Luận Văn Phân lập, tuyển chọn vi khuẩn sinh tổng hợp enzyme chitosanase và chọn lựa điều kiện nuôi cấy tối ưu

Đề tài: Phân lập, tuyển chọn vi khuẩn sinh tổng hợp enzyme chitosanase và chọn lựa điều kiện nuôi cấy tối ưu chúng


MỤC LỤC
PHẦN I. MỞ ĐẦU 1
1.1 Đặt vấn đề. 1
1.2. Mục đích, yêu cầu. 2
1.2.1. Mục đích. 2
1.2.2. Yêu cầu. 3
PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3
2.1. Enzyme Chitosanase. 3
2.1.1. Khái niệm về enzyme Chitosanase. 4
2.1.1. Cấu tạo và khối lượng phân tử enzyme Chitosanase. 4
2.1.2. Cơ chất và cơ chế tác dụng của enzym Chitosanase. 6
2.1.2.1. Cơ chất của enzym Chitosanase. 6
2.1.2.2. Cơ chế tác động của enzym Chitosanase. 7
2.1.3. Phân loại enzyme Chitosanase. 7
2.1.4. Ý nghĩa thực tiễn của Chitosanase. 11
2.2. Chitosanase Oligosaccharide. 11
2.2.1. Khái quát về Chitosana Oligosaccharide. 11
2.2.2. Ứng dụng của COS. 11
2.2.2.1. Ứng dụng COS trong y học [22,26,28] 12
2.3.2.2. Trong công nghệ thực phẩm 13
2.2.2.3. Trong nông nghiệp. 14
2.2.3.4. Trong công nghệ sinh học và xử lí rác thải 14
2.2.3.5. Trong lĩnh vực thẩm mỹ. 15
2.3. Nguồn thu nhận enzyme Chitosanase. 15
2.4. Phân lập phân lập giống vi sinh vật thuần chủng. 15
2.5. Các yếu tố ảnh hưởng đến khả năng sinh tổng hợp Chitosanase. 16
2.5.1. Nhân giống. 16
2.5.2. Ảnh hưởng của pH 17
2.5.3. Ảnh hưởng của nhiệt độ. 18
2.5.4. Ảnh hưởng của các thành phần dinh dưỡng. 18
2.5.4.1. Ảnh hưởng của nguồn nitơ. 19
2.6.4.1. Ảnh hưởng của nguồn cacbon. 19
2.6. Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước về enzym Chitosanase. 20
2.6.1. Tình hình nghiên cứu trên thế giới 20
2.6.2. Tình hình nghiên cứu trong nước. 23
PHẦN III VẬT LIỆU , NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24
3.1. Vật liệu nghiên cứu. 24
3.1.1. Đối tượng. 24
3.1.2. Các môi trường sử dụng. 24
3.1.3. Dụng cụ, thiết bị và hóa chất đã sử dụng. 25
3.1.4. Địa điểm nghiên cứu. 25
3.2. Nội dung nghiên cứu. 25
3.3. Phương pháp nghiên cứu. 26
3.3.1. Phân lập, bảo quản giống có khả năng sinh tổng hợp enzyme chitosanase 26
3.3.2. Chọn lựa mẫu có khả năng sinh tổng hợp enzyme chitosanase. 26
3.3.2.1. Chọn lựa có khả năng sinh tổng hợp enzyme chitosanase. 26
3.3.2.2. Nuôi cấy các mẫu có hoạt tính. 27
3.3.2.3. Xác định vòng phân giải của enzyme thô các mẫu sau khi nuôi cấy. 27
3.3.3.Nghiên cứu đặc điểm hình thái khuẩn lạc và hình thái tế bào của mẫu được tuyển chọn. 27
3.3.4. Xác định đường cong sinh trưởng cùa các mẫu vi sinh vật đă được chọn. 28
3.3.5. Chọn lựa điều kiện nuôi cấy tối ưu thu nhận enzyme chitosanase từ các mẫu vi sinh vật đã lựa chọn. 28
3.3.5.1. Khảo sát ảnh hưởng của thời gian nuôi cấy. 28
3.3.5.2. Khảo sát ảnh hưởng của tỷ lệ tiếp giống. 28
3.3.5.3. Khảo sát ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy. 29
3.3.5.4. Khảo sát ảnh hưởng của pH nuôi cấy. 29
3.3.5.5. Khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ nuôi cấy. 29
3.3.6. Phương pháp xác định hoạt tính của enzyme chitosanase. 29
Hoạt tính enzyme Chitosanase được xác định dựa vào sản phẩm phản ứng và lượng đường khử hình thành. 29
3.3.6.1. Nguyên tắc [1, 11] 30
3.3.6.2. Hóa chất 30
3.3.6.3. Tiến hành. 31
3.3.6.4. Dựng đương chuẩn D-Glucosamine Hydro Chloride. 31
3.3.6.5. Hoạt tính Chitosanase. 31
3.3.6.6. Phương pháp xác định hàm lượng Protein. 32
PHẦN IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 33
4.1. Phân lập các mẫu vi khuẩn có khả năng sinh tổng hợp enzyme Chitosanase 33
4.2. Tuyển chọn các mẫu vi khuẩn cá khả năng sinh tổng hợp enzyme Chitosanase hoạt tính cao. 35
4.3. Nghiên cứu về đặc điểm hình thái khuẩn lạc, hình thái tế bào của mẫu DC1 và TH5. 37
4.3.1. Đặc điểm hình thái khuẩn lạc. 37
4.3.2. Đặc điểm hình thái học của tế bào. 40
4.4. Xác định đường cong động học của mẫu vi khuẩn. 40
4.5. Khảo sát ảnh hưởng của các yếu tố môi trường nuôi cấy đến khả năng sinh tổng hợp enzyme Chitosanase của mẫu DC1 và TH5. 43
4.5.1. Tỷ lệ tiếp giống. 43
4.5.2. Môi trường nuôi cấy. 44
4.5.3. pH nuôi cấy. 47
4.5.4. Nhiệt độ nuôi cấy. 49
4.6. Điều kiện nuôi cấy 2 mẫu vi khuẩn. 51
Trên cơ sở các kết quả thu được ở trên, các điều kiện nuôi cấy 2 mẫu vi khuẩn để sinh tổng hợp Chitosanase được tổng hợp ở Bảng 4.8. 51
PHẦN V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ. 53
5.1. Kết luận. 53
5.2. Đề nghị 54
TÀI LIỆU THAM KHẢO . 55