Thạc Sĩ Nghiên cứu quy trình công nghệ sản suất chế phẩmMultienzym từ nấm mốc và đánh giá độ an toàn của chú

MỤC LỤC
MỞ ĐẦU . i
1. Lý do chọn đề tài . 1
2.Mục tiêu nghiên cứu . 2
3. Đối tượng và phạm vi nghiên cứu 2
4. Nội dung của đề tài: . 3
CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4
1. Vai trò của enzyme trong chăn nuôi . 4
1.1 Các enzyme tiêu hóa chủ yếu sử dụng trong chăn nuôi 4
1.1.1 --Amylase . 5
1.1.1.1. Đặc tính của enzym α-amylase 5
1.1.1.2. Cơ chế tác dộng của enzym α-amylase . 7
1.1.2 Cellulase 9
1.1.2.1 Hệ enzyme phân giải cellulose . 10
1.1.2.2. Endoglucanase (EC.3.2.1.4,3-Dglucan-glucanolhydrolase hay carboxymethylcellulase viết tắt là CMCase) . 10
1.1.2.3. Exoglucanase (EC.3.2.1.91. 1,4 3 - glucan – celobiohydrolase 11
1.1.2.4. 3-1,4 glucosidase (EC.3.2.1.21 3-1,4 glucosidase hay cellobiase): 11
1.1.2.5. Exoglucohydrolase (EC.3.2.1.74): 1,4 3 -D glucan – glucohydrolase) 12
1.1.3. Xylanase . 12
1.1.3.1. Cấu trúc hoá học của xylan 12
1.1.3.2. Hệ thống enzyme phân giải xylan và sự hình thành tổ
hợp xylanase ở vi sinh vật . 14
1.1.4. Phytase . 16
1.2 Tình hình nghiên cứu sử dụng enzyme trong chăn nuôi . 17
2. Các phương pháp lên men enzyme vi sinh vật 21
2.1. phương pháp lên men chìm 21

ii


2.2. Phương pháp lên men rắn 22
3. Ảnh hưởng của một số yếu tố lên quá trình sinh tổng hợp enzyme 23
3.1. Ảnh hưởng nguồn dinh dưỡng 23
3.2. Ảnh hưởng của các điều kiện nuôi cấy 25
4. Tính an toàn của các chế phẩm enzyme từ Aspegillus . 26
CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . 29
2.1.Vật liệu . 29
2.1.1.Chủng vi sinh vật 29
2.1.2. Môi trường sử dụng trong nghiên cứu 29
2.1.3. Hoá chất . 29
2.1.4. Thiết bị . 30
2.2. Phương pháp nghiên cứu . 30
2.2.1. Phương pháp vi sinh 30
2.2.1.1 Nghiên cứu ảnh hưởng của nguồn tinh bột đến khả năng sinh
amylase trên cơ chất bã sắn của chủng A. oryzae NM1 . 31
2.2.1.2. Ảnh hưởng của độ ẩm ban đầu đến khả năng sinh amylase 31
2.2.1.3. Ảnh hưởng của nồng độ KNO3 và KH2PO4 lên khả năng sinh amylase 32
2.2.1.4 Ảnh hưởng của thời gian lên men đến khả năng sinh amylase . 32
2.2.1.5 Ảnh hưởng của pH đến hoạt động của amylase . 32
2.2.1.6 Ảnh hưởng của nhiệt độ đến hoạt động của amylase 33
2.2.1.7 Ảnh hưởng của lượng giống (bào tử/g) ban đầu đến khả năng sinh amylase . 33
2.3. Xác định ảnh hưởng của H2O2 đến hoạt động của amylase 33
2.4. Phương pháp nghiên cứu enzyme . 34
2.4.1. Xác định hoạt tinh một số loại enzyme thuỷ phân ngoại bào 34
3. Đánh giá độ an toàn của chế phẩm enzyme trên động vật . 40


3.1 Đánh giá độ độc cấp tính 40
3.2. Đánh giá độc tính cấp khi sử dụng enzyme liều cao trong 7-14 ngày . 43
3.3. Đánh giá độc tính chậm khi sử dụng enzyme liều cao trong 90 ngày . 44
3.4. Tính toán và xử lý số liệu . 44
3.5 Các phương pháp khác 45
CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN . 46
3.1 Ảnh hưởng các yếu tố dinh dưỡng đến sinh tổng hợp amylase 46
3.1.1 Nghiên cứu ảnh hưởng của nguồn tinh bột đến khả năng sinh amylase
trên cơ chất bã sắn của chủng A. oryzae NM1 . 46
3.1.2 Ảnh hưởng của độ ẩm ban đầu đến khả năng sinh amylase . 48
3.1.3 Ảnh hưởng của thời gian lên men đến khả năng sinh amylase . 49
3.1.4 Ảnh hưởng của nhiệt độ ban đầu đến khả năng sinh amylase 51
3.1.5 Ảnh hưởng của pH ban đầu đến khả năng sinh amylase 52
3.1.6. Ảnh hưởng của nồng độ KNO3 và KH2PO4 đến khả năng sinh
amylase . 53
3.1.7 Ảnh hưởng của số lượng bào tử ban đầu đến khả năng sinh amylase . 54
3.2 Xây dựng quy trình sản xuất chế phẩm amylase thô 56
3.3 Phối trộn enzyme thô từ chủng A. niger ĐB106 và enzyme thô từ chủng
A. oryzae NM1 . 60
3.4. Đánh giá độ an toàn của chế phẩm enzyme multienzyme trên động vật . 62
3.4.1.Đánh giá cấp độ độc cấp tính . 62 a. Dị ứng da . 62 b. Dị ứng mắt . 63 c. Dị ứng đường thở . 63
3.4.2 Đánh giá độc tính cấp chậm 14 ngày 64
3.4.3. Đánh giá độc tính 90 ngày 64


3.4.4. Kết quả kiểm tra mẫu máu: Kiểm tra tại Khoa huyết học của Bệnh
viện Bạch Mai Hà Nội (Bảng 3.4.4) . 65
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 68
I. KẾT LUẬN 68
II. KIẾN NGHỊ . 68
TÀI LIỆU THAM KHẢO 69