Thạc Sĩ Khảo sát sự biến đổi 4-allypyrocatechol diacetate và chavibetol acetate thành chavibetol trong tinh

MỞ ĐẦU

Việt Nam nằm trong vùng nhiệt đới ẩm, gió mùa, rất thuận lợi cho thực vật phát triển, trong đó có cây trầu. Ở Thành phố Hồ Chí Minh, trầu trồng nhiều ở Hóc Môn, nổi tiếng là 18 thôn vườn trầu.
Cây trầu có nguồn gốc ở miền Trung và Đông Malaysia, được trồng phổ biến ở các nước nhiệt đới Châu Á, việc trồng trầu gắn liền với tập tục ăn trầu và làm thuốc chữa bệnh trong dân gian. Riêng ở Việt Nam, cây trầu đã đi vào truyền thuyết dân tộc, không thể thiếu trong nền văn hóa dân gian Việt Nam.
Theo đông phương và y học cổ truyền, lá trầu có vị cay, nồng, tính ấm, mùi thơm hắc.
Trong nước, chủ yếu người ta chỉ dựa vào truyền khẩu dân gian để nói lên tác dụng của lá trầu và cũng chỉ mới có vài nghiên cứu về tách chiết tinh dầu từ lá trầu. Cho đến nay, vẫn chưa có công trình nghiên cứu sâu nào về thành phần hóa học và sự chuyển đổi giữa các hợp chất phenolic chính trong tinh dầu lá trầu.
Do đó, đề tài này mong muốn góp phần nghiên cứu sâu hơn về cấu trúc các dẫn xuất phenolic chính trong tinh dầu lá trầu đồng thời khảo sát sự biến đổi của các hợp chất phenolic tùy theo phương thức xử lý lá trước khi chưng cất lá trầu. Thử nghiệm tính kháng oxi hóa của các hợp chất phenolic chính này.

MỤC LỤC

Lời cám ơn i
Danh mục các ký hiệu, các chữ viết tắt . ii
Danh mục các bảng iii Danh mục các hình vẽ, đồ thị iv
Mở đầu . 1
CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN . 2
1.1. Đặc điểm thực vật . 2
1.1.1. Mô tả thực vật 2
1.1.2. Phân bố sinh thái 3
1.2. Thành phần hóa học của cây trầu . 5
1.2.1. Thành phần hoá học của cây trầu . 5
1.2.2. Thành phần hóa học của tinh dầu lá trầu 8
1.2.2.1 Thành phần hợp chất phenolic trong lá trầu được nghiên cứu trên thế giới 8
1.2.2.2. Thành phần hợp chất phenolic trong lá trầu được nghiên cứu tại Việt Nam 9
1.3. Hoạt tính sinh học và công dụng . 12
1.3.1. Hoạt tính sinh học của lá trầu . 12
1.3.2. Công dụng của lá trầu 16
1.3.2.1. Theo y học cổ truyền . 16
1.3.2.2.Theo y học hiện đại 17
1.4 Tổng quan về Catechol O-methyltransferase . 18
1.4.1. Cơ chế phản ứng 18
1.4.2. Cấu trúc tâm hoạt động 20
1.4.3. Độ chọn lọc của phản ứng 20
CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . 26
2.1. Nguyên liệu, hóa chất, dụng cụ và các thiết bị đo đạc . 26
2.1.1. Nguyên liệu . 26
2.1.2. Hóa chất 26
2.1.3. Dụng cụ và các thiết bị đo đạc 27
2.2. Phương pháp nghiên cứu . 29
2.2.1. Trích ly tinh dầu lá trầu bằng phương pháp truyền thống lôi cuốn theo hơi nước 29
2.2.2. Các phương pháp xác định thông số nghiên cứu 30
2.2.2.1.Xác định hàm lượng tinh dầu có trong lá trầu 30
2.2.2.2.Phân tích thành phần hóa học của tinh dầu lá trầu bằng phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ GC-MS . 31
2.2.2.3.Cô lập 4-allylpyrocatechol (APC),chavibetol (CHV) bằng phương pháp sắc ký cột và điều chế dẫn xuất. . 31
2.2.2.4.Định lượng APC trong phần nước còn lại sau khi đã chưng cất lấy tinh dầu lá trầu bằng phương pháp sắc ký lỏng ghép khối phổ LC-MS/MS 33
2.2.2.5. Định lượng chavibetol, chavibetol acetate, 4-allylpyrocatechol diacetate trong tinh dầu bằng phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ GC/MS 34
2.2.3. Theo dõi sự biến đổi của các thành phần phenolic chính trong tinh dầu lá trầu theo các cách xử lý lá trước khi chưng cất . 35
2.2.4. Khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa 38
2.2.4.1. Khảo sát hoạt tính chống oxy hóa in vitro bằng thử nghiệm DPPH. . 38
2.2.4.2. Khảo sát hoạt tính chống oxy hóa in vitro bằng thử nghiệm malonyl dialdehyd 39
CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU . 42
3.1. Thành phần hóa học của lá trầu Hóc Môn . 42
3.2. Khảo sát sự thay đổi của phần trăm chất 1,2 và 3 với cách xử lý lá trầu trước khi chưng cất . 44
3.2.1. Khảo sát sơ bộ sự thay đổi 44
3.2.2. Điều chế các chất chuẩn 45
3.2.2.1. Cô lập APC 45
3.2.2.2. Cô lập Chavibetol 50
3.2.2.3. Điều chế chavibetol acetate và 4-allylpyrocatechol diacetate 54
3.2.3. Xây dựng các đường chuẩn . 58
3.2.3.1. Đường chuẩn của chavibetol . 58
3.2.3.2. Đường chuẩn của chavibetol acetate . 58
3.2.3.3. Đường chuẩn của 4-allylpyrocatechol diacetate . 58
3.2.3.4. Đường chuẩn 4-allylpyrocatechol (APC) . 59
3.2.4. Định lượng sự chuyển đổi hợp chất 3 ra hợp chất 4 và 1 . 59
3.2.4.1. Định lượng ở lá tươi 59
3.2.4.2. Định lượng ở lá khô . 62
3.2.4.3. Định lượng với mẫu chưng cất dưới vi sóng . 64
3.2.5. Nhận định về sự chuyển đổi 66
3.2.5.1. Chưng cất tinh dầu trong nước khử ion 68
3.2.5.2. Chưng cất tinh dầu trong nước không có muối NaCl, nhưng có thêm muối MgCl2.6H2O . 68
3.2.5.3. Ảnh hưởng của pH 70
3.2.6. Lý giải độ chọn lọc của phản ứng metyl hóa . 72
3.3. Kết quả thử hoạt tính sinh học 73
3.3.1. Kết quả thử nghiệm khả năng bắt gốc tự do DPPH 74
3.3.2. Khả năng ức chế peroxy hóa lipid của các mẫu nghiên cứu 75
CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 78
4.1. Kết luận 78
4.1.1. Về mặt hóa học 78
4.1.2. Về hoạt tính sinh học . 79
4.2. Kiến nghị 79
CÁC BÀI BÁO KHOA HỌC ĐÃ CÔNG BỐ CỦA TÁC GIẢ LUẬN ÁN 80
DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO
PHỤ LỤC