Báo Cáo Nghiên cứu tách dòng, xác định trình tự và phân tích gen mã hóa kháng nguyên VP1 của virus Lở Mồm Lo

MỤC LỤC

ĐẶT VẤN ĐỀ . 1
I. TỔNG QUAN TÀI LIỆU . 2
1.1. Giới thiệu chung. 2
1.2. Tình hình bệnh LMLM trên thế giới và Việt Nam trong những năm gần đây 3
1.2.1. Tình hình bệnh LMLM trên thế giới 3
1.3. Đại cương về bệnh lở mồm long móng. 6
1.3.1. Tên gọi và đặc điểm chung. 6
1.3.2. Đặc tính sinh học của virus LMLM 7
1.3.2.1. Hình thái và cấu tạo 7
1.3.2.2. Phân loại 7
1.3.3. Khả năng tồn tại của mầm bệnh trong điều kiện tự nhiên 8
1.3.4. Đặc tính gây bệnh 9
1.3.5. Đường xâm nhập của virus và phương thức lây lan 9
1.3.6. Các phương pháp chẩn đoán bệnh 10
1.3.6.1. Chẩn đoán lâm sàng. 10
1.3.6.2. Chẩn đoán trong phòng thí nghiệm . 11
1.3.6.3. Phương pháp chẩn đoán virus học. 11
1.3.6.4. Phương pháp chẩn đoán huyết thanh học. 12
1.4 Gen mã hóa protein VP1 12
II. ĐỐI TƯỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . 14
2.1. Đối tượng nghiên cứu và bệnh phẩm . 14
2.2. Vật liệu 14
2.2.1. Sinh phẩm . 14
2.2.2. Hóa chất 14
2.3. Phương pháp nghiên cứu 14
2.3.1.Phương pháp tách chiết RNA tổng số 14
2.3.2. Phương pháp khuếch đại gen bằng RT-PCR 15
2.3.2.1. Tạo cDNA . 15
2.3.2.2. Khuếch đại gen mã hóa VP1 bằng RT-PCR 16
Thành phần 16
Thể tích 16
2.3.3. Phương pháp tạo dòng gen 16
2.3.3.1. Phương pháp gắn sản phẩm RT- PCR vào vector tách dòng. 16
2.3.3.2. Phương pháp biến nạp DNA plasmid tái tổ hợp vào tế bào E. coli chủng DH5a . 17
2.3.3.3. Phương pháp tách chiết DNA plasmid từ vi khuẩn E. coli 17
2.3.4. Phương pháp thiết kế mồi để khuếch đại gen VP1 18
III. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN . 19
3.1 Tách chiết được RNA tổng số của virus LMLM từ mẫu bệnh phẩm . 19
3.2. Thiết kế được các cặp mồi đặc hiệu để khuếch đại và tách dòng gen mã hóa protein VP1. 20
3.3. Khuếch đại gen mã hóa protein VP1 bằng phương pháp RT-PCR. 21
3.4. Tách dòng xác định trình tự gen mã hóa protein VP1. 22
3.4.1 Tạo dòng vector tái tổ hợp mang gen VP1 22
3.4.2 Giải trình tự gen mã hóa protein VP1 25
CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 33
4.1. Kết luận 33
4.2. Đề xuất: 33