Thạc Sĩ Phân lập, tuyển chọn và nghiên cứu khả năng phân hủy sinh học hydrocacbon thơm của một vài chủng vi

Đề tài: PHÂN LẬP, TUYỂN CHỌN VÀ NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG PHÂN HỦY SINH HỌC HYDROCACBON THƠM CỦA MỘT VÀI CHỦNG VI KHUẨN ĐƯỢC PHÂN LẬP TỪ NƯỚC Ô NHIỄM DẦU TẠI QUẢNG NINH


Luận văn dài 78 trang
CHƯƠNG I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU .8
1.1 Đặc điểm cơ bản của hợp chất hydrocarbon thơm đa nhân .8
1.1.1. Tính chất hóa lý 8
1.1.2 Tính độc của PAH và ảnh hưởng của nó tới môi trường
sống .10
1.2. Nguồn gốc phát sinh PAH 13
1.2.1. Hiện trạng ô nhiễm PAH trên thế giới và ở Việt Nam .13
1.2.2. Nguồn gốc phát sinh 14
1.3. Các biện pháp xử lý tẩy độc PAH 15
1.3.1 Phương pháp hóa lý 16
1.3.2. Phương pháp phân hủy sinh học .16
1.4. Phân hủy sinh học các PAH bởi vi sinh vật 19
1.4.1. Vi sinh vật phân hủy PAH .19
1.4.2. Cơ chế phân hủy PAH bởi VSV .21
1.5. Các yếu tố ảnh hưởng tới quá trình phân hủy các hợp chất
hydrocarbon thơm đa nhân .25
1.6. Các phương pháp phân loại vi sinh vật 29
1.6.1. Phương pháp phân loại truyền thống .29
1.6.2. Phương pháp phân loại bằng sinh học phân tử .30
CHƯƠNG II. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33
2.1. Nguyên liệu và hóa chất 33
2.1.1. Nguyên liệu .33
2.1.2. Hóa chất .33
2.2. Môi trường nuôi cấy 33
2.3. Máy móc và thiết bị nghiên cứu .34
2.4. Phương pháp nghiên cứu .34
2.4.1. Phân lập vi sinh vật trên mẫu nước nhiễm dầu 34
2.4.2. Nghiên cứu một số đặc điểm sinh học của một số
chủng vi khuẩn .35
2.4.3. Đánh giá khả năng sử dụng PAH của vi khuẩn 36
2.4.4. Xác định trình tự gen mã hóa 16S rRNA và catechol
2,3-dioxygenase 36
2.4.4.1. Tách chiết DNA tổng số của vi khuẩn theo
phương pháp của Sambrook, Russell 36
2.4.4.2. Nhân đoạn gen bằng phương pháp PCR 37
2.4.4.3. Quy trình biến nạp và chọn dòng 38
2.4.4.4. Phương pháp xác định trình tự gen bằng máy tự
động 40
2.4.4.5. Phương pháp xây dựng cây phát sinh chủng loại .41
CHƯƠNG III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 42
3.1. Phân lập và tuyển chọn vi khuẩn có khả năng phát triển
trên môi trường chứa PAH .42
3.2. Đặc điểm hình thái và tế bào của chủng vi khuẩn BQN31 .44
3.3. Khả năng sử dụng các loại PAH của chủng vi khuẩn
BQN31 .45
3.4. Xác định trình tự đoạn gen mã hóa 16S rRNA của chủng
BQN31 .49
3.4.1. Tách chiết DNA tổng số và nhân đoạn gen mã hóa
16S rRNA bằng kỹ thuật PCR .49
3.4.2. Tách dòng gen mã hóa 16S rRNA từ chủng BQN31 50
3.4.3 Tách DNA plasmid và kiểm tra các dòng khuẩn lạc
thích hợp 52
3.4.4. Trình tự gen 16S rRNA của chủng vi khuẩn BQN31 .54
3.5. Nhân đoạn gen mã hóa catechol 2,3 dioxygenase từ chủng
BQN31 .57
IV. KẾT LUẬN 62