Luận Văn Phân lập một số dòng vi khuẩn có khả năng phân hủy cellulose trong trấu đang hoại mục

Luận văn Đại Học Cần Thơ - dài 59 trang

MỤC LỤC

LỜI BẢN QUYỀN
TRANG HỘI ĐỒNG KÝ TÊN
LỜI CẢM TẠ
TÓM LƯỢC
BẢNG KÍ HIỆU VIẾT TẮT
DANH MỤC BẢNG
DANH MỤC HÌNH
MỤC LỤC
Phần I: ĐẶT VẤN ĐỀ .1
Phần II: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2
I. Tổng quan về trấu và enzim cellulase 2
1. Tổng quan về trấu 2
2. Giới thiệu về cellulose và enzim cellulase 2
3. Cơ chế quá trình phân hủy cellulose .3
a. Cơ chế của quá trình oxy hóa cellulose (phân hủy hiếu khí) 3
b. Cơ chế của quá trình phân hủy cellulose trong điều kiện kỵ khí .4
4. Vi sinh vật phân hủy cellulose 4
a. Các vi sinh vật phân hủy cellulose trong điều kiện hiếu khí .4
b. Những vi sinh vật phân hủy cellulose trong điều kiện kỵ khí .4
5. Sơ lược một số phương pháp sinh hóa 5
a. Định lượng hàm lượng protein bằng phương pháp Bradford (1976) 5
b. Định lượng đường khử bằng phương pháp Nelson (1994) .5
c. Phương pháp điện di trên gel SDS-PAGE 6
II. Tình hình nghiên cứu trong nước và trên thế giới 6
1. Tình hình nghiên cứu trong nước .6
2. Tình hình nghiên cứu trên thế giới .6
Phần III: PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .8
I. Phương tiện thí nghiệm .8
1. Thời gian và địa điểm tiến hành thí nghiệm 8
2. Phương tiện thí nghiệm 8
a. Dụng cụ, thiết bị thí nghiệm 8
b. Vật liệu thí nghiệm 9
c. Hóa chất 9
II. Phương pháp nghiên cứu .9
1. Thí nghiệm 1: Phân lập vi khuẩn. .10
a. Phân lập vi khuẩn 10
b. Nhuộm Gram vi khuẩn .13
c. Quan sát mô tả hình dạng và khả năng chuyển động
của vi khuẩn 14
2. Thí nghiệm 2: Khảo sát sự thủy phân của vi khuẩn hiếu khí
bằng đường kính thuỷ phân .15
a. Khảo sát sự thủy phân cellulose của vi khuẩn
trên môi trường có Congo red 15
b. Đếm mật số tế bào vi khuẩn 16
3. Thí nghiệm 3: Khảo sát hàm lượng protein trong dịch nuôi vi khuẩn
bằng phương pháp Bradford (1976) 16
4. Thí nghiệm 4: Khảo sát hoạt tính enzim cellulase bằng phương pháp
Nelson (1994). .19
5. Thí nghiệm 5: Khảo sát trọng lượng phân tử protein trong dịch nuôi vi
khuẩn bằng phương pháp điện di SDS – PAGE 21
Phần IV: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 23
I. Thí nghiệm 1: Phân lập vi khuẩn .23
1. Phân lập vi khuẩn .23
2. Nhuộm Gram vi khuẩn .24
3. Mô tả vi khuẩn, khuẩn lạc 25
II. Thí nghiệm 2: Khảo sát sự thủy của vi khuẩn hiếu khí
bằng đường kính thuỷ phân .28
III. Thí nghiệm 3: Khảo sát hàm lượng protein trong dịch nuôi vi khuẩn bằng
phương pháp Bradford (1976) .32
IV. Thí nghiệm 4: Khảo sát hoạt tính cellulase
bằng phương pháp Nelson (1994) .34
V. Thí nghiệm 5: Khảo sát trọng lượng phân tử protein
trong dịch nuôi vi khuẩn bằng phương pháp điện di SDS-PAGE 37
Phần V: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 39
I. Kết luận .39
II. Đề nghị .39
TÀI LIỆU THAM KHẢO 40
PHỤ LỤC 1: HÓA CHẨT THÍ NGHIỆM i
PHỤ LỤC 2: SỐ LIỆU THỐNG KÊ ii

DANH MỤC BẢNG

Bảng 1 Thành phần môi trường CMC phân lập vi khuẩn . 9
Bảng 2 Thành phần môi trường CMC trích ly enzyme cellulase 9
Bảng 3 Bảng tóm tắt quá trình nhuộm Gram . 14
Bảng 4 Nguồn gốc mẫu . 23
Bảng 5 Kết quả nhuộm Gram 14 dòng vi khuẩn hiếu khí . 25
Bảng 6 Kết quả nhuộm Gram 14 dòng vi khuẩn kỵ khí 25
Bảng 7 Mô tả hình dạng khuẩn lạc . 26
Bảng 8 Kết quả đo đường kính vòng thuỷ phân vi khuẩn hiếu khí . 29
Bảng 9 Đường kính thuỷ phân sau 4 ngày ủ của vi khuẩn hiếu khí 29
Bảng 10 Kết quả đo đường kính vòng thuỷ phân vi khuẩn kỵ khí 30
Bảng 11 Đường kính thuỷ phân sau 4 ngày ủ của vi khuẩn kỵ khí . 30
Bảng 12 Kết quả đo OD ở 595nm các mẫu protein chuẩn 32
Bảng 13 Kết quả đo OD ở 595nm các mẫu protein . 33
Bảng 14 Kết quả thống kê số hàm lượng protein
của các dòng vi khuẩn hiếu khí 33
Bảng 15 Kết quả đo mật số vi khuẩn 33
Bảng 16 Kết quả đo OD ở bước sóng 520nm đường chuẩn glucose . 35
Bảng 17 Hàm lượng đường khử trong dịch nuôi vi khuẩn
hiếu khí sau 4 ngày 36
Bảng 18 Hoạt tính cellulase của dịch nuôi vi khuẩn sau 4 ngày . 36
Bảng 19 Số liệu vẽ đường biểu diễn log của protein chuẩn 37
Bảng 20 Trọng lượng phân tử protein trong dịch trích enzim của vi
khuẩn hiếu khí 38
Bảng 1 Thống kê đường kính thuỷ phân sau 4 ngày ủ của 14 dòng vi
khuẩn hiếu khí . ii
Bảng 2 Thống kê đường kính thuỷ phân sau 4 ngày ủ của 14 dòng vi
khuẩn kỵ khí . iii
Bảng 3 Kết quả phân tích thống kê hàm lượng protein trong dịch trích
enzim . iv
Bảng 4 Kết quả phân tích thống kê hàm lượng đường khử . iv

DANH MỤC HÌNH

Hình 1 Một số thiết bị dùng trong nghiên cứu . 8
Hình 2 Hình thu mẫu trấu và đất 10
Hình 3 Sơ đồ quy trình phân lập vi khuẩn 10
Hình 4 Cách pha loãng mẫu 11
Hình 5 Cấy cấy vi khuẩn trên đĩa petri 12
Hình 6 Quy trình nhuộm Gram vi khuẩn . 13
Hình 7 Sơ đồ trích dịch nuôi vi khuẩn cho các phản ứng sinh hóa 17
Hình 8: Sơ đồ phân tích protein bằng phương pháp điện di SDS-PAGE . 21
Hình 9 Nhuộm Gram vi khuẩn 24
Hình 10 Một số hình ảnh khuẩn lạc của vi khuẩn hiếu khí . 27
Hình 11 Một số hình ảnh khuẩn lạc của vi khuẩn kỵ khí 27
Hình 12 Đường kính thuỷ phân của các dòng vi khuẩn hiếu khí 31
Hình 13 Đường kính thuỷ phân của các dòng vi khuẩn kỵ khí . 31
Hình 14 Biểu đồ đường chuẩn BSA 32
Hình 15 Kết quả đo nồng độ protein 34
Hình 16 Biểu đồ đường chuẩn glucose 35
Hình 17 Kết quả đo nồng độ glucose 36
Hình 18 Đồ thị đường logM của protein chuẩn 37
Hình 19 Kết quả điện di SDS-PAGE . 38