Luận Văn Phân lập và định danh một số vi sinh vật có khả năng kích thích sinh trưởng thực vật ở vườn Quốc gia

MỤC LỤC


CHưƠNG TRANG


Trang tưa . ị


Lơi cam ơn iiì ̉


T́m t́t iv


Mục lục . v


Danh sach cac chư viế t tắ t .viií ́ ̃


Danh sach cac hinh . ix́ ́ ̀


Danh śch ćc sơ đồ và biểu đồ xi


Danh sach cac bang xií ́ ̉


Chương 1: MỞ ĐẦU .Error! Bookmark not defined.


1.1. Đặt vấn đề Error! Bookmark not defined.


1.2. Mục tiêu .Error! Bookmark not defined.


1.3. Yêu cầu .Error! Bookmark not defined.


Chương 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU Error! Bookmark not defined.


2.1. Vườn Quốc gia Ćt Tiên .Error! Bookmark not defined.


2.2. Sơ lược sự tương t́c giữa vi sinh ṿt và thực ṿt . Error! Bookmark not


defined.


2.2.1 Phân nh́m vi sinh ṿt tương t́c với thực ṿt dựa vào bản chất của sự


tương t́c 7


2.2.1.1. Ćc vi sinh ṿt ức chế t́c ḥi của mầm bệnh lên thực ṿt Error!


Bookmark not defined.


2.2.1.2. Vi sinh ṿt gia tăng dinh dưỡng cho cây .Error! Bookmark not defined.


2.2.2. Vi khuẩn sản xuất ćc chất kích thích lên sự sinh trưởng ở thực ṿt Error!


Bookmark not defined.


2.3. Ćc phương ph́p định danh vi sinh ṿt .Error! Bookmark not defined.


2.3.1. Phương ph́p truyền thống Error! Bookmark not defined.



2.3.1. Phương ph́p hiện đ̣i Error! Bookmark not defined.


Chương 3: VẬT LIỆU - PHưƠNG PHÁP .Error! Bookmark not defined.


3.1. Thời gian và địa điểm .Error! Bookmark not defined.


3.2. Ṿt liệu .Error! Bookmark not defined.


3.2.1. Mẫu thí nghiệm .Error! Bookmark not defined.


3.2.2. Thiết bị dụng cụ Error! Bookmark not defined.


3.2.3. H́a chất Error! Bookmark not defined.


3.2.3.1. Môi trường phân ḷp và làm thuần vi sinh ṿt biến dưỡng methyl


(MMS) .Error! Bookmark not defined.


3.2.3.2. Môi trường chọn lọc vi sinh ṿt cố định nitơ (MS ) . Error! Bookmark not

O


defined.


3.2.3.3. Môi trường nhân sinh khối vi khuẩn (CMS)Error! Bookmark not defined.


3.2.3.4. Ćc môi trường kh́c Error! Bookmark not defined.


3.3. Phương ph́p thí nghiệm Error! Bookmark not defined.


3.3.1. Phân ḷp và làm thuần .Error! Bookmark not defined.


3.3.1.1. Lấy mẫu và tăng sinh mẫu: Error! Bookmark not defined.


3.3.1.2. Phân ḷp chọn lọc .Error! Bookmark not defined.


3.3.1.3. Giữ giống


. .Error! Bookmark


not defined.


3.3.2. Định tính Error! Bookmark not defined.


3.3.2.1. Khảo śt khả năng kích thích sinh trưởng thực ṿt của ćc chủng kiện in


vitro và in vivo .Error! Bookmark not defined.


3.3.2.2. Xử lý thống kê Error! Bookmark not defined.


3.3.2.3. Quan śt hình th́i .Error! Bookmark not defined.


3.3.3. Định danh vi khuẩn .Error! Bookmark not defined.


3.3.3.1. Khảo śt ćc đặc điểm hình th́i, sinh lý, sinh h́a Error! Bookmark not


defined.


3.3.3.2. Đặc điểm sinh lý .Error! Bookmark not defined.


3.3.3.3. Đặc điểm sinh h́a Error! Bookmark not defined.


3.3.3.4. So śnh tính tương đồng di truyền dựa trên hệ số Jascard . Error!


Bookmark not defined.


3.3.3.5. Phân tích trình tự rDNA 16S Error! Bookmark not defined.


3.3.4. Định danh nấm men Error! Bookmark not defined.


3.3.4.1. Khảo śt ćc đặc điểm hình th́i nấm men .Error! Bookmark not defined.


3.3.4.2. X́c định một số đặc tính sinh h́a của nấm men . Error! Bookmark not


defined.


Chương 4: KẾT QUẢ - THẢO LUẬN Error! Bookmark not defined.


4.1. Kết quả phân ḷp và làm thuần .Error! Bookmark not defined.


4.2. Kết quả sàng lọc ćc chủng ć khả năng tương t́c với thực ṿt. Error!


Bookmark not defined.


4.2.1. Khảo śt khả năng kích thích tăng trưởng thực ṿt của ćc chủng VSV trong


điều kiện in vitro .Error! Bookmark not defined.


4.2.2. Khảo śt khả năng kích thích sự nảy mầm của ḥt giống Error! Bookmark


not defined.


4.3. Định danh vi sinh ṿt .Error! Bookmark not defined.


4.3.1. Kết quả quan śt hình th́i .Error! Bookmark not defined.


4.3.2. Định danh vi vi khuẩn 59


4.3.2.1. Kết quả khảo śt ćc đặc điểm hình th́i, sinh lý, sinh h́a . 59


4.3.2.2. Phân tích trình tự rDNA 16S .70


4.3.3. Định danh nấm men .77


4.3.3.1. Quan śt ćc đặc điểm hình th́i nấm men 77


4.3.3.2. Ćc đặc điểm sinh lí, sinh h́a .80


Chương 5: KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ .Error! Bookmark not defined.2


5.1 Kết lụn Error! Bookmark not defined.2


5.2 Đề nghị .Error! Bookmark not defined.


TÀI LIỆU THAM KHẢO .85


PHỤ LỤC


DANH MỤC CÁC HÌNH


TRANG


Hình 2.1: (A) Qú trình chuyển h́a hợp chất 1 carbon ở vi


khuẩn biến dưỡng methyl; (B) Khuẩn ḷc Methylobacterium


từ cỏ ba ĺ trên môi trường phân ḷp 6


Hình 2.2: Phổ tương t́c cố định đ̣m trên thực ṿt . 10


Hình 2.3: Azospirillum brasilense bề mặt của rễ ĺa . 11


Hình 3.1: Chu trình nhiệt của ćc phản ứng PCR 41


Hình 4.1: Kết quả tương t́c của ćc chủng vi sinh ṿt lên


chồi thuốc ĺ sau 2 tuần . 49


Hình 4.2: Sự hình thành mô sẹo ở chồi thuốc ĺ khi bổ sung


chủng 6027a 49


Hình 4.3: Kết quả tương t́c của 2 chủng vi sinh ṿt ON16a (A),


ON29b (B) lên chồi thuốc ĺ . 52


Hình 4.4: Kết quả khảo śt khả năng kích thích nảy mầm của ch́ng


6012a so với đối chứng sau 2 ngày. 55


Hình 4.5: Kết quả khảo śt khả năng kích ḥt nảy mầm của chủng


ON20a so với đối chứng. 57


Hình 4.6: Hình th́i tế bào qua kính hiển vi ṿt kính 100X. . 60


Hình 4.7: Khảo śt ngưỡng nhiệt độ ph́t triển của vi khuẩn


6012a và vi khuẩn 6027a . 63


Hình 4.8: Kết quả thử nghiệm sinh h́a IDS 14GNR của hai chủng


vi khuẩn. 66


Hình 4.9: Kết khảo śt khả năng cố định nitơ của hai chủng 6012a


và 6027a. . 67


Hình 4.10: Kết quả định tính PHB của chủng 6012a dưới kính hiển


vi huỳnh quang bươc śng 460nm. . 68


Hình 4.11: DNA bộ gen của ćc chủng vi khuẩn 71


ix