Luận Văn Nghiên cứu chế tạo kit thử nhanh trong phân tích urea

CH HƯ ƯƠ ƠN NG G 1 1 . 2
1.1. Enzyme urease (EC 3.5.1.5) 3
1.1.1. Danh pháp quốc tế và phân loại 3
1.1.2. Tính chất vật lý của enzyme urease 3
1.1.3. Tính chất hóa lý của enzyme urease . 6
1.1.4. Trung tâm hoạt động 6
1.1.5. Cơ chế xúc tác 9
1.1.6. Cơ chất của urease 10
1.1.7. Các yếu tố ảnh hưởng đến vận tốc phản ứng của urease . 12
1.2. Các phương pháp thu nhận urease 23
1.2.1. Nguồn thu nhận . 23
1.2.2. Một số phương pháp tách chiết và tinh chế enzyme . 26
1.3. Các phương pháp xác định hoạt tính urease . 27
1.3.1. Xác định hoạt tính urease dựa trên việc định lượng NH3 được giải phóng 29
1.3.2. Xác định hoạt tính urease bằng cách định lượng CO2 được giải phóng . 30
1.4. Ứng dụng của enzyme urease . 31
1.4.1. Trong nông nghiệp 31
1.4.2. Trong thực phẩm . 31
1.4.3. Trong phân tích hóa sinh 31
1.4.4. Trong công nghệ môi trường 32
1.4.5. Trong y học . 32
1.5. Tổng quan về urea . 32
1.5.1. Cấu tạo hóa học của urea . 32
1.5.2. Phát hiện . 33
1.5.3. Công dụng . 34
1.5.4. Mức độ nguy hiểm 35
1.5.5. Các nguồn phát sinh urea . 35
1.5.6. Các phương pháp xác định urea . 39
1.6. Kit thử nhanh trong phân tích urea 46
1.6.1. Tình hình các loại kit thử nhanh ở Việt Nam [52] . 46
1.6.2. Các loại kit phân tích urea . 47
C CH HƯ ƯƠ ƠN NG G 2 2 . 50
2.1. Nguyên liệu 51
2.1.1. Hóa chất 51
2.1.2. Dụng cụ . 51
2.2. Phương pháp nghiên cứu . 52
2.2.1. Sơ đồ nghiên cứu 52
2.2.2. Phương pháp tìm chất chỉ thị màu tối ưu . 52
2.2.3. Phương pháp xác định lượng chất chỉ thị thích hợp cho lên kit . 54
2.2.4. Phương pháp chọn dung môi thích hợp dùng để pha urease . 54
2.2.5. Phương pháp chọn thể tích chấm enzyme phù hợp . 58
2.2.6. Phương pháp nghiên cứu lượng enzyme urease thích hợp cho lên kit . 59
2.2.7. Phương pháp khảo sát giới hạn phát hiện của kit, xây dựng thang màu bán định
lượng urea và đường chuẩnpH 60
2.2.8. Phương pháp xác định thời gian hiện màu của kit 60
2.2.9. Phương pháp xác định thời gian sử dụng của kit . 60
2.2.10. Khảo sát khả năng phát hiện của kit trong mẫu thực 61
2.2.11. Các phương pháp xử lý số liệu . 61
C CH HƯ ƯƠ ƠN NG G 3 3 . 62
3.1. Khảo sát các loại chất chỉ thị màu 63
3.2. Khảo sát lượng chất chỉ thị thích hợp cho lên kit . 65
3.3. Khảo sát dung môi pha urease 68
3.3.1. Khảo sát hoạt tính của enzyme urease theo phương pháp Nessler 68
3.3.2. Khảo sát dung môi dùng để pha urease 70
3.4. Khảo sát lượng enzyme thích hợp cho lên kit 72
3.4.1. Khảo sát thể tích chấm enzyme urease lên kit 72
3.4.2. Khảo sát nồng độ dung dịch enzyme urease cho lên kit . 72
3.5. Khảo sát giới hạn phát hiện của kit, xây dựng thang màu bán định lượng urea và đường
chuẩnpH 76
3.5.1. Xác định khả năng phát hiện của kit . 76
3.5.2. Xây dựng thang màu bán định lượng urea . 77
3.5.3. Xây dựng đường chuẩnpH để định lượng urea 78
3.6. Khảo sát thời gian hiện màu của kit . 83
3.7. Khảo sát thời gian sử dụng của kit 85
3.8. Khảo sát khả năng phát hiện của kit trong mẫu thực 87
3.8.1. Sữa . 87
3.8.2. Nước mắm . 89
3.8.3. Thủy sản 90
C CH HƯ ƯƠ ƠN NG G 4 4 . 95
4.1. Kết luận 96
4.2. Kiến nghị: . 97
T TA À ØI I L LI IE Ệ ÄU U T TH HA AM M K KH HA Ả ÛO O 98