Thạc Sĩ Nghiên cứu sản xuất bộ sinh phẩm để chẩn đoán nhanh bệnh sốt dengue/ sốt xuất huyết dengue và bệnh v

Đề Án
Nghiên cứu sản xuất bộ sinh phẩm để chẩn đoán nhanh bệnh sốt dengue/ sốt xuất huyết dengue và bệnh viêm đường hô hấp cấp (SARS) ở Việt Nam


Mục lục


Chương I. Tổng quan tài liệu
A. Nghiên cứu virus Dengue gây nên bệnh Sốt Dengue/ Sốt xuất huyết Dengue ở Việt Nam

1.1 Bệnh sốt Dengue và sốt xuất huyết Dengue
1.2 Virus Dengue

B. Nghiên cứu virus corona gây bệnh viêm đường hô hấp cấp SARS ở Việt Nam

1.1 Tình hình nghiên cứu trên thế giới
1.2 Các nghiên cứu tại Việt nam

Chương II Đối tượng và phương pháp nghiên cứu
A. Bộ sinh phẩm chẩn đoán nhanh bệnh Sốt Dengue/ Sốt xuất huyết Dengue

2.1 Đối tượng và vật liệu
2.2 Trang thiết bị
2.3 Phương pháp
2.4 Các phương pháp phân lập và xác định type virus

C. Bộ sinh phẩm chẩn đoán nhanh bệnh Viêm đường hô hấp cấp SARS

2.1 Đối tượng nghiên cứu
2.2 Vật liệu
2.3 Phương pháp

Chương III Kết quả và Bàn luận
A. Kết quả sản xuất bộ sinh phẩm chẩn đóan nhanh bệnh sốt Dengue/ sốt xuất huyết Dengue.

3.1 Nuôi cấy virus Dengue type I (D1), virus Dengue type II (D2), virus Dengue type III (D3) và virus Dengue type IV (D4) trên tế bào muỗi Aedes albopictus dòng C6/36.
3.2 Nghiên cứu qui trình công nghệ biểu hiện, tách chiết, tinh chế kháng nguyên Dengue tái tổ hợp các type.
3.3 Tách dòng và xác định trình tự đọan gen PreM và E của 4 type virus Dengue.
3.4 Thiết kế cặp mồi và xây dựng kế họach tách dòng gen mã hóa kháng nguyên vỏ của virus Dengue các type I, II, III, IV.
3.5 Chế tạo cộng hợp (Gold monoclonal antibodies) gắn kháng nguyên vào giá thể (màng thấm Nitrocellulo membrane)
3.6 Nghiên cứu dung dịch đệm buffer tối ưu dùng trong phản ứng
3.7 Hoàn thiện Bộ sinh phẩm
3.8 Thử nghiệm Bộ sinh phẩm trong phòng thí nghiệm
3.9 ứng dụng Bộ sinh phẩm trong thực địa
3.9.1 Kết quả kiêm tra tại phòng thí nghiệm Sốt xuất huyêt Arbovirus, Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương

B. Kết quả sản xuất Bộ sinh phẩm chẩn đoán nhanh bệnh viêm đường hô hấp cấp (SARS)

3.1 Kháng nguyên tái tổ hợp protein N - SARS-CoV
3.2 Xác định các thông số cơ bản cho bộ sinh phẩm MAC-ELISA chẩn đoán nhiễm virus SARS-CoV
3.3 Thành phần bộ sinh phẩm.
3.4 Phát hiện kháng thể IgM trong huyết thanh bệnh nhân SARS và nhân viên y tế có tiếp xúc trực tiếp với bệnh nhân SARS.

Bàn luận
1 Một phương pháp chẩn đoán sớm trong phòng thí nghiệm có hiệu quả
2 Trong giai đoạn đầu của dịch SARS, một số phương pháp ELISA được giới thiệu
3 Bộ sinh phẩm MAC- ELISA phát hiện sớm nhiễm virus SARS
4 Toàn bộ bệnh nhân được xác định nhiễm virus SARS-CoV trên lâm sàng đã được khẳng định lại khi phát hiện được kháng thể IgM kháng đặc hiệu virus SARS –CoV thông qua phương pháp MAC-ELISA.
5 Sự xuất hiện của KT kháng đặc hiệu virus SARS-CoV trên một số người không có biểu hiện lâm sàng

Kết luận

Lời nói đầu
Trong vòng 15 năm gần đây, nhiều dịch bệnh nguy hiểm ở qui mô khu vực cũng như toàn cầu đã xảy ra và lần đầu tiên gây ảnh hưởng lớn đến nền kinh tế thế giới. Tất cả các bệnh dịch nguy hiểm này (như dịch hạnh ấn Độ vào năm 1994, dịch cúm gia cầm tại Hồng Kông 1997, dịch viêm não Nipah tại Malaysia, dịch SARS hay hội chứng hô hấp cấp tính ở Trung Quốc từ năm 2002 đến 2003, và cúm gia cầm ở vùng Đông Nam á từ năm 2003 đến2007) đều có mầm bệnh từ động vật và phát sinh tại á Châu và dần dà lây lan làm ảnh hưởng đến nền kinh tế thế giới. Với tiến trình toàn cầu hoá hiện nay, chúng tôi thiết nghĩ trong tương lai sẽ xảy ra nhiều dịch bệnh ở tầm mức tương tự. Hơn nữa, do các yếu tố xã hội, văn hoá và nhân khẩu ở Châu á có lẽ vẫn là nơi tiếp tục xuất hiện các dịch bệnh bắt nguồn từ động vật Việc phát hiện ổ dịch trong chương trình “chiến lược dự phòng sớm” tại á châu sẽ giúp chúng ta chủ động phát hiện và ngăn chặn kịp thời các bệnh dịch đã biết đến cũng như các bệnh dịch mới phát sinh. Trong các bệnh dịch mới gần đây, nổi lên có dịch SD/ SXHD và Viêm đường hô hấp cấp SARS Sốt Dengue/ sốt xuất huyết Dengue (SD/ SXHD) là một bệnh nhiễm trùng cấp tính do virus Dengue gây ra. Bệnh không có vacxin và thuốc điều trị. Biểu hiện lâm sàng của SD/ SXHD rất đa dạng từ sốt cao đột ngột kéo dài 2-7 ngày kèm theo triệu chứng đau đầu, đau cơ, đau xương, đau khớp, đau bụng cho tới buồn nôn, phát ban . Sau đó có thể có biểu hiện xuất huyết dưới da, xuất huyết nội tạng (chảy máu cam, chảy máu lợi, nôn ra máu, đi ngoài ra máu .). Ngoài ra còn có thể có thêm các dấu hiệu khác như gan to, sốc, huyết áp hạ và có thể dẫn tới tử vong (Barnes W. J. S. và Rosen L., 1974). Bệnh SD/ SXHD là bệnh do muỗi (Aedes aegypti, Aedes albopictus) [33] truyền vì vậy bệnh thường dễ dàng phát triển thành dịch. Virus Dengue được Sabin phân lập đầu tiên ở Calcuta, ấn độ, New-Guinea và Hawaii (Sabin A. và cs, 1952) . Sau này được xác định là virus Dengue type 1-Hawaii và virus Dengue type 2-New-Guinea. Các type virus Dengue 3 và virus Dengue 4 được Hammon W.M. và cs phân lập ở Philippines vào năm 1956 (Hammon W.M. và cs 1960). Tiếp đó nhiều chủng virus Dengue đã được phân lập từ nhiều vùng khác nhau trên thế giới nhưng đều được xác định là thuộc 4 type huyết thanh nêu trên (Anonymous, 1986).
Tới năm 1997 bệnh SD/ SXHD đã lan rộng trên phạm vi toàn thế giới. Theo Gubler, D.J. (1997) thì hiện nay có tới hơn 2,5 tỷ người đang sống trong khu vực có lưu hành SD/ SXHD và hàng năm có khoảng 100 triệu người mắc bệnh này.
Để có thể phòng chống bệnh một cách hiệu quả thì việc chủ động giám sát huyết thanh học, dịch tễ học, côn trùng học virus Dengue gây nên bệnh sốt Dengue/sốt xuất huyết Dengue là hết sức cần thiết.
Các phương pháp chủ yếu chẩn đoán huyết thanh học của virus Dengue bao gồm: Phản ứng Ngăn ngưng kết hồng cầu (HI), phản ứng kết hợp bổ thể (CF), phản ứng trung hòa giảm đám hoại tử (PRNT), phản ứng miễn dịch hấp phụ gắn enzym phát hiện kháng thể IgM (MAC-ELISA) và phản ứng miễn dịch hấp phụ gắn enzym phát hiện kháng thể IgG (GAC-ELISA), kỹ thuật RT- PCR