Thạc Sĩ Nghiên cứu chẩn đoán lao kháng thuốc isoniazid bằng phương pháp xác định đột biến trên gen katG và g

MỤC LỤC

MỞ ĐẦU .1
1. Lý do chọn đề tài .1
2. Mục tiêu nghiên cứu 2
3. Nội dung nghiên cứu .2
Chương 1. TÔNG QUAN TAI LIÊU 3
1.1 Tình hình bênh lao .3
1.1.1. Tình hình bệnh lao trên thế giới .3
1.1.2. Tình hình bệnh lao ở Việt Nam .5
1.1.3.Tình hình lao kháng thuốc 7
1.2 Vi khuẩn lao 11
1.2.1. Đặc điểm của vi khuẩn lao .11
1.2.2. Cấu tạo của vi khuẩn lao 12
1.2.3. Cơ chế gây bệnh 13
1.3. Cơ chế kháng thuốc của vi khuẩn lao .14
1.4. Các phương pháp chẩn đoán lao kháng thuốc 15
1.4.1. Các phương pháp xác định kiểu hình 15
1.4.2. Các phương pháp xác định kiểu gen 16
1.5. Chẩn đoán vi khuẩn lao kháng Isoniazid 16
1.5.1. Đặc điểm của hệ gen vi khuẩn lao .18
1.5.2. Gen katG với cơ chế kháng thuốc isoniazid ở vi khuẩn lao 18
1.5.3. Gen inhA với cơ chế kháng thuốc isoniazid ở vi khuẩn lao 18
Chương 2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20
2.1. Đối tượng nghiên cứu .20
2.2. Vật liệu, hóa chất và dụng cụ nghiên cứu 21
2.2.1. Các sinh phẩm hóa chất chính .21
2.2.2. Máy và thiết bị sử dụng trong nghiên cứu .22
2.2.3. Các cặp mồi dùng trong nghiên cứu 22
2.2.4. Vector tách dòng được sử dụng trong nghiên cứu .23
2.3. Phương pháp nghiên cứu 23
2.3.1. Kỹ thuật tách chiết DNA từ các chủng vi khuẩn lao .24
2.3.2.Kỹ thuật PCR - Nhân dòng đoạn gen katG và gen inhA 26


2.3.3. Tinh sạch sản phẩm PCR bằng kit của hãng AccuPrep@ Gel purification kit - Bioneer .27
2.3.4. Kỹ thuật tách dòng gen (cloning) 28
Chương 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 33
3.1. Kết quả tách chiết DNA tổng số .33
3.2. Kiểm tra nồng độ và độ tinh sạch của DNA tổng số 33
3.3. Kết quả nhân dòng đoạn gen katG và gen inhA .35
3.3.1. Kết quả nhân dòng đoạn gen inhA .35
3.3.2. Kết quả nhân dòng đoạn gen katG . 35
3.4. Kết quả tinh sạch sản phẩm PCR .36
3.5. Kết quả biến nạp vector tái tổ hợp vào tế bào khả biến E.coli DH5α 37
3.5.1. Phản ứng gắn gen cần nghiên cứu vào vector pBT .37
3.5.2. Kết quả biến nạp vector tái tổ hợp vào tế bào khả biến E.coli DH5α .38
3.5.3. Kết quả thực hiện phản ứng PCR từ khuẩn lạc .39
3.5.4. Kết quả kiểm tra gen đích .41
3.6. Kết quả xác định trình tự và phát hiện đột biến trên gen katG liên quan đến tính kháng thuốc isoniazid ở các chủng vi khuẩn lao nghiên cứu .43
3.7. Kết quả xác định trình tự gen inhA với 5 mẫu bệnh phẩm nghiên cứu kháng thuốc isoniazid .55
KẾT LUẬN .60
ĐỀ XUẤT .61
TÀI LIỆU THAM KHẢO .62
PHỤ LỤC 67