Luận Văn Nghiên cứu mối quan hệ loài của ốc cối ở vùng biển Nam Trung Bộ, Việt Nam dựa vào chỉ thị phân tử 12

Đồ án tốt nghiệp năm 2012
Đề tài: Nghiên cứu mối quan hệ loài của ốc cối ở vùng biển Nam Trung Bộ, Việt Nam dựa vào chỉ thị phân tử 12S mtDNA và Calmodulin


MỤC LỤC
Trang
LỜI CẢM ƠN . i
MỤC LỤC ii
DANH MỤC CÁC BẢNG v
DANH MỤC CÁC HÌNH . vi
LỜI MỞĐẦU vii
Chương 1: Tổng quan tài liệu
1.1 Tổng quan về ốc cối (Conus. spp). 1
1.1.1 Phân loại. . 1
1.1.2 Đặc điểm hình thái . 1
1.1.3 Đặc điểm phân bố . 4
1.1.4 Đặc điểm sinh học , sinh sản . 6
1.1.5 Chếđộdinh dưỡng và phương thức săn mồi . 7
1.2 Tổng quan vềvùng nghiên cứu . 10
1.2.1. Đặc điểm vịtrí địa lý, điều kiện tựnhiên và sinh thái môi trường đảo
Cù Lao Chàm và ven bờQuảng Nam. 10
1.2.2. Đặc điểm vịtrí địa lý, điều kiện tựnhiên, sinh thái và môi trường đảo
Lý Sơn và ven bờQuảng Ngãi . 12
1.2.3. Đặc điểm điều kiện tựnhiên và sinh thái môi trường ven biển Sông
Cầu, Phú Yên . 13
1.2.4. Đăc điểm điều kiện tựnhiên và sinh thái môi trường vịnh Vân Phong,
Khánh Hòa . 14
1.3. Các nghiên cứu di truyền 15
1.3.1. Giới thiệu vềhệgen ti thể . 15
1.3.2. Ứng dụng chỉthịti thểvà chỉthịnhân trong phân loại và xây dựng hệ
thống phát sinh loài ốc cối . 19
iii
1.3.3. Nghiên cứu di truyền ốc cối 20
1.3.3.1. Nghiên cứu mối quan hệtiến hóa . 20
1.3.3.2. Mối liên hệgiữa phát sinh loài và chếđộdinh dưỡng (Conusspp.) . 23
1.3.3.3.Nghiên cứu di truyền ốc cối ởViệt Nam 24
Chương 2: Đối tượng và phương pháp nghiên cứu
2.1. Đối tượng và địa điểm thu mẫu 26
2.2. Sơ đồbốtrí thí nghiệm 1
2.3. Tách chiết DNA . 28
2.3.1. Tách chiết DNA với bộkít Wizard SV genomic DNA purification
System .28
2.3.2. Chuẩn bịgel agarose 28
2.3.3. Điện di và đọc kết quả 29
2.4. Phản ứng PCR . 29
2.4.1. Cơ sởlý thuyết . 29
2.4.2. Tiến hành thực nghiệm. 30
2.5. Giải trình tựgen 32
2.5.1. Cơ sởlý thuyết . 32
2.5.2. Phương pháp tiến hành . 32
2.6. Xửlí sốliệu và xây dựng cây phát sinh loài. 33
Chương 3: Kết quảvà thảo luận
3.1. Kết quả . 38
3.1.1. Đặc điểm hình thái. 38
3.1.2. Tách chiết DNA tổng số . 40
3.1.3. Khuếch đại gen 12S mtDNA và calmodulin . 41
3.1.4. So sánh trình tựgen 12S mtDNA và Calmodulin (DNA bộgen) 42
3.1.5. Xây dựng cây phát sinh loài. 43
iv
3.2. Thảo luận . 51
3.2.1. Sựkhác biệt vềtrình tựgen của các nhóm loài ốccối trên cây phân
loại . 51
3.2.2. Mối quan hệloài ốc cối dựa trên chỉthịphân tử12S mtDNA và
Calmodulin nDNA . 52
3.2.3. Mối quan hệgiữa loài và chếđộdinh dưỡng 56
Chương 4: Kết luận và kiến nghị
4.1. Kết luận 60
4.2. Kiến nghị 61
Tài liệu tham khảo . 62
v
DANH MỤC BẢNG
Bảng 1.1: Các genome ti thểcó các gen mã hóa cho các RNA và protein . 18
Bảng 2.1: Trình tựcác đoạn mồi được sửdụng trong phản ứng PCR 31
Bảng 2.2:Mã sốcác trình tựgen 12S mtDNA, Calmodulin (DNA trong nhân) và
chếđộăn của các loài ốc cối trong nghiên cứu hiện tại và từGenbank 34
Bảng 3.1: Tỷlệtương đồng (khác biệt) di truyền của các loài ốc cối dựa trên gen
12S mtDNA . .42
Bảng 3.2:Tỷlệtương đồng (khác biệt) di truyền của các loài ốc cối dựa trên gen
Calmodulin 42
Bảng 3.3: Các nhóm loài ốc cối trên cây phân loại 12S mtDNA và Calmodulin
nDNA từ2 phương pháp MP và BI. Các loài giống nhau được in đậm. KXĐ: những
loài ởvịtríkhông xác định. Nhóm được phân loại dựa theo chếđộăn (V: ăn giun
biển, M: ăn nhuyễn thể, P: ăn cá, U: chưa biết ). 46
vi
DANH MỤC HÌNH
Hình 1.1: Hình thái vỏcủa một sốloài ốc cối trên thếgiới và ởViệt Nam. . 2
Hình 1.2:Cấu tạo bên ngoài của ốc cối và các thông sốhình thái . 2
Hình 1.3: Các dạng hình thái vỏkhác nhau của ốc cối (Conus spp.) . 3
Hình 1.4: Cấu tạo bên trong của ốc cối. 3
Hình 1.5:Một sốloài ốc cối phân bố ởViệt Nam . 5
Hình 1.6:Vòng đời của ốc cối 7
Hình 1.7data:image/png;base64,iVBORw0KGgoAAAANSUhEUgAAAAEAAAABAQMAAAAl21bKAAAAA1BMVEXh5PJm+yKVAAAAAXRSTlMAQObYZgAAAApJREFUCNdjYAAAAAIAAeIhvDMAAAAASUVORK5CYII=" class="mceSmilieSprite mceSmilie7" alt=":p" title="Stick Out Tongue :p">hương thức săn mồi theo dạng móc câu của ốc cối 8
Hình 1.8: A. Ốc cối sửdụng súc tu (siphon) đểtìm kiếm và vòi hút (proboscis) để
tấn công con mồi (cá); B. Conus textile săn mồi theo dạng móc câu 9
Hình 1.9[IMG]data:image/png;base64,iVBORw0KGgoAAAANSUhEUgAAAAEAAAABAQMAAAAl21bKAAAAA1BMVEXh5PJm+yKVAAAAAXRSTlMAQObYZgAAAApJREFUCNdjYAAAAAIAAeIhvDMAAAAASUVORK5CYII=" class="mceSmilieSprite mceSmilie7" alt=":p" title="Stick Out Tongue :p">hương thức bắt mồi dạng lưới của ốc cối . 9
Hình 1.10: Conus striatus phát hiện con mồi nhờsúc tu (siphon) . 10
và tấn công con mồi (cá) 10
Hình 1.11[IMG]data:image/png;base64,iVBORw0KGgoAAAANSUhEUgAAAAEAAAABAQMAAAAl21bKAAAAA1BMVEXh5PJm+yKVAAAAAXRSTlMAQObYZgAAAApJREFUCNdjYAAAAAIAAeIhvDMAAAAASUVORK5CYII=" class="mceSmilieSprite mceSmilie8" alt="" title="Big Grin ">NA ti thểngười, bao gồm 22 gen tRNA, 2 gen rRNA, và 13 vùng mã
hóa protein. Mũi tên chỉvùng gen được sửdụng trong nghiên cứu hiện tại. . 16
Hình 2.1: Các địa điểm thu mẫu ốc cối Conusspp. . 26
Hình 2.2:Quy trình bốtrí thí nghiệm 1
Hình 2.3:Chu trình nhiệt của phản ứng PCR. . 30
Hình 3.1:Hình thái vỏcủa các loài ốc cối phân bố ởbiển Việt Nam . 38
Hình 3.2:Kết quảđiện di DNA tổng sốcủa các mẫu ốc cối. . 40
Hình 3.3:Kết quảđiện di sản phẩm PCR đoạn gen 12S mtDNA củacác mẫu ốc
cối . 41
Hình 3.4:Kết quảđiện di sản phẩm PCR đoạn gen Calmodulin của một sốmẫu ốc
cối . 41
Hình 3.5: Cây phát sinh loài dựa trên gen 12S mtDNA của ốc cối thu tại vùng biển
Nam Trung Bộ, Việt Nam. 49
vii
Hình 3.6: Cây phát sinh loài dựa trên gen calmodulin của ốc cối thu tại vùng biển
Nam Trung Bộ, Việt Nam. 50
DANH MỤC CÁC TỪVIẾT TẮT
BI Bayesian Interence
BT Bootstrap
Calmodulin CALcium –MODULated proteIN
CO1 Cytochrome c oxidase subunit 1
DNA Deoxyribonucleic acid
M Molluscivorous
MP Maximum Parsimony
mtDNA Mitochondrial DNA
nDNA Nuclear DNA
P Piscivorous
PCR Polymerase chain reaction
PP Posterior Probability
rDNA ribosomal DNA
RNA Ribonucleic acid
V Vermivorous
viii
LỜI MỞĐẦU
Ốc cối là một trong những họđộng vật thân mềm thuộc loài ăn thịt, có nọc
độc, sống chủyếu ởvùng nước nông nhiệt đới. ỞViệt Nam có hơn 76 loài
(Hylleberg và Kilburm, 2003) và khoảng 500 –700 loài được ghi nhận trên toàn thế
giới (Nam và cs, 2009). Vỏcủa các loài ốc cối có màu sắc và hoa văn đẹp nên
thường được khai thác đểlàm đồtrang sức, mỹnghệ, các vật phẩm lưu niệm và còn
là nguồn thực phẩm cao cấp ởmột sốquốc gia như Vanuatu, New Caledonia,
Philippines. Ngoài ra, ốc cối còn là nguồn nguyên liệu sản xuất các loại thuốc chữa
các cơn đau mạn tính, bệnh động kinh, bệnh tim mạch, rối loạn tâm thần, rối loạn
vận động, ung thư và đột quỵ (McIntosh và Jones, 2001)(Olivera, 2002; Terlau và
Olivera, 2004; Puillandre và cs, 2010). Các nghiên cứu lâm sàng và cận lâm sàng
cho thấy độc tố ốc cối có hiệu quảgiảm đau cao gấp 10.000 lần so với morphin mà
không gây nghiện hoặc các phản ứng phụ -điều khó tránh khỏi với tất cảcác loại
thuốc giảm đau hiện nay (Olivera, 1990). Vì những lợi ích kinh tếvà y học đó mà
tình trạng khai thácbừa bãi các loài ốc cối ngày càng gia tăng. Vì vậy, đòi hỏi
những nỗlực của các nhà môi trường biển, nhà khoa học cũng như những chủ
trương, chính sách hợp lý của Nhà nước đểbảo tồn kịp thời, khai thác hợp lý và
phát triển một cách bền vững, đúng đắn nguồn tài nguyên này.
Hiện nay, trên thếgiới đã có nhiều nghiên cứu vềsựđa dạng loài của ốc cối.
ỞViệt Nam, cũng đã có nhiều nghiên cứu về ốc cối như khảo sát, thu thập mẫu
(Hylleberg và Kilburm, 2003), phân loại, mô tảcác đặc điểm hình thái giải phẫu
(Nguyễn Ngọc Thạch, 2002), xác định độc tính và kiểm chứng tính chất của một số
độc tố(http://www.vnio.org.vn/). Ngô Đăng Nghĩa và cs (2010) đã tiến hành khảo
sát, phân loại, mô tảđặc điểm hình thái, xây dựng mối quan hệtiến hóa và khảo sát
độc tính của các loài ốc cối thu tại vùng biển Nam Trung Bộ. Đặng Thúy Bình và cs
(2011) đã nghiên cứu đa dạng sinh học, đặc điểm di truyền và mối quan hệtiến hóa
của các loài ốc cối (Conus spp.) vùng ven biển Nam Trung Bộ, ViệtNam.
Trong đềtài“Nghiên cứu mối quan hệloài của ốc cối ởvùng biển Nam
Trung Bộ, Việt Nam dựa vàochỉthịphân tử12S mtDNA và Calmodulin”
ix
chúng tôi đã kếthừa những đềtài trước, tiếp tục tiến hành các nghiên cứu vềmối
quan hệtiến hóa và chếdộdinh dưỡng của các loài ốc cối. Đềtài cung cấp dữliệu
đầu vàonhằm góp phần vào công tác bảo tồn và lưu giữnguồn gen ốc cối Việt
Nam.
Mục tiêu của đềtài:
- Khảo sát mối quan hệtiến hóa giữa các loài ốc cối thu được ởViêt
Nam dựa trên chỉthịphân tửgen 12S của DNA ti thểvà Calmodulin
của DNA bộgen.
- Xây dựng cây phát sinh loài.
1
CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN
1.1 Tổng quan về ốc cối (Conus spp.)
1.1.1 Phân loại
Họ ốc cối Conidae thuộc liên họConoidea, bộSorbeoconcha, là một trong
những họcó sốlượng lớn trongngành động vật thân mềm. Cho đến nay, trên thế
giới người ta đã xác định được khoảng 700 loài, trong đó chủyếu thuộc giống
Conus.
Hệthống phân loại của ốc cối như sau:
Giới: Animalia
Ngành: Mollusca
Lớp: Gastropoda
Liên họ: Conoidae
Họ: Conidae
Phân họ: Conidae
Giống: Conus
(http://vi.wikipedia.org/wiki/Coninae)
1.1.2 Đặc điểm hình thái
Hiện nay,các nhà khoa học đã xác định được khoảng 500 - 700 loài ốc cối
(Conusspp.) trên toàn thế giới (Nam và cs, 2009; Cunha và cs, 2005). Những loài
này đều có đặc điểm chung là có màu sắc sặc sỡvới những hoa văn rất đẹp. Vỏ
thuôn dài, dày, bằng đá vôi, chắc, nặng, xoắn theo chiều kim đồng hồ. Đầu có một
xúc tu (râu), toàn thân liền trong vỏbao bọc bởi một lớp nhầy. Ốc cối thường sống
ởvùng biển nhiệt đới, ởcác rạnsan hô, một sốđược tìm thấy ởrừng ngập mặn.
Chúng phân bốrất rộng, từvùng dưới triều đến độsâu khá lớn, nhưng thường sống
chui trong các khe kẽrạn san hô ởđộsâu 10 –30 m.
2
Hình1.1: Hình thái vỏcủa một sốloài ốc cối trên thếgiới và ởViệt Nam.
Hàng đầu: Conus ammiralis, Conus aulicus, Conus bandanus, Conus crocatus.
Hàng giữa:Conus dalli, Conus episcopatus, Conus furvus và Conus gloriamaris.
Hàng cuối: Conus immelmani, Conus marmoreus, Conus omaria và Conus
textile.
 Một sốđặc điểm đặc trưng đểphân loại các loài trong giống Conus.
 Các chỉtiêu phân loại dựa vào hình thái vỏ
Thông thường các chỉtiêu dưới đây được sửdụng cho việc phân loại ốc cối
theo Röckelvà cs (1995) và Nguyễn Ngọc Thạch.
Hình 1.2: Cấu tạo bên ngoài của ốc cối và các thông sốhình thái
3
Vỏ của ốc cối thường có 3 dạng hình thái khác nhau: hình nón, hình nón
rộng và hình nón hẹp (hình 1.3). Đây là một trong những chỉ tiêu quan trọng để
phân loại ốc. Loài C. betulinus, C. litteratus và C. leopardus thuộc nhóm ốc có hình
nón rộng. Loài C. capitaneus, C. bandanus và C. marmoreus thuộc nhóm có hình
nón và C. lynceus thuộc nhóm có hình nón hẹp.
Hình 1.3: Các dạng hình tháivỏkhác nhau của ốc cối (Conus spp.)
 Cấu tạo bên trong của ốc cối.
Cấu tạo bên trong của ốc cối gồm những bộphận như mô tảdưới đây:
Hình 1.4: Cấu tạo bên trong của ốc cối. (1. Vòi hút; 2. Súc tu; 3. Mắt; 4. Miệng;
5. Chân).
4
- Vòi hút (Proboscis):Vòi hút là vũ khí săn mồi của ốc cối. Độc tốđược tiêm
vào con mồi bằng các răng chứa trong cáctúirăng chitin. Vòi hút có thểduỗi dài ra
gấp 2 lần cơ thể ốc cối.
- Súc tu (Siphon):Siphon của ốc cối có chức năng như mũi. Đó là một túi có
thểduỗi dài ra và pháthiện con mồi trong môi trường nước xung quanh. Nó cũng
góp phần đưa nước đến mang giúp cho quá trình hô hấp.
- Mắt: Ốc cốicó hai mắt nằm ởhai bên miệng.Hiện vẫn chưa biết được về
khảnăng nhìn của ốc cối hay câu hỏi đặt ra là liệu có đủánh sáng ởcác vùng biển
sâu hay không.
- Miệng: Ốc cối có miệng có thểmởrộng ra phía trước đểnuốt con mồi. Hệ
thống cơ có thểco duỗi đểđưa miệng vào trong vỏ.
- Chân:Chân có cấu tạo bằng cơ giúp ốc cối di chuyển trên các bềmặt.
1.1.3 Đặc điểm phân bố
Các loài ốc cối phân bố chủyếu ởcác vùng biển nhiệt đớivà vùng biển ấm
như Philippines, Indonesia, Australia, Mexico, Florida, Hawaii
Giống ốc cối thường phân bố ởvùng vĩ độgiữa 40
0
Bắc và 40
0
Nam, chủyếu
ởcác vùng biển: Ấn Độ -Thái Bình Dương, Panamic, Caribbean, Peruvian, Tây và
Nam Phi, Địa Trung Hải. Một sốloài có thểphân bố ởvĩ độtrên 40
0
Bắc –Nam
như ởNam Phi, Nam Australia, Nam Nhật Bản và biển Địa Trung Hải. Nhìn chung
ốc cối xuất hiện ởhầu hết các vùng biển nhiệt đới và cận nhiệt đới, nhưng đa dạng
loài chủyếu tập trung ởvùng biển Ấn Độ -Tây Thái Bình Dương(Indo - West
Pacific). Ốc cối được tìm thấy chủyếu ởcác rạn san hô, vùi mình trong cát hoặc ở
dưới các tảng đá hoặc sỏi (Röckelvà cs, 1995). Một vài loài ốc cối sống ởrừng
ngập mặn. Một sốlượng đáng kể ốc cối sống xa bờhoặc ởnhững vùng nước sâu
đến 400 m (Röckelvà cs, 1995). Tuy nhiên cũng có một sốloài cận nhiệt đới được
tìm thấy vùng triều dưới độsâu 10 –30 m và dưới các tản đá vùng triều nông
(Stewart và Gilly, 2005). Chúng có thểđạt mật độphân bốlớn nhất đến 40 cá
thể/m
2
(Kohn và cs, 2001).


Tài liệu tham khảo
A. TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT
1. Đặng Thúy Bình và cs, 2011. Báo cáo bảo tồn và lưu giữnguồn gen các loài
ốc cối (Conusspp.) và cá ngựa thân trắng (Hippocampus kelloggi) ven biển
Nam Ttrung Bộ(Khánh Hòa và Phú Yên).
2. Đặng Thúy Bình và cs, 2011. Đặc điểm phân bốcủa ốc cối (Conus spp.) tại
vịnh Vân Phong -Khánh Hòa. Tạp chí Khoa học –Công nghệThủy sản, số
3/2011.
3. HồQuỳnh Thùy Dương,2003. Sinh học phân tử.190-204.
4. Lê ThịThu Hà, Đặng Thúy Bình, 2010. Nghiên cứu mối quan hệtiến hóa
giữa các loài ốc cối (Conus spp.) ởvùng biển Nam Trung BộViệt Nam.
5. Lê ThịBích Hảo, 2011. Đồán tốt nghiệp “Nghiên cứu mối quan hệloài của
ốc cối (Conus spp.) ởvùng biển Nam Trung BộViệt Nam dựa trên chỉthị
phân tửgen CO1 của DNA ty thể(CO1 mtDNA)”. Trường đại học Nha
Trang.
6. Hoàng ThịLý, 2011.Đồán tốt nghiệp“Nghiên cứu mối quan hệloài của ốc
cối (Conus spp.) ởvùng biển Nam Trung BộViệt Nam dựa trên chỉthịphân
tử16S DNA ty thể(mtDNA)”. Trường đại học Nha Trang.
7. Ngô Đăng Nghĩa và cs, 2010. Báo cáo bảo tồn gen các loài động vật thân
mềm ởViệt Nam.
8. Phạm Thu Thủy và cs, 2011. Xây dựng cây phát sinh chủng loại phân tửcủa
ốc cối Conus spp. ởvùng biển Nam Ttrung BộViệt Nam. Tạp chí khoa học
– Công nghệThủy sản. Số3/2011.
63
B. TÀI LIỆU TIẾNG ANH
9. Bandyopadhyay, P. K., Bradford, J.S. John-Paul, O.,Matthew, T.C., Maren,
W., Baldomero M. O.2008. The mitochondrial genome of Conus textile,
coxI–coxII intergenic sequences and Conoidean evolution. Molecular
Phylogenetics and Evolution. 46: 215-223.
10. Bingham J.P., Jones A, Alewood P.F., Andrews,P.R., Lewis R.J.1996.Conus
venom peptides (conopeptides): inter-species, intra-species and within
individual variation revealed by ionspray mass spectrometry, In: LazaroviciP,
Spiro M, Zlotkin E (Eds.), Biochemical Aspects of Marine Pharmacology,
Alaken Inc , Fort Collins, Co. pp13–27.
11. Blaxter, M., Elsworth, B., Daub, J. 2004. DNA taxonomyof a neglected
animal phylum: an unexpected diversity of tardigrades. Proc. R. Soc. Lond. B
(Suppl.). 271: S189-S192.
12. Cunha R.L., Tenorio M.J., Afonso, C., CastilhoR., Zardoya, R.2008.
Replaying the tape: recurring biogeographical patterns in Cape Verde Conus
after 12 million years. Molecular Ecology.17: 885-901.
13. Cunha, R.L., Castilho,R., Ruber, L., Zardoya, R.2005. Patterns of
Cladogenesis in the Venomous Marine Gastropod Genus Conus from the
Cape Verde Islands. Systematic Biology. 54: 634-650.
14. Duda T.F.,Rolan,E. 2005. Explosive radiation of Cape Verde Conus, a
marine species flock. Molecular Ecology.14, 267-272.
15. Duda T.F. Jr., Chang, D., Lewis, B.D., Lee, T. 2009. Geographic variation in
venom allelic composition and diets of the widespread predatory marine
Gastropod Conus ebraeus. PLoS ONE. 4(7):e6245.
16. Duda T.F. Jr., Lessios, H. A. 2009. Connectivity of populations within and
between major biogeographic regions of the tropical Pacific in Conus ebraeus,
a widespread marine gastropod. Coral Reefs. 28:651–659.
17. Duda T.F. Jr., Palumbi, S.R. 1999. Molecular genetics of ecological
diversification: Duplication and rapid evolution of toxin genes of the
64
venomous gastropod Conus. The Proceedings of the National Academy of
Sciences USA. 96: 6820–6823.
18. Duda T.F.Jr., Palumbi. S. R. 2004. Gene expression and feeding ecology:
evolution of piscivory in the venomous gastropod genus. Conus. Proceedings
of the Royal Society of London. Series B, Biological sciences. 1544:1165-1674.
19. Duda, T.F. Jr., Kohn, A. J. 2005. Species-level phylogeography and
evolutionary history of the hyperdiverse marine gastropod genus Conus.
Molecular Phylogenetics and Evolution.34: 257-272.
20. Duda, T.F. Jr., Kohn, A.J., Palumbi, S.R., 2001. Origins of diverse feeding
ecologies within Conus, a genus of venomous marine gastropods. Biol. J.
Linnean Soc. 73:391-409.
21. Espiritu, D. J. D., Cruz, L.J., Cartier, G.E., Olivera, B.M., 2002. Venomous
gastropods: Conus, conoideans and other neogastropod families. Bolletino
Malacologico Supplement. 4: 147–160.
22. Espiritu, D. J. D., Maren, W., Virginia, D-M., Cartier, G.E., Lourdes, J.C.,
Baldomero, M. 2001. Venomous cone snails: molecular phylogeny and the
generation of toxin diversity. Toxicon. 39: 1899-1916. 81.
23. FranklinJ. B., Fernando S. A., Chalke, B. A. ,Krishnan,K. S.2007. Radular
morphology of Conus (Gastropoda: Caenagastropoda: Conidae) from India.
Molluscan Research.27(3):111–122.
24. Grande, C., Templado, J., Zardoya, R. 2008. Evolution of gastropod
mitochondrial genome arrangements. BMC Evolutionary Biology. 8:61. 15p.
25. Hall, T.A. 1999. BioEdit: Auser-friendly biological sequence alignment
editor and analysis program for Windows 95/98/NT. Nucleic Acid
Symposium Series. 41:95–98.
26. Hebert,P.D.N., Cywinska,A., Ball,S.L., deWaard,J.R. 2003.Biological
identifications through DNA barcodes. Proceedings of the Royal Society of
London. Series B, Biological Sciences. 270:313-321.
65
27. Hong S.B., Cho H.S., Shin H.D, Frisvad J. C., Samson RA. 2006. Novel
Neosartoryaspecies isolated from soil in Korea. International Journal of
Systematic and Evolutionary Microbiology (2006). 56:477–486
28. Huelsenbeck, J., Ronquist,P.F. (2001). MRBAYES: Bayesian inference of
phylogenetic trees. Bioinformatics. 17:754–755.
29. Hylleberg, J and Kilburm, R.N. 2003. Marine Molluscs of Vietnam,
Proceeding of. 16th International Congress and Workshop, Tropical Marine
Molluscs Program (TMMP).
30. Kohn A.J., Omori, M., Yamakawa,H., Koike,Y.2001. Maximal species
richness in Conus: diversity, diet and habitat on reefs of northeast Papua New
Guinea. Coral Reefs.20:25–38
31. Kohn A.J, PR Saunders and S Weiner. 1960. Preliminary studies on the
venom of the marine snail, Conus.Ann. NY Acad. Sci 90:706–725
32. Kohn, A.J., Nishi, M. and Pernet, B.1999.Snail spears and scimitars: A
character analysis of Conus radular teeth. J. Moll Stud.65: 461-481.
33. Lewis R.J.2009. Conotoxins, molecular and therapeutic targets. Prog. Mol.
Subcell. Biol. 46: 45-65.
34. McIntosh J.M., Jone R.M., 2001. Cone venom –from accidental stings to
deliberate injection. Toxicon. 39: 1447 –51.
35. Mueller, R.L. 2006. Evolutionary rates, divergence dates, and the performance
of mitochondrial genes in Bayesian phylogenetic analysis, Systematic
Biology. 55: 289-300.
36. Nam, H.H., Corneli, P.S., Watkins, M., Olivera, B., Bandyopadhyay, P. 2009.
Multiple genes elucidate the evolution of venomous snail-hunting Conus
species. Molecular Phylogenetics and Evolution xxx. xxx–xxx.
37. Nguyen, N.T. 2007. Recently collected shells of Vietnam. L ‘Informator
Piceno & N.N.T. Italy.
38. Olivera B.M. 2002. Conus venom peptides: relections from the biology of
clades and species. Annual Reviewof Ecology and Systematics. 33:25-47.
66
39. Olivera, B.M., Rivier, J., Clark, C., Ramilio, C.A., Corpuz, G.P., Abogadie,
F.C., Mena, E.E., Woodward, S.R., Hillyard, D.R., Cruz, L.J., 1990. Diversity
of Conus neuropeptides. Science 249: 257–263.
40. Page, R.D. 1996. TreeView: an application to display phylogenetic trees on
personal computers. Computer Application Bioscience. 12: 357–358.
41. Puillandre, N., Watkins, M., Olivera, B.M. 2010. Evolution of Conus Peptide
genes: Duplication and positive selection in the A-superfamily. Journal of
Molecular Evolution. [in press].
42. Röckel, D., Korn, W., Kohn, A.J., 1995. Manual of the Living Conidae (Vol.
I: Indo-Pacific Region). Verlag Christa Hemmen, Wiesbaden, Germany.
43. Stewart J. and Gilly W. F. 2005. "Piscivorous Behavior of a Temperate Cone
Snail, Conus californicus". Biological Bulletin.209: 146-153.
44. Stoeckle , M. 2003. Taxonomy, DNA, and the bar code of life. BioScience.
53: 796-797.
45. Swofford, D.L. 2001. PAUP: Phylogenetic analysis using parsimony (and
other methods). Sinauer Associates, Sunderland. MA.
46. Terlau, H., Olivera, B.M. 2004: Conus venoms: a rich source of novel ion
channel-targeted peptides. Physiological Reviews.84:41-68
47. Thompson, J.D., Gibson, T.J., Plewniak, F., Jeanmougin, F., Higgins, D.G.
1997. The Clustal X windows interface: flexible strategies for multiple
sequence alignment aided by quality analysistools. Nucleic Acids Research.
24: 4876–4882.
48. Yaguchi T, Horie Y, Tanaka R, Matsuzawa T, Ito J Nishimura (2007).
Molecular Phylogenetics of Multiple Genes on AspergillusSection Furmigati
Isolated from clinical specimens in Japan. JPn. J. Med. Mycol. Vol. 48.37-46.