Luận Văn Nghiên cứu sự đa dạng di truyền của nấm Metarhizium anisopliae dựa vào trình tự gen Pr1 và vùng rDNA

TÓM TẮT​

Đề tài nghiên cứu: “Nghiên cứu sự tính đa dạng di truyền của nấm Metarhizium anisopliae dựa vào trình tự gen Pr1 và vùng rDNA-ITS “ được thực hiện từ ngày 26 tháng 3 năm 2007 đến ngày 31 tháng 8 năm 2007 tại trường Đại Học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh.
Đề tài do Trần Nhật Nam thực hiện dưới sự hướng dẫn của ThS. Võ Thị Thu Oanh và TS. Lê Đình Đôn.
Đối tượng nghiên cứu là nấm Metarhizium anisopliae ký sinh trên côn trùng gây hại. Đây là giống nấm có hoạt tính tiêu diệt côn trùng mạnh. Mục đích đề tài nhằm nghiên cứu sự đa dạng về mặt di truyền giữa các dòng nấm dựa trên cơ sở trình tự nucleotide của gen Pr1 và vùng rDNA-ITS
Kết quả thu được như sau:
- Xác định được những dòng nấm Metarhizium anisopliae sử dụng trong nghiên cứu thuộc dòng Metarhizium anisopliae var. anisopliae.
- Phát hiện gen Pr1 ở trên 10 dòng nấm Metarhizium anisopliae. Tiến hành giải trình tự gen Pr1 của10 mẫu nấm. Kích thước của gen Pr1 ở 7 mẫu nấm là 1091bp.
- Có sự khác biệt về mặt di truyền giữa các dòng Metarhizium anisopliae trong nước và giữa các dòng trong nước với các dòng trên genbank.Tỉ lệ tương đồng giữa các dòng trong nước khoảng 95-100%, và giữa các dòng trong nước so với các dòng trên thế giới là 94-99% khi so sánh trình tự gen Pr1
- Phát hiện được 4 vị trí đột biến ở 2 dòng BXDTG và RBCQ9 so với những dòng còn lại. Những đột biến này đều xảy ra ở vùng ITS1.
- Có sự bảo tồn cao trong vùng 5.8S và vùng ITS2 giữa những dòng nấm Metarhizium anisopliae được sử dụng trong đề tài. Tỉ lệ tương đồng giữa những dòng trong nước là 99-100% và giữa các dòng trong nước với các dòng trên genbank là 92-100% khi so sánh trình tự vùng rDNA-ITS.

1. MỞ ĐẦU 1
1.1. Đặt vấn đề 1
1.2. Mục tiêu và yêu cầu đề tài 2
1.2.1. Mục tiêu 2
1.2.2. Yêu cầu đề tài 2
1.3.Đối tượng nghiên cứu 2
2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3
2.1. Giới thiệu nấm Metarhizium anisopliae 3
2.2. Sơ lược về phương thức xâm nhiễm của nấm ký sinh trên côn trùng. 6
2.3. Hoạt tính sinh học 7
2.4. Hiệu quả phòng trừ sâu hại bằng chế phẩm nấm
2.5. Một số nghiên cứu trong nước và ngoài nước về nấm Metarhizium anisopliae và những nấm ký sinh côn trùng khác ứng dụng để phòng trừ sâu hại. 8
2.5.1. Nghiên cứu trong nước 8
2.5.2. Nghiên cứu ngoài nước 9
2.6. Giới thiệu gen Pr1 10
2.7. Vai trò của Protease Pr1 10
2.8.Tổng quan về ITS-rDNA 10
2.8.1. Giới thiệu về vùng rDNA và vùng ITS 10
2.9. Một số nghiên cứu trong nước và nước ngoài về sự đa dạng của nấm Metarhizium anisopliae dựa vào gen Pr1 và vùng rDNA-ITS 12
2.9.1. Nghiên cứu nước ngoài 12
2.9.2. Nghiên cứu trong nước 14
2.10. Phương pháp phát hiện gen Pr1 và vùng rDNA-ITS 14
3. VẬT LIỆU VÀ PHưƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16
3.1. Thời gian và địa điểm 16
3.1.1. Thời gian 16
3.1.2. Địa điểm 16
3.2. Vật liệu và hoá chất 16
3.2.1. Vật liệu 16
3.2.2. Hoá chất 17
3.2.3. Các thiết bị chính 17
3.3. Nội dung nghiên cứu 18
3.4. Phương pháp nghiên cứu 18
3.4.1.Kiểm tra DNA tổng số được ly trích từ các dòng nấm Metarhizium anisopliae 18
3.4.2. Khuếch đại gen Pr1 18
3.4.3. Khuếch đại vùng rDNA-ITS 21
3.5. Tiến hành giải trình tự gen gây độc Pr1 và vùng ITS 22
3.6. Tinh sạch sản phẩm PCR 22
3.7. Tinh sạch sản phẩm đọc trình tự24
3.8. Phương pháp phân tích trình tự 24
4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 26
4.4. DNA của các mẫu nấm Metarhizium anisopliae được dùng trong nghiên cứu 26
4.5. Kết quả tinh sạch DNA tổng số 28
4.6. Kết quả khuếch đại vùng ITS1-5.8S-ITS2. 28
4.7. Kết quả giải trình tự vùng ITS1-5.8S-ITS2 29
4.8. Kết quả khuếch đại gen Pr136
4.9. Kết quả đọc trình tự gen Pr136
5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 42
5.4. Kết luận 42
5.4.2. Phát hiện và đọc trình tự gen Pr1 42
5.4.3. Phát hiện và đọc trình tự vùng rDNA-ITS 42
5.5. Đề nghị 43
5.6. Hạn chế của đề tài 43
6. TÀI LIỆU THAM KHẢO 44
7. PHỤ LỤC 47