Luận Văn Phân lập, khảo sát đặc điểm của vi khuẩn Bacillus subtilis và tìm hiểu khả năng sinh enzyme (proteas

MỤC LỤC


LỜI CẢM ƠN iii


TÓM TẮT iv


ABSTRACT .v


MỤC LỤC vi


DANH SÁCH CÁC BẢNG . ix


DANH SÁCH HÌNH .x


DANH SÁCH SƠ ĐỒ xi


Chương 1: MỞ ĐẦU .1


1.1. Đặt vấn đề .1


1.2. Mục đích đề tài .2


1.3. Yêu cầu đề tài .2


Chương 2: TỔNG QUAN .3


2.1. Sơ lược về vi khuẩn Bacillus subtilis .3


2.1.1. Lịch sử phát hiện .3


2.1.2. Đặc điểm phân loại và sự phân bố của vi khuẩn Bacillus subtilis 3


2.1.3. Đặc điểm hình thái 4


2.1.4. Đặc điểm nuôi cấy 4


2.1.5. Đặc điểm sinh hoá .5


2.1.6. Bào tử và khả năng tạo bào tử của vi khuẩn Bacillus subtilis 6


2.1.6.1. Cấu tạo bào tử 6


2.1.6.2. Khả năng tạo bào tử .6


2.1.7. Tính chất đối kháng 6


2.2. Giới thiệu về enzyme amylase và enzyme protease .7


2.3.1. Enzyme amylase .7


2.3.1.1. Lịch sử nghiên cứu 7


2.3.1.2. Vi sinh vật tạo amylase 7


2.3.1.3. Đặc tính của amylase .8


2.3.1.4. Sinh tổng hợp amylase ở vi sinh vật 10


2.3.1.5. Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình sinh tổng hợp amylase .10


2.3.1.6. Ứng dụng amylase vi sinh vật .11


2.3.2. Enzyme protease .11


2.3.2.1. Nguồn thu nhận enzyme protease 11


2.3.2.2. Đặc điểm và tính chất của protease vi sinh vật .12


2.3.2.3. Chức năng sinh học của protease vi sinh vật .13


2.3.2.4. Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình sinh tổng hợp protease của


vi sinh vật .14


2.3.2.5. Ứng dụng protease vi sinh vật 14


2.3. Giới thiệu về probiotic 15


2.4.1. Định nghĩa .15


2.4.2. Chức năng sinh học .15


2.4.3. Một số chế phẩm probiotic thông dụng 15


2.4. Tình hình nghiên cứu và ứng dụng chế phẩm có vi khuẩn


Bacillus subtilis .16


Chương 3: NỘI DUNG VÀ PHưƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18


3.1. Thời gian và địa điểm thực hiện đề tài .18


3.1.1. Thời gian .18


3.1.2. Địa điểm 18


3.2. Vật liệu thí nghiệm .18


3.2.1. Đối tượng khảo sát 18


3.2.2. Thiết bị và dụng cụ thí nghiệm .18


3.2.2.1. Thiết bị .18


3.2.2.2. Dụng cụ: 18


3.3. Nội dung nghiên cứu 19


3.4. Phương pháp thực hiện đề tài .19


3.4.1. Phân lập vi khuẩn Bacillus subtilis từ đất .19


3.4.1.1. Cách lấy mẫu đất để phân lập vi khuẩn .19


3.4.1.2. Phương pháp phân lập vi khuẩn Bacillus subtilis 19


3.4.1.3. Khảo sát đặc điểm sinh học của vi khuẩn phân lập được 20


3.4.2. Các thí nghiệm về vi khuẩn Bacillus subtilis 21


3.4.2.1. Ảnh hưởng của chế độ sục khí và thời gian nuôi cấy đến khả


năng sinh enzyme của vi khuẩn Bacillus subtilis 21


3.4.2.2. Ảnh hưởng của môi trường đến hoạt độ enzyme của vi khuẩn


Bacillus subtilis .22


3.4.2.3. Khảo sát điều kiện (pH, thời gian) thích hợp cho sự sản xuất


enzyme của các chủng Bacillus subtilis .23


3.4.3. Thử nghiệm thời gian và nhiệt độ bảo quản chế phẩm từ Bacillus


subtilis .25


3.4.3.1. Quy trình thực hiện 25


3.4.3.2. Kiểm tra chế phẩm trong thời gian bảo quản 25


Chương 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .26


4.1. Khảo sát đặc điểm của vi khuẩn Bacillus subtilis 26


4.1.1. Quan sát đặc điểm khuẩn lạc nghi ngờ là Bacillus subtilis 26


4.1.2. Đặc điểm hình thái của vi khuẩn nghi ngờ là Bacillus subtilis 26


4.1.3. Khảo sát đặc điểm sinh hóa 27


4.2. Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng của chế độ sục khí và thời gian nuôi cấy đến


khả năng sinh enzyme amylase và protease của các chủng vi khuẩn. 29


4.3. Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng của môi trường đến hoạt độ enzyme của vi


khuẩn Bacillus subtilis 31


4.4. Khảo sát điều kiện (pH, thời gian) thích hợp cho sản xuất enzyme của các


chủng Bacillus subtilis 33


4.5. Khảo sát thời gian và nhiệt độ bảo quản chế phẩm sau khi sản xuất .34


Chương 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 36


5.1. Kết luận 36


5.2. Đề nghị .36


PHỤ LỤC 40


DANH SÁCH CÁC BẢNG


Bảng 3. 1: Bố trí thí nghiệm 1 .21


Bảng 3. 2: Bố trí thí nghiệm 2 .23


Bảng 3. 3: Bố trí thí nghiệm 3 .24


Bảng 4.1: Kết quả thử phản ứng sinh hoá 29


Bảng 4.2: Kết quả thí nghiệm 1 (Bảng phụ lục 1 và 2) .29


Bảng 4. 3: Kết quả hoạt độ enzyme trung bình của 9 chủng vi khuẩn thí nghiệm .31


Bảng 4. 4. Ảnh hưởng của môi trường đến hoạt độ enzyme của vi khuẩn. 32


Bảng 4. 5. Khảo sát điều kiện (pH, thời gian) thích hợp cho sản xuất 33


Bảng 4.6. Khảo sát thời gian và nhiệt độ bảo quản chế phẩm 34


ix