Luận Văn Phân lập vi khuẩn bacillus subtilis từ đất, khảo sát khả năng ức chế sản sinh aflatoxin của các chủn

TÓM TẮT LUẬN VĂN​

Qua thời gian thực hiện đề tài “Phân lập vi khuẩn Bacillus subtilis từ đất, khảo sát khả năng ức chế sản sinh aflatoxin của các chủng phân lập được.” từ tháng 3/2007 đến tháng 8/2007 tại Phòng thực hành Vi Sinh khoa Chăn Nuôi-Thú Y, chúng tôi có những kết luận sau:
- Có thể phân lập được vi khuẩn Bacillus subtilis từ đất với tỷ lệ 8,16 %.
- Đánh giá sơ bộ khả năng ức chế aflatoxin của các chủng vi khuẩn Bacillus subtilis phân lập được từ đất trên môi truờng thạch nước cốt dừa: sau 7 ngày nuôi cấy chung Bacillus subtilis và Aspergillus flavus trên môi trường thạch nước cốt dừa, quan sát bên ngoài và dưới ánh đèn tia cực tím (UV) cho thấy một số chủng có khả năng ức chế sinh trưởng và sản sinh aflatoxin của nấm mốc Aspergillus flavus.
- Khảo sát khả năng ức chế sản sinh aflatoxin của các chủng vi khuẩn Bacillus subtilis phân lập được từ đất: môi trường bắp sau 7 ngày nuôi cấy bào tử nấm mốc và bào tử vi khuẩn , ghi nhận một số chủng có khả năng làm giảm aflatoxin trên môi trường bắp so với mẫu đối chứng chỉ có bào tử Aspergillus flavus không có bào tử Bacillus subtilis.
- Khảo sát tỷ lệ nuôi cấy giữa bào tử nấm mốc/bào tử vi khuẩn Bacillus subtilis ảnh hưởng đến khả năng sản sinh aflatoxin trên môi trường bắp phối trộn tỷ lệ bào tử nấm mốc/bào tử vi khuẩn là 1/103, 1/104 và 1/105. Sau 7 ngày nuôi cấy cho thấy khi tỷ lệ bào tử vi khuẩn tăng lên thì tăng khả năng làm giảm aflatoxin.
- Nguyên liệu bắp nhiễm aflatoxin có xử lý với vi khuẩn Bacillus subtilis gây chết vịt ít hơn nguyên liệu bắp nhiễm aflatoxin nhưng không xử lý với vi khuẩn.


1. MỞ ĐẦU1
1.1. ĐẶT VẤN ĐỀ1
1.2. MỤC TIÊU ĐỀ TÀI2
1.3. YÊU CẦU ĐỀ TÀI2
2. TỔNG QUAN3
2.1. KHÁI QUÁT VỀ VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS 3
2.1.1. Lịch sử phát hiện3
2.1.2. Đặc điểm phân loại và sự phân bố của vi khuẩn Bacillus subtilis3
2.1.2.1. Đặc điểm phân loại3
2.1.2.2. Sự phân bố4
2.1.3. Đặc điểm hình thái4
2.1.4. Đặc điểm nuôi cấy4
2.1.5. Đặc điểm sinh hóa5
2.1.6. Đặc điểm cấu trúc kháng nguyên6
2.1.7. Bào tử vi khuẩn Bacillus subtilis7
2.1.7.1. Cấu tạo của bào tử7
2.1.7.2. Đặc điểm và tác dụng của bào tử8
2.1.8. Tính chất đối kháng của Bacillus subtilis với vi sinh vật gây bệnh 9
2.1.9. Những nghiên cứu về tác dụng đố kháng Aspergillus của Bacillus subtilis 11
2.2. KHÁI QUÁT VỀ NẤM MỐC SINH ĐỘC TỐ AFLATOXIN 12
2.2.1. Khái niệm về nấm mốc 12
2.2.2. Các loài nấm mốc sinh độc tố aflatoxin 12
2.2.3. Độc tố aflatoxin 13
2.2.3.1. Các loại độc tố aflatoxin 13
2.2.3.2. Cơ chế gây bệnh của aflatoxin 14
2.2.3.3. Những tác hại do aflatoxin gây ra 14
2.2.3.4. Các phương pháp phân hủy aflatoxin 15
3. NỘI DUNG VÀ PHưƠNG PHÁP TIẾN HÀNH 19
3.1. THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM 19
3.1.1. Thời gian 19
3.1.2. Địa điểm 19
3.2. ĐỐI TưỢNG KHẢO SÁT 19
3.3. THIẾT BỊ DỤNG CỤ THÍ NGHIỆM 19
3.4. MÔI TRưỜNG NUÔI CẤY 20
3.4.1. Môi trường tự nhiên 20
3.4.2. Môi trường tổng hợp 20
3.5. NỘI DUNG 20
3.6. PHưƠNG PHÁP TIẾN HÀNH NGHIÊN CỨU 20
3.6.1. Phân lập vi khuẩn Bacillus subtilis từ đất 20
3.6.1.1. Cách lấy mẫu đất để phân lập vi khuẩn 20
3.6.1.2. Phương pháp phân lập vi khuẩn Bacillus subtilis 21
3.6.2. Khảo sát đặc điểm sinh học của vi khuẩn phân lập được 21
3.6.2.1. Quan sát hình thái vi khuẩn dưới kính hiển vi 21
3.6.2.2. Khảo sát các phản ứng sinh hóa của vi khuẩn phân lập được 22
3.6.3. Thí nghiệm 1: Kiểm tra khả năng sinh aflatoxin của chủng nấm mốc
Aspergillus flavus và đánh giá sơ bộ khả năng ức chế sản sinh aflatoxin của các
chủng Bacillus subtilis phân lập được 22
3.6.3.1. Kiểm tra khả năng sinh aflatoxin của chủng nấm mốcAspergillusflavus. .22
3.6.3.2. Thí nghiệm đánh giá sơ bộ khả năng ức chế sản sinh aflatoxin của các chủng Bacillus subtilis phân lập được 23 3.6.4.Thí nghiệm 2: Khảo sát khả năng làm giảm aflatoxin sản sinh trên môi trường bắp của các chủng vi khuẩn Bacillus subtilis phân lập được 23
3.6.4.1. Phương pháp thu hoạch và xác định số lượng bào tử nấm mốc Aspergillus flavus 23
3.6.4.1.1. Phương pháp thu hoạch bào tử nấm mốc Aspergillus flavus 23
3.6.4.1.2. Phương pháp xác định số lượng bào tử nấm mốc Aspergillus flavus 24
3.6.4.2. Phương pháp thu hoạch và xác định số lượng bào tử vi khuẩn Bacillus subtilis 24
3.6.4.2.1. Phương pháp thu hoạch huyễn dịch bào tử vi khuẩnBacillus subtilis 24
3.6.4.2.2. Phương pháp xác định số lượng bào tử vi khuẩn Bacillus subtilis 25
3.6.4.3. Bố trí thí nghiệm 26
3.6.4.3.1. Xử lý nguyên liệu bắp ban đầu trước khi tiến hành thí nghiệm 26
3.6.4.3.2. Nuôi cấy chung bào tử vi khuẩn Bacillus subtilis và bào tử nấm Aspergillus flavus trên môi trường nguyên liệu bắp 26
3.6.5. Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng của tỷ lệ bào tử nấm mốc /bào tử vi khuẩn đối với sự sản sinh aflatoxin 27
3.6.5.1. Phương pháp thu hoạch và xác định số lượng bào tử nấm mốc Aspergillus flavus 28
3.6.5.2. Phương pháp thu hoạch và xác định số lượng bào tử vi khuẩn Bacillus subtilis 28
3.6.5.3. Bố trí thí nghiệm 28
3.6.6. Thí nghiệm 4: Thử mức độ an toàn của ngưyên liệu bắp đã nhiễm aflatoxin sau khi xử lý bằng vi khuẩn Bacillus subtilis (có khả năng ức chế aflatoxin) trên vịt 29
3.7. PHưƠNG PHÁP PHÂN TÍCH MẪU 30
3.8. PHưƠNG PHÁP XỬ LÝ SỐ LIỆU 30
4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31
4.1. KHẢO SÁT ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA BACILLUS SUBTILIS 31
4.1.1. Quan sát đặc điểm khuẩn lạc nghi ngờ là Bacillus subtilis 31
4.1.2. Đặc điểm hình thái của vi khuẩn nghi ngờ là Bacillus subtilis sau nhuộm Gram 32
4.1.3. Khảo sát các đặc điểm sinh hóa của vi khuẩn nghi ngờ là Bacillussubtilis 32
4.2.THÍ NGHIỆM 1: KIỂM TRA KHẢ NĂNG SINH AFLATOXIN CỦA CHỦNG NẤM MỐC ASPERGILLUS FLAVUS VÀ ĐÁNH GIÁ SƠ BỘ KHẢ NĂNG ỨC CHẾ SẢN SINH AFLATOXIN CỦA CÁC CHỦNG BACILLUS SUBTILIS PHÂN LẬP ĐưỢC 35
4.2.1. Kiểm tra khả năng sinh khả năng sinh aflatoxin của chủng nấm mốc Aspergillus flavus 35
4.2.2. Thí nghiệm đánh giá sơ bộ khả năng ức chế sản sinh aflatoxin của các chủng Bacillus subtilis phân lập được 35
4.3. THÍ NGHIỆM 2 : KHẢO SÁT KHẢ NĂNG LÀM GIẢM AFLATOXIN SẢN SINH TRÊN MÔI TRưỜNG BẮP CỦA CÁC CHỦNG BACILLUS SUBTILIS PHÂN LẬP ĐưỢC 38
4.4. THÍ NGHIỆM 3: KHẢO SÁT ẢNH HưỞNG CỦA TỶ LỆ BÀO TỬ NẤM MỐC/BÀO TỬ VI KHUẨN ĐỐI VỚI SỰ SẢN SINH AFLATOXIN 40
4.5. THÍ NGHIỆM 4: THỬ MỨC ĐỘ AN TOÀN CỦA NGHUYÊN LIỆU BẮP ĐÃ NHIỄM AFLATOXIN SAU KHI XỬ LÝ BẰNG VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS (CÓ KHẢ NĂNG ỨC CHẾ AFLATOXIN) TRÊN VỊT NUÔI 43
5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 48
5.1. KẾT LUẬN 48
5.2. ĐỀ NGHỊ 48
TÀI LIỆU THAM KHẢO 49