Luận Văn NHÂN DÒNG GEN PRION (PrP) TỪ BÒ HANWOO (BOS TAUR US COREANAE) CỦA HÀN QUỐC

TÓM TẮT


BSE là một bệnh truyễn nhiễm do prion, là một trong những bệnh được quan


tâm trong giới nghiên cứu. Hiện nay các nhà khoa học đang tiến hành nghiên cứu để


có thể tạo ra một bộ kit chẩn đoán sớm bệnh BSE, các nghiên cứu này đều tập trung


nghiên cứu cấu trúc protein PrPsc, dạng protein gây bệnh của prion. Bước đầu trong


nghiên cứu của chúng tôi về protein PrPsc, đã tiến hành nhân dòng và giải trình tự gen


prion.


Tách chiết DNA từ máu của bò Hanwoo và PCR để khuếch đại gen prion. Gen


prion được khuếch đại có kích thước 651 bp, sau đó được kết buộc vào véc tơ pGEM-


T easy và chuyển vào vi khuẩn E. coli DH5α. Khuẩn lạc chứa véc tơ tái tổ hợp có màu


+

trắng trên môi trường LB chuyên biệt (Amp , Xgal, IPTG). Plasmid thu được sau quá


trình tinh sạch được giải mã trình tự. Kết quả giải trình tự thành công đã cho thấy sự


giống nhau gần như hoàn toàn trong trình tự gen prion của bò Hanwoo và bò châu Âu.


Việc thành công trong quá trình nhân dòng sẽ là bước đầu quan trọng cho mục


tiêu cuối cùng trong nghiên cứu của chúng tôi là tạo kit chẩn đoán bệnh BSE.


MỤC LỤC


Lời cảm tạ .iii


Tóm tắt iv


Mục lục .vi


Danh sách các chữ viết tắt viii


Danh sách các bảng xi


Danh sách các bảng hình ảnh .x


CHưƠNG 1: MỞ ĐẦU 1


1.1. Đặt vấn đề 1


1.2. Mục tiêu . 1


1.3. Yêu cầu 1


CHưƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2


2.1. Prion .2


2.2. Bệnh não dạng xốp ở bò và các bệnh khác có nguyên nhân do pion 3


2.2.1. Bệnh não dạng xốp ở bò .3


2.2.2 Các bệnh khác có nguyên nhân do prion .4


2.3. Sự nhân dòng . 5


2.3.1. Kỹ thuật PCR 5


2.3.2. Kỹ thuật điện di 6


2.3.3. Véc tơ plasmid 6


2.3.4. Sự kết buộc .7


2.3.5. Biến nạp ở vi khuẩn E. coli 7


2.3.6. Chọn lọc vi khuẩn đã được biến nạp 8


2.3.7. Giải trình tự 9


2.3.7.1. Phương pháp Sanger và Coulson .9


2.3.7.2. Phương pháp Maxam – Gilbert .9


2.3.7.3. Giải trình tự bằng hệ thống tự động 9


CHưƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHưƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . 10


3.1. Thời gian và địa điểm thực hiện đề tài 10


3.2. Vật liệu 10

3.3. Dụng cụ và hoá chất 10


3.3.1. Dụng cụ . 10


3.3.2. Hóa chất 10


3.3.3. Các dung dịch . 11


3.4. Mồi PCR . 11


3.5. Khuếch đại gen prion từ bộ gen của bò Hàn Quốc bằng kỹ thuật PCR 11


3.6. Kỹ thuật điện di trên thạch agarose phân tách gen prion . 12


3.6.1. Kiểm tra sản phẩm PCR . 12


3.6.2. Thạch tinh sạch DNA . 12


3.7. Tách chiết và tinh sạch DNA . 12


3.8. Sự kết buộc 13


3.9. Biến nạp plasmid vào vi khuẩn E. coli 13


3.10. Chuẩn bị plasmid 14


3.11. Giải trình tự . 14


CHưƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN . 15


4.1. Kết quả . 15


4.1.1. Khuếch đại gen prion bằng kỹ thuật PCR 15


4.1.2. Tinh sạch đoạn PCR từ sản phẩm PCR 16


4.1.3. Gắn đoạn DNA vào véc tơ pGEM-T easy 17


4.1.4. Biến nạp vào vi khuẩn E. coli . 17


4.1.5. Giải trình tự sản phẩm 18


4.2. Thảo luận . 18


CHưƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 20


5.1. Kết luận 20


5.2. Đề nghị 20


TÀI LIỆU THAM KHẢO 21


PHỤ LỤC .23