Luận Văn Phân lập vi khuẩn Bacillus subtilis từ đất, khảo sát khả năng ức chế sản sinh aflatoxin của các ch

MỤC LỤC


CHưƠNG TRANG


Trang bìa 1 .i


Trang bìa 2 ii


LỜI CẢM TẠ . .iii


MỤC LỤC . .iv


DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT .ix


DANH MỤC CÁC BẢNG . x


DANH MỤC CÁC HÌNH . xi


DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ xii


TÓM TẮT LUẬN VĂN . . xiii


1. MỞ ĐẦU . 1


1.1. ĐẶT VẤN ĐỀ . . 1


1.2. MỤC TIÊU ĐỀ TÀI . . 2


1.3. YÊU CẦU ĐỀ TÀI . . 2


2. TỔNG QUAN . 3


2.1. KHÁI QUÁT VỀ VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS . .3


2.1.1. Lịch sử phát hiện 3


2.1.2. Đặc điểm phân loại và sự phân bố của vi khuẩn Bacillus subtilis 3


2.1.2.1. Đặc điểm phân loại . .3


2.1.2.2. Sự phân bố .4


2.1.3. Đặc điểm hình thái . . .4


2.1.4. Đặc điểm nuôi cấy . .4


2.1.5. Đặc điểm sinh hóa 5


2.1.6. Đặc điểm cấu trúc kháng nguyên . 6


2.1.7. Bào tử vi khuẩn Bacillus subtilis . .7


2.1.7.1. Cấu tạo của bào tử . 7


2.1.7.2. Đặc điểm và tác dụng của bào tử . .8


2.1.8. Tính chất đối kháng của Bacillus subtilis với vi sinh vật gây bệnh .9


2.1.9. Những nghiên cứu về tác dụng đố kháng Aspergillus của Bacillus subtilis .11


2.2. KHÁI QUÁT VỀ NẤM MỐC SINH ĐỘC TỐ AFLATOXIN . 12


2.2.1. Khái niệm về nấm mốc . .12


2.2.2. Các loài nấm mốc sinh độc tố aflatoxin .12


2.2.3. Độc tố aflatoxin 13


2.2.3.1. Các loại độc tố aflatoxin .13


2.2.3.2. Cơ chế gây bệnh của aflatoxin .14


2.2.3.3. Những tác hại do aflatoxin gây ra .14


2.2.3.4. Các phương pháp phân hủy aflatoxin . 15


3. NỘI DUNG VÀ PHưƠNG PHÁP TIẾN HÀNH 19


3.1. THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM 19


3.1.1. Thời gian 19


3.1.2. Địa điểm 19


3.2. ĐỐI TưỢNG KHẢO SÁT .19


3.3. THIẾT BỊ DỤNG CỤ THÍ NGHIỆM 19


3.4. MÔI TRưỜNG NUÔI CẤY 20


3.4.1. Môi trường tự nhiên 20


3.4.2. Môi trường tổng hợp .20

3.5. NỘI DUNG .20


3.6. PHưƠNG PHÁP TIẾN HÀNH NGHIÊN CỨU .20


3.6.1. Phân lập vi khuẩn Bacillus subtilis từ đất .20


3.6.1.1. Cách lấy mẫu đất để phân lập vi khuẩn 20


3.6.1.2. Phương pháp phân lập vi khuẩn Bacillus subtilis .21


3.6.2. Khảo sát đặc điểm sinh học của vi khuẩn phân lập được 21


3.6.2.1. Quan sát hình thái vi khuẩn dưới kính hiển vi .21


3.6.2.2. Khảo sát các phản ứng sinh hóa của vi khuẩn phân lập được 22


3.6.3. Thí nghiệm 1: Kiểm tra khả năng sinh aflatoxin của chủng nấm mốc


Aspergillus flavus và đánh giá sơ bộ khả năng ức chế sản sinh aflatoxin của các


chủng Bacillus subtilis phân lập được 22


3.6.3.1. Kiểm tra khả năng sinh aflatoxin của chủng nấm mốcAspergillusflavus 22


3.6.3.2. Thí nghiệm đánh giá sơ bộ khả năng ức chế sản sinh aflatoxin của các


chủng Bacillus subtilis phân lập được 23


3.6.4.Thí nghiệm 2: Khảo sát khả năng làm giảm aflatoxin sản sinh trên môi


trường bắp của các chủng vi khuẩn Bacillus subtilis phân lập được 23


3.6.4.1. Phương pháp thu hoạch và xác định số lượng bào tử nấm mốc


Aspergillus flavus . 23


3.6.4.1.1. Phương pháp thu hoạch bào tử nấm mốc Aspergillus flavus .23


3.6.4.1.2. Phương pháp xác định số lượng bào tử nấm mốc


Aspergillus flavus 24


3.6.4.2. Phương pháp thu hoạch và xác định số lượng bào tử vi khuẩn


Bacillus subtilis .24


3.6.4.2.1. Phương pháp thu hoạch huyễn dịch bào tử vi khuẩnBacillus subtilis 24

3.6.4.2.2. Phương pháp xác định số lượng bào tử vi khuẩn Bacillus subtilis 25


3.6.4.3. Bố trí thí nghiệm 26


3.6.4.3.1. Xử lý nguyên liệu bắp ban đầu trước khi tiến hành thí nghiệm .26


3.6.4.3.2. Nuôi cấy chung bào tử vi khuẩn Bacillus subtilis và bào tử nấm


Aspergillus flavus trên môi trường nguyên liệu bắp 26


3.6.5. Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng của tỷ lệ bào tử nấm mốc /bào tử vi


khuẩn đối với sự sản sinh aflatoxin 27


3.6.5.1. Phương pháp thu hoạch và xác định số lượng bào tử nấm mốc


Aspergillus flavus 28


3.6.5.2. Phương pháp thu hoạch và xác định số lượng bào tử vi khuẩn


Bacillus subtilis .28


3.6.5.3. Bố trí thí nghiệm 28


3.6.6. Thí nghiệm 4: Thử mức độ an toàn của ngưyên liệu bắp đã nhiễm


aflatoxin sau khi xử lý bằng vi khuẩn Bacillus subtilis (có khả năng ức chế


aflatoxin) trên vịt 29


3.7. PHưƠNG PHÁP PHÂN TÍCH MẪU .30


3.8. PHưƠNG PHÁP XỬ LÝ SỐ LIỆU 30


4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31


4.1. KHẢO SÁT ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA BACILLUS SUBTILIS .31


4.1.1. Quan sát đặc điểm khuẩn lạc nghi ngờ là Bacillus subtilis 31


4.1.2. Đặc điểm hình thái của vi khuẩn nghi ngờ là Bacillus subtilis sau


nhuộm Gram .32


4.1.3. Khảo sát các đặc điểm sinh hóa của vi khuẩn nghi ngờ là Bacillussubtilis 32

4.2.THÍ NGHIỆM 1: KIỂM TRA KHẢ NĂNG SINH AFLATOXIN CỦA


CHỦNG NẤM MỐC ASPERGILLUS FLAVUS VÀ ĐÁNH GIÁ SƠ BỘ KHẢ


NĂNG ỨC CHẾ SẢN SINH AFLATOXIN CỦA CÁC CHỦNG


BACILLUS SUBTILIS PHÂN LẬP ĐưỢC .35


4.2.1. Kiểm tra khả năng sinh khả năng sinh aflatoxin của chủng nấm mốc


Aspergillus flavus 35


4.2.2. Thí nghiệm đánh giá sơ bộ khả năng ức chế sản sinh aflatoxin của các chủng


Bacillus subtilis phân lập được 35


4.3. THÍ NGHIỆM 2 : KHẢO SÁT KHẢ NĂNG LÀM GIẢM AFLATOXIN


SẢN SINH TRÊN MÔI TRưỜNG BẮP CỦA CÁC CHỦNG BACILLUS


SUBTILIS PHÂN LẬP ĐưỢC . 38


4.4. THÍ NGHIỆM 3: KHẢO SÁT ẢNH HưỞNG CỦA TỶ LỆ BÀO TỬ


NẤM MỐC/BÀO TỬ VI KHUẨN ĐỐI VỚI SỰ SẢN SINH AFLATOXIN .40


4.5. THÍ NGHIỆM 4: THỬ MỨC ĐỘ AN TOÀN CỦA NGHUYÊN LIỆU BẮP


ĐÃ NHIỄM AFLATOXIN SAU KHI XỬ LÝ BẰNG VI KHUẨN BACILLUS


SUBTILIS (CÓ KHẢ NĂNG ỨC CHẾ AFLATOXIN) TRÊN VỊT NUÔI 43


5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ . . 48


5.1. KẾT LUẬN 48


5.2. ĐỀ NGHỊ . .48


TÀI LIỆU THAM KHẢO . 49


DANH MỤC CÁC BẢNG


Trang


Bảng 2.1. Các phản ứng sinh hóa của Bacillus sutilis . 6


Bảng 2.2. Sự khác nhau giữa bào tử và tế bào dinh dưỡng của Bacillus subtilis .8


Bảng 2.3: Số lượng của Escherichia coli sau 0 giờ, 12 giờ, 24 giờ và 36 giờ nuôi cấy


(CFU/ml) 10


Bảng 2.4: Khả năng ức chế aflatoxin B1 của các chủng vi khuẩn Bacillus subtilis


trong thí nghiệm của Norio Kimura . 12


Bảng 2.5: Một số loài nấm mốc có khả năng sản sinh aflatoxin 13


Bảng 3.1: Bố trí thí nghiệm nghiệm 2 27


Bảng 3.2: Bố trí thí nghiệm 3 .28


Bảng 4.1: Kết quả thử phản ứng sinh hóa của các chủng phân lập được .33


Bảng 4.2: So sánh khả năng ức chế sản sinh aflatoxin của 8 chủng Bacillus subtilis .38


Bảng 4.3: Kết quả phân tích hàm lượng aflatoxin của thí nghiệm 2 39


Bảng 4.4: Kết quả thí nghiệm 3 . 41


Bảng 4.5: Kết quả thí nghiệm 4 . 43


Bảng 4.6: So sánh sự khác nhau về bệnh tích đại thể các mẫu gan vịt .45


Bảng 4.7: Kết quả bệnh tích vi thể gan của vịt ở các lô thí nghiệm .46