Luận Văn Phân lập và chọn môi trường nhân sinh khối ba loài nấm ký sinh côn trùng Metarhizium anisopliae (ets

Nhằm mục đích thu thập, phân lập và định danh 3 loài nấm ký sinh côn trùng
Metarhizium anisopliae, Beauveria bassiana và Paecilomyces spp. ở một số tỉnh
Đồng bằng sông Cửu Long để nghiên cứu chọn ra dòng nấm tốt phục vụ cho việc
nghiên cứu chế phẩm thuốc trừ sâu vi sinh, đề tài: “Phân lập và chọn môi trường nhân
sinh khối ba loài nấm ký sinh côn trùng Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorok,
Beauveria bassiana (Bals.) Vuill và Paecilomyces spp. trên nhóm rau ăn lá ở Đồng
bằng sông Cửu Long” được thực hiện.
Kết quả đã thu thập được tổng cộng 288 dòng nấm từ 6 tỉnh An Giang, Tiền
Giang, Cần Thơ, Vĩnh Long, Sóc Trăng, và Hậu Giang, bao gồm 3 loài nấm ký sinh
côn trùng Metarhizium anisopliae, Beauveria bassiana và Paecilomyces spp. Trong
đó, quá trình phân lập, tách ròng và định danh (trong môi trường PDA) đã thu được 51
dòng.
Thí nghiệm trên sâu ăn tạp trong điều kiện phòng thí nghiệm được bố trí theo
thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên (Completely Randomized Design) và 5 lần lặp lại và 52
nghiệm thức (51 dòng nấm và 1 đối chứng), đã chọn ra 10 dòng nấm có hiệu quả tốt
nhất M2-AG, M5-AG, M1-CT, M3-VL, M1-ST, B2-AG, B2-TG, B1 –VL, P2-AG và P3-
TG. Môi trường SDAY3 là môi trường cho mật số bào tử (bào tử.ml-1) cao nhất trong
4 loại môi trường lỏng (không chứa agar) CDA, CAM, SDAY1 và SDAY3. Chín ngày
sau khi lắc (NSKL) là thời điểm tối ưu đối với nấm Metarhizium anisoplia. Trong khi
đó, sáu đến chín NSKL, mật số bào tử được tạo ra cao nhất đối với nấm Beauveria
bassiana và 6 NSKL đối với nấm Paecilomyces spp.
ii
MỤC LỤC
Trang
CHƯƠNG I. MỞ ĐẦU 1
A. MỤC TIÊU VÀ NỘI DUNG NGHIÊN CỨU .2
I. MỤC TIÊU .2
II. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 2
B. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHẠM VI NGHIÊN CỨU .2
I. ĐỐI TƯỢNG 2
II. PHẠM VI NGHIÊN CỨU 2
C. CƠ SỞ LÝ LUẬN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .2
I. CƠ SỞ LÝ LUẬN .2
1. Phân loại 2
2. Sự phân bố .3
3. Đặc điểm hình thái, sinh học và khả năng gây hại 4
3.1. Metarhizium anisopliae .4
3.2. Beauveria bassiana .4
3.3. Paecilomyces spp. .5
4. Đặc điểm sinh lý - sinh hóa 6
4.1. Metarhizium anisopliae .6
4.2. Beauveria bassiana .6
4.3. Paecilomyces spp. .6
5. Khả năng sinh độc tố diệt côn trùng và các sản phẩm trao đổi chất .7
5.1. Metarhizium anisopliae .7
5.2. Beauveria bassiana .7
5.3. Paecilomyces spp. .8
6. Cơ chế tác động của nấm lên côn trùng 8
6.1. Metarhizium anisopliae .8
6.2. Beauveria bassiana .8
6.3 Paecilomyces spp. 8
7. Ảnh hưởng của môi trường dinh dưỡng đến sự phát triển của bào tử nấm .9
7.1. Metarhizium anisopliae .9
7.2. Beauveria bassiana .9
7.3. Paecilomyces spp. .9
8. Ảnh hưởng của một số môi trường nhân sinh khối lên các loài nấm ký sinh
côn trùng 9
II. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .11
1. Phương tiện thí nghiệm 11
2. Phương pháp thí nghiệm 11
2.1. Thu thập mẫu côn trùng bị nhiễm nấm và phân lập 3 loài nấm ký sinh côn
trùng Beauveria bassiana (Bals.) Vuill, Metarhizium anisopilae (Metsch.)
Sorok và Paecilomyces spp. ở 6 tỉnh An Giang, Cần Thơ, Sóc Trăng, Vĩnh
Long, Hậu Giang và Tiền Giang 11
2.2. Phân lập, tách ròng, định danh và tồn trữ các mẫu nấm thu được trong
môi trường PDA (Potato Destrose Agar) 12
2.3. Thử nghiệm hoạt lực sinh học của các mẫu nấm thu thập được trên sâu ăn
tạp trong điều kiện phòng thí nghiệm .13
2.4. Khảo sát ảnh hưởng của 4 loại môi trường dinh dưỡng lên sự hình thành
và phát triển bào tử của các loại nấm xanh Metarhizium anisopliae (Ma), nấm
iii
trắng Beauveria bassiana (Bb), nấm tím Paecilomyces spp. (Pae) trong môi
trường lỏng. .14
2.4.1. Nguồn nấm 14
2.4.2. Bố trí thí nghiệm 14
2. 4.3. Chỉ tiêu đánh giá .16
2.4.4. Thống kê: Tổng hợp số liệu và phân tích thống kê bằng phần mềm
MSTATC .16
CHƯƠNG II. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 17
I. Thu thập mẫu côn trùng bị nhiễm nấm và phân lập 3 loài nấm ký sinh côn
trùng Beauveria bassiana (Bals.) Vuill, Metarhizium anisopilae (Metsch.)
Sorok và Paecilomyces spp. ở 6 tỉnh An Giang, Cần Thơ, Sóc Trăng, Vĩnh
Long, Hậu Giang và Tiền Giang .17
II. Phân lập, định danh và tồn trữ các mẫu nấm thu được trong môi trường PDA
(Potato Destrose Agar) .18
III. Thử nghiệm hoạt lực sinh học của các mẫu nấm thu thập được trên sâu ăn
tạp trong điều kiện phòng thí nghiệm .20
IV. Khảo sát ảnh hưởng của 4 loại môi trường dinh dưỡng lên sự hình thành và
phát triển bào tử của các dòng nấm Metarhizium anisopliae, nấm Beauveria
bassiana và nấm Paecilomyces spp. trong 4 môi trường dinh dưỡng (môi trường
lỏng) 23
1. Khả năng sinh bào tử của nấm Metarhizium anisopliae M2-AG trên 4 loại
môi trường dinh dưỡng 23
2. Khả năng sinh bào tử của nấm Metarhizium anisopliae M5-AG trên 4 loại
môi trường dinh dưỡng 24
3. Khả năng sinh bào tử của dòng nấm Metarhizium anisopliae M1 - CT trên 4
loại môi trường dinh dưỡng 25
4. Khả năng sinh bào tử của dòng nấm Metarhizium anisopliae M3 - VL trên 4
loại môi trường dinh dưỡng 26
5. Khả năng sinh bào tử của dòng nấm Metarhizium anisopliae M1-ST trên 4
loại môi trường dinh dưỡng 26
6. Khả năng sinh bào tử của dòng nấm Beauveria bassiana B2-AG trên 4 loại
môi trường dinh dưỡng 27
7. Khả năng sinh bào tử của dòng nấm Beauveria bassiana B2-TG trên 4 loại
môi trường dinh dưỡng 28
8. Khả năng sinh bào tử của dòng nấm Beauveria bassiana B1–VL trên 4 loại
môi trường dinh dưỡng 29
9. Khả năng sinh bào tử của dòng nấm Paecilomyces spp. Pae2 - AG trên 4 loại
môi trường dinh dưỡng 30
10. Khả năng sinh bào tử của dòng nấm Paecilomyces spp. Pae3 - TG trên 4 loại
môi trường dinh dưỡng 30
CHƯƠNG III. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .34
I. Kết luận 34
II. Kiến nghị 34
TÀI LIỆU THAM KHẢO
PHỤ CHƯƠNG