Luận Văn Phân lập và tạo dòng nguyên bào sợi (fibroblast) người từ bánh nhau

phần i : Giới thiệu về đề tài
i. đặt vấn đề . 1
ii. Mục tiêu đề tài 5
ii.1 mục tiêu tổng quát . 5
ii.2 mục tiêu cụ thể 5

phần ii : Tổng quan tài liệu
i. Sự hình thành và phát triển của nhau . 6
i.1 vị trí làm tổ của phôi 6
i.2 các thành phần cấu tạo của nhau 6
i.2.1 bánh nhau 6
i.2.2 màng ối 7
i.2.3 màng đệm 7
i.2.4 hồ máu hay khoảng gian gai nhau 7
i.2.5 vách nhau . 7
i.2.6 múi nhau 7
i.2.7 đĩa đáy . 8
i.2.8 vòng viền hay bờ giới hạn ngoại vi 8
i.2.9 dây rốn 8
i.2.10 màng nhau 8
i.3 sự tạo nhau . 9
i.3.1 sự tạo nhau từ phía con 10
i.3.1.1 sự tạo túi đệm 10
i.3.1.2 sự tạo cây gai nhau (sự tạo đĩa đệm) . 10
i.3.2 sự tạo nhau từ phía mẹ . 12
i.3.2.1 cấu trúc mô học nội mạc tử cung . 12
i.3.2.2 sự phát triển của màng rụng thành 12
i.3.2.3 sự phát triển của màng rụng bao . 13
i.3.2.4 sự phát triển của màng rụng đáy . 13
i.4 chức năng của nhau 14
i.4.1 chức năng trao đổi chất . 14
i.4.2 chức năng bài tiết hormone 15
i.4.3 chức năng miễn dịch . 15
ii. đại cương về nguyên bào sợi 16
ii.1 đặc điểm chung 16
ii.2 tế bào sợi (fibrocyte) . 18
ii.2.1 nguồn gốc . 18
ii.2.2 hình dạng . 19
ii.2.3 chức năng 21
ii.3 nguyên bào sợi (fibroblast) 21
ii.3.1 nguồn gốc 21
ii.3.2 hình dạng . 22
ii.3.3 chức năng 23
ii.3.4 khoảng đời 25
iii. Các yếu tố ảnh hưởng đến việc nuôi tế bào . 25
iii.1 giá thể 25
iii.2 pha khí 26
iii.2.1 oxygen . 26
iii.2.2 co2 . 27
iii.3 môi trường và các yếu tố bổ sung 27
iii.4 đặc tính vật lý . 29
iii.4.1 ph 29
iii.4.2 dung dịch đệm 29
iii.4.3 áp suất thẩm thấu 30
iii.4.4 nhiệt độ . 30
iii.4.5 tính nhớt . 30
iii.4.6 áp lực sức căng bề mặt và sự tạo bọt . 30
iv. Khái quát về môi trường nuôi cấy tế bào động vật . 31
iv.1 thành phần môi trường . 31
iv.1.1 dung dịch muối đệm 31
iv.1.2 amino acid . 32
iv.1.3 vitamine . 32
iv.1.4 muối . 32
iv.1.5 glucose 33
iv.1.6 huyết thanh . 33
iv.2 một vài loại môi trường được sử dụng trong nuôi cấy tế bào và
mô động vật 35
Iv.2.1 môi trường bm . 35
iv.2.2 môi trường emem . 35
iv.2.3 môi trường dmem .35
iv.2.4 môi trường f10, f12 . 35
iv.2.5 môi trường iscove . 35
iv.2.6 môi trường 5a 36
iv.2.7 môi trường rpmi – 1640 . 36
iv.2.8 môi trường 199 . 36
iv.3 đặc điểm ba loại môi trường emem, dmem và amniomax được sử
dụng để nuôi nguyên bào sợi trong đề tài này
iv.3.1 minimum essential medium (mem) 36
iv.3.1.1 mô tả sản phẩm . 36
iv.3.1.2 thành phần môi trường emem . 37
iv.3.1.3 điều kiện bảo quản . 39
iv.3.1.4 cách thức sử dụng 39
iv.3.2 dulbecco’s modified eagle’s medium 39
iv.3.2.1 mô tả sản phẩm 40
iv.3.2.2 thành phần của dmem . 40
iv.3.2.3 điều kiện bảo quản 42
iv.3.2.4 đặc tính môi trường . 42
iv.3.3 sản phẩm amniomax™-c100 43
iv.3.3.1 mô tả sản phẩm 43
iv.3.3.2 công thức môi trường . 43
iv.3.3.3 điều kiện giữ 44
iv.3.3.4 cách thức sử dụng . 44
v. ứng dụng của việc nuôi cấy nguyên bào sợi . 44
v.1 ứng dụng trong lĩnh vực y học 44
v.2 ứng dụng trong dược khoa 44
v.3 ứng dụng trong nghiên cứu sinh học 44
v.4 ứng dụng trong chọn giống vật nuôi . 45

phần iii : Phương pháp
iii.1 đối tượng nghiên cứu . 46
iii.1 các mục tiêu cần được khảo sát 46
iii.2 trình tự thí nghiệm . 47
iii.3 các quy trình chính được sử dụng trong thí nghiệm . 48
iii.3.1 vô trùng dụng cụ và hoá chất 48
iii.3.2 vô trùng nơi tiến hành thí nghiệm . 48
iii.3.3 các quy trình sử dụng trong thí nghiệm . 49
iii.3.3.1 thu nhận và xử lý mẫu . 49
iii.3.3.2 phân lập và tách khối mô . 49
iii.3.3.3 các quy trình nuôi tế bào . 50
iii.3.3.4 phương pháp xác định mật độ tế bào bằng phồng đếm neubauer
51
iii.3.3.5 phương pháp thay môi trường . 52
iii.3.3.6 cấy chuyền tế bào . 53
iii.3.3.7 cách đếm tế bào trên quang trường 20x . 53
iii.3.4 dụng cụ – thiết bị – hóa chất 54
iii.3.4.1 dụng cụ 54
iii.3.4.2 thiết bị . 54
iii.3.4.3 hóa chất . 56
iii.3.4.4 môi trường . 56
phần iv: Kết quả – biện luận
iv.1 kết quả khảo sát khả năng phát triển của nguyên bào sợi từ mô
nhau.57
iv.1.1 kết qủa quan sát mẫu mô nhau thu nhận từ mổ nọi soi ở tay vòi
57
iv.1.2 kết qủa quan sát mẫu mô nhau thu nhận qua đường sanh mổ ở
nhau đủ tháng . 57
iv.2 kết quả khảo sát khả năng tăng trưởng của nguyên bào sợi thu
nhận từ mẫu mô nhau sổ trên các loại môi trường khác nhau. . 60
iv.2.1 kết quả . 61
iv.2.1.1 ngày thứ nhất 61
iv.2.1.2 ngày thứ hai . 63
iv.2.1.3 ngày thứ ba 65
iv.2.1.4 ngày thứ tư 67
iv.2.1.5 ngày thứ năm 69

phần v: Bàn luận . 72

phần vi : Kết luận 77

tài liệu tham khảo . 79

phụ lục . 85