Luận Văn Phân lập vi khuẩn Bacillus subtilis từ đất và khảo sát tính đối kháng với vi khuẩn E. Coli gây bệnh

TÓM TẮT​

Đặng Ngọc Phương Uyên, Bộ môn Công Nghệ Sinh Học, Đai học Nông Lâm Tp. Hồ Chí Minh “ Phân lập vi khuẩn Bacillus subtilis từ đất và khảo sát khả năng đối kháng với vi khuẩn E. coli gây bệnh tiêu chảy’’. Đề tài được tiến hành tại phòng Thí nghiệm vi sinh Khoa Chăn Nuôi Thú Y từ tháng 3 đến tháng 7 năm 2007 Giáo viên hướng dẫn: TS. Nguyễn Ngọc Hải Với đối tượng nghiên cứư là chủng vi khuẩn Bacillus subtilis được phân lập từ đất, chúng tôi tiến hành thử đối kháng với vi khuẩn E. coli K88. Qua 4 thí nghiệm đối kháng giữa B. subtilis và E. coli, chúng tôi ghi nhận được một số kết quả sau:
- Kết quả thí nghiệm đối kháng trực tiếp giữa B. subtilis và E. coli trên môi trường thạch đĩa TSA cho thấy B. subtilis đối kháng mạnh với E. coli ở nồng độ pha loãng canh khuẩn E. coli là 10-3 tại thời điểm sau 24 giờ ủ 370C trong tủ ấm
- Kết quả thí nghiệm thử đối kháng giữa dịch ly tâm từ canh khuẩn B. subtilis và E. coli trên thạch đĩa TSA cho thấy dịch ly tâm canh khuẩn B. subtilis sau 24 giờ nuôi cấy ở 370C có khả năng kháng E. coli mạnh nhất ở nồng độ pha loãng canh khuẩn E. coli là 10-1.
- Kết quả thí nghiệm đếm số lượng khuẩn lạc 2 vi khuẩn B. subtilis và E. coli bằng phương pháp trang đĩa cho thấy ở tỷ lệ mật độ tế bào ban đầu của B. subtilis/ E. coli sau 24 giờ nuôi cấy chung trong môi trường TSB là 107/ 107(tế bào/ml) thì B. subtilis cho khả năng đối kháng cao nhất.
- Thử nghiệm khả năng đối kháng giữa B. subtilis chủng L211với E. coli trên đối tượng chuột bạch cho thấy chủng B. subtilis L211 làm giảm tỷ lệ chuột chết do nhiễm E. coli O157:H7 (chủng EDL 933) đến 60% so với lô chuột không được sử dụng thức ăn có B. subtilis.

Chương 1 1
PHẦN MỞ ĐẦU 1
1.1. ĐẶT VẤN ĐỀ 1
1.2. MỤC ĐÍCH, YÊU CẦU 2
1.2.1. Mục đích 2
1.2.2. Yêu cầu 2
Chương 2 3
TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3
2.1. Sơ lược về E. coli 3
2.1.1. Nhắc lại về E. coli: 3
2.1.2. Đặc điểm E. coli 4
2.1.2.1. Tính chất vật lý, hóa học 4
2.1.2.2. Sức đề kháng 4
2.1.2.3. Cấu tạo kháng nguyên 4
2.1.2.4. Các chất do E. coli tổng hợp nên 6
2.1.2.5. Đặc tính gây bệnh 7
2.1.2.6. Các E. coli gây bệnh 8
2.1.2.7. Khả năng gây bệnh 9
2.1.2.8. Cơ chế phòng vệ của vật chủ đối với E. coli 10
2.1.2.9. Kiểm soát dich bệnh do E. coli 11
2.2. Sơ lược về B. subtilis 11
2.2.1. Lịch sử phát hiện 11
2.2.2. Tìm hiểu về vi khuẩn Bacillus subtilis 12
2.2.2.1. Đặc điểm phân loại 12
2.2.2.2. Đặc điểm phân bố 12
2.2.2.3. Đặc điểm hình thái 12
2.2.2.4. Đặc điểm sinh hóa 14
2.2.2.5. Khả năng tạo bào tử 14
2.2.2.6. Các chất kháng sinh do B. subtilis tổng hợp 15
2.2.2.7. Tính đối kháng của Bacillus subtilis 16
2.2.2.8. Độc tính của Bacillus subtilis 17
2.2.2.9. Một số phương pháp nghiên cứu tính đối kháng của Bacillus subtilis và vi sinh vật gây bệnh 18
2.2.2.10. Một số nghiên cứu ứng dụng của Bacillus subtilis 20
2.2.3. Tình hình nghiên cứu về tác dụng đối kháng với bệnh tiêu chảy do E.coli của Bacillus subtilis 21
Chương 3 23
VẬT LIỆU VÀ PHưƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 23
3.1. THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM 23
3.2. VẬT LIỆU THÍ NGHIỆM 23
3.2.1. Đối tượng khảo sát 23
3.2.2. Thiết bị và dụng cụ thí nghiệm 23
3.2.3. Môi trường nuôi cấy 23
3.2.4. Hóa chất 24
3.3. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 24
3.4. PHưƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24
3.4.1. Phân lập vi khuẩn B. subtilis từ đất24
3.4.1.1. Cách lấy mẫu 24
3.4.1.2. Phân lập vi khuẩn Bacillus subtilis 25
3.4.1.2.1 Lựa chọn khuẩn lạc 26
3.4.1.2.2 Kiểm tra đặc điểm sinh hóa 26
3.4.2. Đánh giá khả năng đối kháng của Bacillus subtilis và E. coli 26
3.4.2.1. Thí nghiệm 1: Thử đối kháng với E. coli trên môi trường thạch TSA 26
3.4.2.2. Thí nghiệm 2:Khảo sát tính đối kháng từ dịch ly tâm của Bacillus subtilis và dịch khuẩn E. coli 27
3.4.2.3. Thí nghiệm 3: Khảo sát tính đối kháng của B. subtilis với nhiều nồng độ E. coli khác nhau trên môi trường TSB 27
3.4.2.4. Thí nghiệm 4: Thử nghiệm khả năng đối kháng của 1 chủng B. subtilis và E. coli O157:H7 (chủng EDL 933) trên chuột bạch. 27
3.4.3. CHỈ TIÊU THEO DÕI VÀ PHưƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ 28
3.4.4. Phương pháp xử lý số liệu 29
Chương 4 30
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30
4.1. Kết quả phân lập B. subtilis trong đất 30
4.2. Kết quả đối kháng trực tiếp giữa B. subtilis và E. coli trên môi trường TSA 32
4.3. Kết quả đối kháng giữa dịch ly tâm canh khuẩn B. subtilis nuôi cấy trong 24 giờ/370C với E. coli trên môi trường TSA 35
4.4. Kết quả đối kháng giữa B. subtilis và E. coli trong môi trường TSB 38
4.5. Kết quả đối kháng của chủng B. subtilis L211 đối với E. coli O157:H7 (chủng EDL 933) trên chuột bạch 41
Chương 5 44
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 44
5.1. Kết luận 44
5.2. Đề nghị 44
TÀI LIỆU THAM KHẢO 46