Luận Văn Phân lập virus PRRS trên môi trường tế bào MARC-145 và xác định virus bằng kỹ thuật RT-PCR

Mục Lục

Chương 1: MỞ ĐẦU 1

1.1. Đặt vấn đề 1
1.2. Mục đích - Yêu cầu 2

Chương 2: TỔNG QUAN 3

2.1. Tổng quan về nuôi cấy tế bào 3
2.1.1. Một số đặc điểm của tế bào động vật 3
2.1.2. Thành phần cơ bản của môi trường nuôi cấy 4
2.1.3. Điều kiện nuôi cấy 6
2.1.4. Sự tạp nhiễm và cách hạn chế . 6
2.2. Phương pháp PCR 6
2.2.1. Nguyên tắc 7
2.2.2. Thực nghiệm . 7
2.2.3. Các yếu tố ảnh hưởng đến phản ứng PCR 8
2.2.4. Phương pháp RT-PCR 9
2.3. Sơ lược về căn bệnh, bệnh do virus . 10
2.3.1. Lịch sử bệnh 10
2.3.2. Căn bệnh học . 11
2.3.2.1. Phân loại . 11
2.3.2.2. Một số đặc điểm về hình thái và cấu trúc 12
2.3.2.3. Đặc điểm nuôi cấy 14
2.3.2.4. Sức đề kháng 16
2.3.3. Dịch tễ học bệnh PRRS . 16
2.3.3.1. Loài mắc bệnh 16
2.3.3.2. Phương thức lây lan . 16
2.3.3.3. Đường xâm nhập 17
2.3.3.4. Cơ chế sinh bệnh 17
2.3.4. Triệu chứng lâm sàng 20
2.3.5. Chẩn đoán 20
2.3.5.1. Chẩn đoán lâm sàng . 20
2.3.5.2. Chẩn đoán phi lâm sàng . 21
2.3.5.2.1. Phương pháp phát hiện kháng thể 21
2.3.5.2.2. Các phương pháp phát hiện kháng nguyên 22
2.3.5.2.3. Phát hiện gen của virus PRRS 23
2.3.5.2.4. Phân lập virus trên môi trường tế bào 23

Chương 3: NỘI DUNG VÀ PHưƠNG PHÁP TIẾN HÀNH . 25

3.1. Thời gian và địa điểm . 25
3.2. Đối tượng và số lượng mẫu 25
3.3. Nội dung nghiên cứu 25
3.4. Vật liệu và dụng cụ 26
3.4.1. Thiết bị và dụng cụ dùng cho nuôi cấy tế bào và phân lập virus 26
3.4.2. Vật liệu dùng cho nuôi cấy tế bào MARC-145 . 26
3.4.3. Thiết bị và dụng cụ dùng cho phản ứng PCR . 27
3.4.4. Vật liệu và hoá chất cho chiết tách RNA 27
3.4.5. Vật liệu và hoá chất sử dụng cho RT-PCR . 27
3.4.6. vật liệu và hoá chất cho điện di sản phẩm RT-PCR . 28
3.5. Phương pháp tiến hành . 28
3.5.1. Phương pháp lấy mẫu 28
3.5.2. Phương pháp nuôi cấy tế bào MARC-145 28
3.5.2.1. Hồi phục tế bào 28
3.5.2.2. Cấy chuyển tế bào 29
3.5.3. Phương pháp phân lập virus 30

Chương 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 34

4.1. Thời gian một lần cấy chuyển tế bào MARC-145 . 34
4.2. Kết quả gây nhiễm lần một trên môi trường tế bào MARC-145 . 35
4.3. Kết quả gây nhiễm lần hai trên môi trường tế bào MARC-145 37
4.4. Kết quả RT-PCR 40

Chương 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ . 44

5.1. Kết luận 44
5.2. Tồn tại 44
5.3. Đề nghị . 44

TÀI LIỆU THAM KHẢO . 45

PHỤ LỤC