Luận Văn Nghiên cứu virus (tmv, cmv) gây bệnh trên cây ớt tại huyện củ chi, tp. Hồ chí minh bằng kỹ thuật eli

TÓM TẮT KHÓA LUẬN


“Nghiên cứu một số virus (TMV, CMV) gây bệnh trên cây Ớt tại huyện Củ Chi, TP.


Hồ Chí Minh bằng kỹ thuật ELISA và xây dựng quy trình phát hiện CMV bằng kỹ


thuật RT-PCR”


Đề tài thực hiện các nội dung sau:


1. Thu mẫu theo triệu chứng bệnh virus, 5-15 mẫu/ruộng.


2. Xác định tỷ lệ nhiễm các loại virus CMV, TMV tại 4 xã Hòa Phú, Nhuận Đức,


An Nhơn Tây và Trung Lập Thượng, huyện Củ Chi bằng kỹ thuật ELISA.


3. Bước đầu xây dựng quy trình chẩn đoán CMV bằng kỹ thuật RT-PCR.


Kết quả đạt được:


1. Xác định được tỷ lệ nhiễm các loại virus CMV, TMV tại các xã như sau:


- Hòa Phú: CMV: 86,7%; TMV: 76,7%.


- Nhuận Đức: CMV: 93,8%; TMV: 60,0%.


- An Nhơn Tây: CMV: 83,3%; TMV: 66,7%.


- Trung Lập Thượng: CMV: 81,3%; TMV: 87,5%.


2. Xây dựng được quy trình RT-PCR để chẩn đoán CMV.


MỤC LỤC


PHẦN TRANG


Trang tựa


Lời cảm tạ .iii


Tóm tắt iv


Tóm tắt bằng tiếng Anh .v


Danh sách các chữ viết tắt .vi


Mục lục vii


Danh sách các bảng x


Danh sách các hình .xi


Danh sách các biểu đồ .xi


1. MỞ ĐẦU . 1


1.1 Đặt vấn đề . 1


1.2 Mục đích . 1


1.3 Yêu cầu .2


2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3


2.1 Giới thiệu về cây ớt .3


2.1.1 Sơ lược về cây ớt .3


2.1.2 Đặc điểm thực vật học của cây ớt 3


2.1.3 Giá trị dinh dưỡng của ớt .4


2.1.4 Giá trị dược liệu của ớt 5


2.2 Sơ lược các loại bệnh virus trên ớt .6


2.3 Giới thiệu về TMV và CMV .9


2.3.1 Tobacco Mosaic Virus (TMV) .9


2.3.1.1 Nguồn gốc .9


2.3.1.2 Phân loại .9


2.3.1.3 Cấu trúc 9


2.3.1.4 Môi giới truyền bệnh 11


2.3.1.5 Triệu chứng 11


2.3.1.6 Biện pháp kiểm soát . 12


2.3.2 Cucumber Mosaic Virus (CMV) 13


2.3.2.1 Nguồn gốc . 13


2.3.2.2 Phân loại . 14


2.3.2.3 Cấu trúc 14


2.3.2.4 Môi giới truyền bệnh 15


2.3.2.5 Triệu chứng . 16


2.3.2.6 Biện pháp kiểm soát 16


2.4 Các phương pháp chẩn đoán virus gây bệnh thực vật thường sử dụng 17


2.4.1 Phương pháp cây chỉ thị . 17


2.4.2 Phương pháp chẩn đoán bằng chỉ thị màu . 18


2.4.3 Phương pháp chẩn đoán bằng kính hiển vi điện tử 18


2.4.4 Phương pháp ELISA . 19


2.4.5 Phương pháp RT-PCR .20


2.4.5.1 Kỹ thuật PCR 20


2.4.5.2 Kỹ thuật RT-PCR 21


2.5 Một số kết quả nghiên cứu trong và ngoài nước về bệnh do TMV và CMV


gây ra trong thời gian gần đây 25


2.5.1 Ở nước ngoài . 25


2.5.2 Ở Việt Nam . 25


3. VẬT LIỆU VÀ PHưƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26


3.1 Thời gian và địa điểm thực hiện .26


3.2 Vật liệu .26


3.2.1 Dụng cụ 26


3.2.2 Hóa chất dùng trong kỹ thuật ELISA phát hiện TMV và CMV 26


3.2.3 Hóa chất dùng trong kỹ thuật RT-PCR để phát hiện CMV .27


3.2.3.1 Ly trích RNA 27


3.2.3.2 Tổng hợp cDNA .27


3.2.3.3 Thực hiện phản ứng PCR khuyếch đại các phân tử cDNA 28


3.3 Phương pháp nghiên cứu 28


3.3.1 Nội dung nghiên cứu 28


3.3.2 Phương pháp điều tra và lấy mẫu .28


3.3.3 Phát hiện TMV và CMV bằng kỹ thuật DAS-ELISA .29


3.3.4 Phát hiện CMV bằng RT-PCR 31


TM

3.3.4.1 Ly trích RNA theo Aurum Total RNA Mini Kit (Biorad) 31


3.3.4.2 Khuếch đại RNA bằng RT – PCR 32


3.3.4.3 Điện di trên gel agarose 34


4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .35


4.1 Đánh giá tình hình nhiễm TMV và CMV bằng ELISA 35


4.1.1 Tỷ lệ nhiễm TMV và CMV trên tổng số mẫu điều tra 35


4.1.2 Tỷ lệ các mẫu nhiễm hỗn hợp virus TMV và CMV so với các mẫu


nhiễm CMV hay TMV .36


4.1.3 Tỷ lệ nhiễm TMV và CMV tại các xã 37


4.1.4 Tỷ lệ nhiễm TMV và CMV theo từng giống ớt 38


4.1.5 Tỷ lệ nhiễm TMV và CMV theo triệu chứng 38


4.1.6 Tỷ lệ nhiễm TMV và CMV theo độ tuổi .39


4.2 Phát hiện CMV bằng kỹ thuật RT-PCR .39


5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 42


6. TÀI LIỆU THAM KHẢO .43


ix