Luận Văn Nghiên cứu sự đa dạng di truyền của nấm Metarhizium anisopliae dựa v̀o trình tự gen Pr1 v̀ vùng rDN

MỤC LỤC


CHưƠNG TRANG


Trang tựa


Lời cảm tạ .iii


Tóm tắt iv


Mục lục v


Danh śch ćc chữ viết tắt .viii


Danh śch ćc bảng .ix


Danh śch ćc hình x


̀

1. MƠ ĐÂU 1̉


1.1.Đặt vấn đề . 1


1.2.Mục tiêu v̀ yêu cầu đề t̀i 2


1.2.1. Mục tiêu 2


1.2.2. Yêu cầu đề tai 2̀


1.3.Đối tượng nghiên cứu .2


2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3


2.1. Giơi thiêu nấ m Metarhizium anisopliae .3́ ̣


2.2. Sơ lược về phương thức xâm nhiễm của nấm ký sinh trên côn trùng. .6


2.3. Hoạt t́nh sinh học .7


2.4. Hiệu quả phòng trừ sâu hại bằng chế phẩm nấm


2.5. Một số nghiên cứu trong nước v̀ ngòi nước về nấm Metarhizium anisopliae


v̀ những nấm ký sinh côn trùng kh́c ứng dụng để phòng trừ sâu hại. .8


2.5.1. Nghiên cứu trong nước .8


2.5.2. Nghiên cứu ngòi nước .9


2.6. Giơi thiêu gen Pr1 10́ ̣


2.7. Vai tro cua Protease Pr1 . 10̀ ̉


2.8.Tông quan về ITS-rDNA . 10̉


2.8.1. Giơi thiêu về vung rDNA va vung ITS 10́ ̣ ̀ ̀ ̀


2.9. Môt số nghiên cưu trong nươc va nươc ngoai về sư đa dang cua nấ m ̣ ́ ́ ̀ ́ ̀ ̣ ̣ ̉


Metarhizium anisopliae dưa vao gen Pr1 v̀ vùng rDNA-ITS . 12̣ ̀


2.9.1. Nghiên cưu nươc ngoai . 12́ ́ ̀


2.9.2. Nghiên cưu trong nươc 14́ ́


2.10. Phương phap phat hiên gen Pr1 v̀ vùng rDNA-ITS . 14́ ́ ̣


3. VẬT LIỆU VÀ PHưƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . 16


3.1. Thời gian v̀ địa điểm . 16


3.1.1. Thời gian . 16


3.1.2. Địa điểm 16


3.2. Vật liệu v̀ hó chất . 16


3.2.1. Vật liệu 16


3.2.2. Hó chất 17


3.2.3. Ćc thiết bị ch́nh 17


3.3.Nội dung nghiên cứu . 18


3.4. Phương ph́p nghiên cứu 18


3.4.1.Kiêm tra DNA tông số đươc ly trich tư cac dong nấ m ̉ ̉ Metarhizium

̣

́ ̀ ́ ̀


anisopliae . 18


3.4.2. Khuếch đại gen Pr1 . 18


3.4.3. Khuế ch đai vung rDNA-ITS .21̣ ̀


3.5. Tiế n hanh giai trinh tư gen gây đôc Pr1 v̀ vùng ITS 22̀ ̉ ̀ ̣ ̣


̉

3.6. Tinh sach san phâm PCR 22̣ ̉


3.7. Tinh sạch sản phẩm đọc trình tự .24


3.8. Phương phap phân tich trinh tư 24́ ́ ̀ ̣


4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .26


4.4. DNA cua cac mâu nấ m Metarhizium anisopliae đươc dung trong nghiêñ

̣

̉ ́ ̀

cưu .26́


4.5. Kế t qua tinh sach DNA tông số 28̉

̣

̉


4.6. Kế t qua khuế ch đai vung ITS1-5.8S-ITS2. 28̉ ̣ ̀


4.7. Kế t qua giai trinh tư vung ITS1-5.8S-ITS2 29̉ ̉ ̀ ̣ ̀


4.8. Kế t quả khuếch đại gen Pr1 .36


4.9. Kế t qua đoc trinh tư gen Pr1 36̉ ̣ ̀ ̣


5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 42


5.4. Kết luận 42


5.4.2. Ph́t hiện v̀ đọc trình tự gen Pr1 .42


5.4.3. Ph́t hiện v̀ đọc trình tự vùng rDNA-ITS 42


5.5. Đề nghị .43


5.6. Hạn chế của đề t̀i .43


6. TÀI LIỆU THAM KHẢO 44


7. PHỤ LỤC .47


DANH SÁCH CÁC BẢNG


BẢNG TRANG


Bảng 2.1 Giơi thiêu nấ m Metarhizium anisopliae .3́ ̣


Bảng 3.1 Nguồ n nấ m Metarhizium anisopiae đươc thu thâp ơ môt số đia ̣ ̣ ̉ ̣ ̣


phương dung trong thi nghiêm 16̀ ́ ̣


Bảng 3.2 Th̀nh phần của phản ứng PCR khuếch đại gen Pr1 vơi căp primer ́ ̣


METPR1/METPR4 . 19


Bảng 3.3 Th̀nh phần của phản ứng PCR khuếch đại gen Pr1 vơi căp primer ́ ̣


METPR2/METPR5 .20


Bảng 3.4 Th̀nh phần của phản ứng PCR khuếch đại gen vùng rDNA -ITS .21


Bảng 3.5 Th̀nh phần của phản ứng đọc trình tự 23


Bảng 4.1 Ćc ngùn nấm Metarhizium anisopliae trên genbank đươc dung đê ̉

̣

̀


so sanh trinh tư vung rDNA-ITS .30́ ̀ ̣ ̀


Bảng 4.2 Ma trân khoang cach giưa cac dong nấ m Metarhizium anisopliae trong̣ ̉ ́ ̃ ́ ̀


nươc khi dưa vao trinh tư vung rDNA-ITS .31́ ̣ ̀ ̀ ̣ ̀


Bảng 4.3 Ma trân khoang cach giưa cac dong nấ m Metarhizium anisopliae trong̣ ̉ ́ ̃ ́ ̀


nươc va trên thế giơi dưa vao trinh tư vung rDNA-ITS .33́ ̀ ́ ̣ ̀ ̀ ̣ ̀


Bảng 4.4 Ćc ngùn nấm Metarhizium anisopliae trên genbank đươc dung đê so ̉

̣

̀


śnh trình tự gen Pr1 .37


Bảng 4.5 Ma trân khoang cach giưa cac dong nấ m Metarhizium anisopliae trong̣ ̉ ́ ̃ ́ ̀


nươc khi dưa vao trinh tư gen Pr1 38́ ̣ ̀ ̀ ̣


Bảng 4.6 Ma trân khoang cach giưa cac dong nấ m Metarhizium anisopliae trong̣ ̉ ́ ̃ ́ ̀


nươc va trên thế giơi dưa vao trinh tư gen Pr1 40́ ̀ ́ ̣ ̀ ̀ ̣


DANH SÁCH CÁC HÌNH


HÌNH TRANG


Hình 2.1 Nấm Metarrhizium anisopliae ký sinh trên những côn trùng kh́c


nhau 5


Hình 2.2 Sơ đồ cua cac vung trên rDNA . 12̉ ́ ̀


Hình 3.1 Sơ đồ primer đươc sư dung đê khuế ch đai gen Pr1 18̉

̣ ̣ ̣

̉


Hình 3.2 Sơ đồ primer đươc sư dung đê khuế ch đai vung ITS .21̉

̣ ̣ ̣

̉ ̀


Hình 3.3 Nhưng phương phap đươc sư dung trong phân tich trình tự 24̃ ́ ̣ ̉ ̣ ́


Hình 3.4 Sơ đồ phân tich trinh tư co đô tương đồ ng cao .25́ ̀ ̣ ́ ̣


Hình 4.1 DNA tổng số của nấm Metarrhizium anisopliae 26


Hình 4.2 Sơ đồ tinh sach DNA tông số cua cac mâu nấ m Metarhizium̉ ̃

̣

̉ ́


anisopliae đươc sư dung trong nghiên cưu .27̣ ̉ ̣ ́


Hình 4.3 DNA tông số cua nấ m Metarhizium anisopliae đươc tinh sach .28̉

̣ ̣

̉


Hình 4.4 Hình khuếch đại vùng rDNA-ITS 28


Hình 4.5 Cây ph́t sinh lòi giữa ćc dòng Metarhizium anisopliae trong nước


dựa v̀o trình tự vùng rDNA-ITS 32


Hình 4.6 So sanh quan hê giữa ćc dòng Metarhizium anisopliae trong nước v̀ ́ ̣


trên thế giới dưa vao trinh tư vung rDNA-ITS 34̣ ̀ ̀ ̣ ̀


Hình 4.7 Hình khuếch đại gen Pr1 .36


Hình 4.8 Cây ph́t sinh lòi giữa ćc dòng Metarhizium anisopliae trong nước


dựa v̀o trình tự gen Pr1 39


Hình 4.9 So sanh quan hê giữa ćc dòng Metarhizium anisopliae trong nước v̀ ́ ̣


trên thế giới dưa vao trinh tư gen Pr1 .41̣ ̀ ̀ ̣