Thạc Sĩ Nghiên cứu sự đa dạng sinh học của một số chủng xạ khuẩn thuộc chi Streptomyces phân lập tại Thái Ng

MỤC LỤC

Trang

Lời cam đoan i Lời cảm ơn . ii Mục lục . iii Danh mục các kí hiệu, viết tắt vi Danh mục các bảng vii Danh mục các hình vẽ . viii ĐẶT VẤN ĐỀ .1
Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3
1.1. ĐẠI CƯƠNG VỀ XẠ KHUẨN .3
1.1.1. Vị trí phân loại và sự phân bố của xạ khuẩn trong tự nhiên .3
1.1.2. Đặc điểm sinh học của xạ khuẩn .4
1.1.3. Đặc điểm xạ khuẩn chi Streptomyces .6
1.2. CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN LOẠI XẠ KHUẨN 7
1.2.1. Phương pháp phân loại truyền thống 7
1.2.2. Phương pháp phân loại dựa vào chỉ thị phân tử gene 16S rRNA 9
1.3. SINH TỔNG HỢP CHẤT KHÁNG SINH TỪ XẠ KHUẨN .12
1.3.1. Cơ chế sinh tổng hợp các chất kháng sinh 12
1.3.2. Các yếu tố ảnh hưởng đến sinh tổng hợp chất kháng sinh 13
1.3.3. Tách chiết chất kháng sinh 15
1.4. XẠ KHUẨN ỨNG DỤNG TRONG BẢO VỆ THỰC VẬT 16
1.4.1. Vi nấm là nguyên nhân chủ yếu gây ra các bệnh hại cây trồng 16
1.4.2. Xạ khuẩn chống nấm gây bệnh thực vật .17
1.5. XẠ KHUẨN ỨNG DỤNG TRONG BẢO VỆ MÔI TRƯỜNG .19

iii


1.5.1. Tuyển chọn xạ khuẩn sinh enzyme .19
1.5.2. Một số enzyme chủ yếu ứng dụng trong bảo vệ môi trường 20
Chương 2 : VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .23
2.1. VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU .23
2.1.1. Đối tượng nghiên cứu 23
2.1.2. Vi sinh vật kiểm định 23
2.2. HÓA CHẤT, THIẾT BỊ VÀ MÔI TRƯỜNG .23
2.2.1. Hóa chất 23
2.2.2. Dụng cụ và thiết bị 24
2.2.3. Môi trường nghiên cứu 24
2.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26
2.3.1. Phương pháp phân lập và tuyển chọn xạ khuẩn 26
2.3.2. Phương pháp đếm số lượng tế bào 26
2.3.3. Phương pháp xác định hoạt tính kháng sinh .27
2.3.4. Phương pháp xác định hoạt tính enzyme 28
2.3.5. Phương pháp xác định khả năng chịu nhiệt của enzyme 28
2.3.6. Phương pháp nghiên cứu các đặc điểm sinh học của xạ khuẩn 28
2.3.7. Phương pháp xác định trình tự đoạn gene 16S rRNA 30
2.3.8. Nghiên cứu bước đầu quá trình lên men sinh tổng hợp kháng sinh 33
2.3.9. Phương pháp tách chiết chất kháng sinh .33
2.3.10. Xác định ảnh hưởng của dịch nuôi cấy đến khả năng nảy mầm của hạt 34
2.3.11. Phương pháp xử lý số liệu .34
Chương 3 : KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .35
3.1. SỰ PHÂN BỐ VÀ TÍNH ĐA DẠNG SINH HỌC CỦA XẠ KHUẨN 35
3.1.1. Sự phân bố của xạ khuẩn trong đất .35


3.1.2. Tính đa dạng sinh học của xạ khuẩn .36
3. 2. Hoạt tính kháng sinh và chọn lọc chủng xạ khuẩn có HTKS cao .37
3.2.1. Hoạt tính kháng sinh của các chủng xạ khuẩn phân lập .37
3.2.2. Tuyển chọn các chủng xạ khuẩn có hoạt tính kháng sinh cao 41
3.3. ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC VÀ PHÂN LOẠI 2 CHỦNG HT17.8 VÀ HT19.1 .44
3.3.1. Đặc điểm hình thái 2 chủng xạ khuẩn HT 17.8 và HT19.1 44
3.3.2. Đặc điểm nuôi cấy .45
3.3.3. Đặc điểm sinh lý, sinh hóa 46
3.3.4. Phân loại 2 chủng xạ khuẩn HT17.8 và HT19.1 .51
3.4. NGHIÊN CỨU SINH TỔNG HỢP VÀ MỘT SỐ TÍNH CHẤT CỦA CHẤT KHÁNG SINH CHỦNG HT17.8 VÀ HT19.1 .59
3.4.1. Nghiên cứu sinh tổng hợp chất kháng sinh .59
3.4.2. Tách chiết và xác định một số tính chất của chất kháng sinh chủng HT17.8 .62
3.5. TUYỂN CHỌN XẠ KHUẨN CÓ HOẠT TÍNH ENZYME .64
3.5.1. Hoạt tính enzyme của xạ khuẩn 64
3.5.2. Khả năng chịu nhiệt của enzyme 66
3.6. BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA CKS TRONG DỊCH NUÔI CẤY CHỦNG HT17.8 VÀ HT19.1 TỚI KHẢ NĂNG NẢY MẦM CỦA HẠT 68
KẾT LUẬN .71
KIẾN NGHỊ 72
TÀI LIỆU THAM KHẢO .73