Luận Văn Phân lập một số dòng vi khuẩn có khả năng phân hủy cellulose trong bã mía đang phân hủy

Luận văn Đại Học Cần Thơ - dài 56 trang

MỤC LỤC

DANH SÁCH BẢNG
DANH SÁCH HÌNH
TÓM TẮT
PHẦN I. ĐẶT VẤN ĐỀ .1
PHẦN II. LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 3
I. CÁC THÀNH PHẦN CÓ TRONG BÃ MÍA 3
II. SƠ LƯỢC VỀ CELLULOSE VÀ CELLULASE 3
1. Cellulose 3
2. Cellulase 4
a) Phân loại cellulase .4
b) Một số đặc tính của cellulase .4
3. Sơ lược về vi sinh vật phân hủy cellulose .6
III. SƠ LƯỢC VỀ MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP HÓA SINH, VI SINH 7
1. Định lượng hàm lượng protein bằng phương pháp
Bradford (1976) .7
2. Định lượng đường khử bằng phương pháp Nelson Somogyi
(Nelson, 1944) 7
3. Phương pháp điện di trên gel polyacrylamid (SDS- PAGE) 7
4. Phương pháp nhuộm gram 7
IV. TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TRÊN THẾ GIỚI
VÀ TRONG NƯỚC. 8
1. Tình hình nghiên cứu trong nước 8
2. Tình hình nghiên cứu trên thế giới .8
PHẦN III PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . 9
I. PHƯƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU .9
1. Địa điểm - thời gian .9
2. Nguyên liệu: 9
3. Thiết bị, dụng cụ thí nghiệm 9
4. Hoá chất .10
II. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .10
1. Mục đích thí nghiệm: 10
2. Chuẩn bị mẫu vật và môi trường nuôi cấy vi sinh vật .10
a) Chuẩn bị mẫu .10
b) Môi trường phân lập .11
c) Môi trường trích ly enzim cellulase 11
3. Thí nghiệm 1: Phân lập vi khuẩn 12
a) Quy trình phân lập vi khuẩn .12
b) Nhuộm Gram vi sinh vật 14
c) Quan sát, mô tả hình dạng và khả năng
chuyển động của vi khuẩn 17
4. Thí nghiệm 2: Khảo sát hoạt tính cellulase bằng phương pháp
đo đường kính thủy phân. .17
5. Thí nghiệm 3: Khảo sát hàm lượng protein trong dịch nuôi
vi khuẩn bằng phương pháp Bradford (1976) 19
6. Thí nghiệm 4: Khảo sát lượng đường khử sinh ra
bằng phương pháp Nelson (1944) .22
7. Thí nghiệm 5: Khảo sát thành phần protein trong dịch nuôi vi khuẩn
bằng phương pháp điện di trên gel polyacrylamid (SDS- PAGE) 24
PHẦN IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .27
I. THÍ NGHIỆM 1: Phân lập vi khuẩn 27
II. THÍ NGHIỆM 2: Đường kính thủy phân .32
III. THÍ NGHIỆM 3: Khảo sát hàm lượng protein trong dịch nuôi
vi khuẩn bằng phương pháp Bradford .35
IV. THÍ NGHIỆM 4: Khảo sát lượng đường khử sinh ra
bằng phương pháp Nelson (1944) .37
V. THÍ NGHIỆM 5: Khảo sát trọng lượng phân tử của cellulase
trong dịch trích thô. 39
PHẦN V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 41
I. KẾT LUẬN 41
II. ĐỀ NGHỊ 41
TÀI LIỆU THAM KHẢO .42
PHỤ LỤC

DANH SÁCH BẢNG

Bảng 1: Thành phần hóa học trong bã mía . 3
Bảng 2: Thành phần môi trường CMC: Delafield (Môi trường phân lập) 11
Bảng 3: Thành phần môi trường CMC: Delafield
( Môi trường trích ly enzim) . 11
Bảng 4: Hóa chất pha dung dịch Glugol . 15
Bảng 5: Hóa chất pha dung dịch thuốc nhuộm Basic Fuchsin . 15
Bảng 6: Hóa chất pha thuốc nhuộm Crystal Violet . 16
Bảng 7: Bố trí thí nghiệm dựng đường chuẩn BSA . 21
Bảng 8 : Bố trí thí nghiệm đo hàm lượng protein trong mẫu . 21
Bảng 9: Bố trí thí nghiệm dựng đường chuẩn glucose 22
Bảng 10: Bố trí thí nghiệm xác định đường khử của mẫu thí nghiệm 23
Bảng 11: Nguồn gốc mẫu đã phân lập 27
Bảng 12: Kết quả nhuộm gram 10 dòng vi khuẩn hiếu khí . 28
Bảng 13: Kết quả nhuộm gram 15 dòng vi khuẩn kỵ khí 28
Bảng 14: Hình dạng và đặc tính khuẩn lạc và vi khuẩn hiếu khí 29
Bảng 15: Hình dạng và đặc tính khuẩn lạc và vi khuẩn kỵ khí 30
Bảng 16: Đường kính thuỷ phân sau 5 ngày ủ của 10 dòng vi khuẩn hiếu khí 33
Bảng 17: Đường kính thuỷ phân sau 5 ngày ủ của 15 dòng vi khuẩn kỵ khí . 34
Bảng 18: Đường chuẩn protein (O.D.595 nm) 35
Bảng 19: Hàm lượng protein trong dịch nuôi vi khuẩn sau 4 ngày 36
Bảng 20: Hàm lượng protein trong dịch nuôi vi khuẩn sau 4 ngày . 36
Bảng 21: Mật số vi khuẩn sau 4 ngày nuôi 37
Bảng 22: Đường chuẩn glucose chuẩn hấp thụ ở bước sóng 520 nm 38
Bảng 23: Hoạt tính enzim của các dòng vi khuẩn hiếu khí trong
dịch nuôi sau 4 ngày 38
Bảng 24: Hoạt tính các dòng vi khuẩn hiếu khí (Phân tích bằng
phương pháp Nelson . 39

DANH SÁCH HÌNH

Hình 1: Một số thiết bị thí nghiệm 9
Hình 2: Thu mẫu tại nhà máy mía đường Phụng Hiệp .10
Hình 3: Sơ đồ quy trình phân lập vi khuẩn .12
Hình 4: Thí dụ minh họa phương pháp pha loãng mẫu .14
Hình 5: Qui trình nhuộm gram vi khuẩn .16
Hình 6: Phương pháp đo đường kính thủy phân .18
Hình 7: Phản ứng gắn kết giữa protein với Coomassie
Brilliant Blue G250 19
Hình 8: Sơ đồ quy trình chuẩn bị dịch nuôi vi khuẩn trích ly protein .20
Hình 9: Sơ đồ phân tách protein bằng phương pháp điện di SDS-PAGE 24
Hình 10: VK Gram dương 29
Hình 11: VK Gram âm .29
Hình 12: Hình dạng khuẩn lạc hiếu khí 31
Hình 13: Hình dạng khuẩn lạc hiếu khí .31
Hình 14: Đường kính thuỷ phân của vi khuẩn hiếu khí sau 5 ngày ủ .33
Hình 15: Đường kính thuỷ phân của vi khuẩn kỵ khí sau 5 ngày ủ .35
Hình 16: Biểu đồ đường chuẩn BSA .36
Hình 17: Hàm lượng protein trong dịch nuôi vi khuẩn sau 4 ngày đo bằng
phương pháp Braford 37
Hình 18: Biểu đồ đường chuẩn glucose 38
Hình 19: Hình chụp kết quả Nelson những dòng có hoạt tính .39
Hình 20: Hình chụp kết quả Nelson những dòng không có hay
có hoạt tính yếu .39
Hình 21: Kết quả điện di 4 vòng vi khuẩn hiếu khí có hoạt tính .40