắc kí với nhiều ưu điểm nổi bật về tốc độ phân tích và độ chính xác, phương pháp phân tích acid amin bằng phương pháp sắc ký đặc biệt là sắc ký lỏng cao áp đã đem lại hiệu quả rất lớn mà các phương pháp phân tích thông thường không đáp ứng được.